疫苗。作者手稿；2017年1月12日PMC提供。
以最终编辑形式发布为：
预防性维修识别码：项目经理4701617
NIHMSID公司：NIHMS741448
巨细胞病毒糖蛋白B（gB）疫苗对少女的安全性和有效性：一项随机临床试验
,1 ,2 ,三 ,4 ,5 ,三 ,4,6 ,4,7 ,2 ,1 ,8 ,9和9
大卫·伯恩斯坦
1辛辛那提儿童医院医疗中心，辛辛那蒂大学，俄亥俄州辛辛那迪
S.托德·卡拉汉
三田纳西州纳什维尔范德比尔特大学医学中心
苏珊·H·伍顿
5德克萨斯州休斯顿德克萨斯大学健康科学中心
凯瑟琳·爱德华兹
三田纳西州纳什维尔范德比尔特大学医学中心
克里斯汀·B·特雷
4德克萨斯大学加尔维斯顿分校
6南卡罗来纳大学医学院，哥伦比亚，南卡罗莱纳州
劳伦斯·斯坦伯里
4德克萨斯大学加尔维斯顿分校
7哥伦比亚大学，纽约长老会医院，纽约市
Shital M.Patel公司
2德克萨斯州休斯顿贝勒医学院
莫妮卡·麦克尼尔
1辛辛那提儿童医院医疗中心，辛辛那蒂大学，俄亥俄州辛辛那迪
1辛辛那提儿童医院医疗中心，辛辛那蒂大学，俄亥俄州辛辛那迪
2德克萨斯州休斯顿贝勒医学院
三田纳西州纳什维尔范德比尔特大学医学中心
4德克萨斯大学加尔维斯顿分校
5德克萨斯州休斯顿德克萨斯大学健康科学中心
6南卡罗来纳大学医学院，哥伦比亚，南卡罗莱纳州
7哥伦比亚大学，纽约长老会医院，纽约市
8赛诺菲巴斯德，Marcy L'Etoile，法国
9艾姆斯公司，马里兰州罗克维尔
通讯作者：David I.Bernstein，医学博士，文学硕士，辛辛那提儿童医院医疗中心，3333 Burnet Ave.Cincinnati，OH 45229，513-636-7625，513-36-7655传真，gro.cmhcc@nietsnreB.divaD公司 - 补充资料
补充。
GUID:AB318F3A-4839-4212-BA5C-E26208088632
摘要
背景
巨细胞病毒（CMV）是先天性感染的主要原因，也是疫苗开发的重要靶点。
方法
CMV血清阴性的12至17岁女孩在0个月、1个月和6个月时接种带有MF59或生理盐水安慰剂的CMV糖蛋白B（gB）疫苗。在整个研究过程中收集血液和尿液，以基于PCR和/或血清转化为非疫苗CMV抗原的CMV感染证据。
结果
402名CMV血清阴性受试者接种了疫苗（195份疫苗，207份安慰剂）。尽管局部和全身不良事件在疫苗组中更为常见，但疫苗总体耐受性良好。疫苗在所有接种者中诱导的gB抗体的gB几何平均滴度为13400 EU；3次给药后，95%CI 1143615700。总的来说，检测到48例CMV感染（21种疫苗，27种安慰剂）。在符合方案的人群中（124种疫苗，125种安慰剂），疫苗效力为43%；95%置信区间：-36；76，P=0.20。最显著的差异是按照方案给药2次后；疫苗效力45%，95%置信区间：-9；72，P=0.08。
结论
该疫苗安全且具有免疫原性。尽管疗效没有达到传统的显著水平，但结果与之前使用相同配方对成年女性进行的研究（Pass等人NEJM 360:1191，2009）一致。
关键词：巨细胞病毒，疫苗，青少年，巨细胞病毒gB
介绍
巨细胞病毒（CMV）是先天性感染和免疫缺陷患者的重要病原体。全球0.5至2.0%的婴儿先天性感染CMV，其中西方国家约0.64%[1]. 在美国，每年约有400人死于先天性巨细胞病毒感染，5000至8000名严重受损的儿童[2,三]. 它是该国引起感音神经性耳聋（SNHL）和发育迟缓的最常见病毒原因[4,5]. 2000年，美国医学研究所发布了一份报告，根据成本节约和健康效益，将预防先天性感染的巨细胞病毒疫苗列为最高优先事项[6]. 2012年举行了一次多学科会议，讨论与巨细胞病毒疫苗开发相关的优先事项[7,8].
CMV疫苗开发的多种方法已被评估，包括减毒活疫苗、质粒DNA疫苗、病毒载体疫苗和亚单位疫苗（在[9,10]). 最近，在移植患者中对两种疫苗进行了评估。一种编码pp65和gB的质粒DNA疫苗与泊洛沙姆佐剂一起被发现可以减少造血细胞移植患者的CMV病毒血症[11]而使用MF59作为佐剂的亚单位gB疫苗可缩短CMV病毒血症的持续时间和抗病毒治疗的持续时间[12]. gB亚单位疫苗在预防年轻女性CMV感染方面也提供了适度（50%）的保护[13].
研制巨细胞病毒疫苗的最重要原因是为了预防先天性巨细胞病毒病。预防先天性巨细胞病毒的一个公认策略是在性行为开始之前对青春期女孩或男孩和女孩进行免疫接种，因为性行为是婴儿期和幼儿期之后的一种重要传播方式[7,8]. 本试验评估了青少年女孩接种gB/MF59疫苗的情况。
方法
参与者和研究设计
本研究是一项随机、双盲、安慰剂对照的II期研究，旨在评估实验性CMV gB/MF59疫苗对健康青春期女性的安全性和有效性。筛选时年龄为12至17岁的健康女性从美国5个地点招募，以获得约400名CMV血清阴性受试者进行疫苗试验（每组200名）。报名于2006年7月26日开始，最后一次受试者访问于2013年6月10日进行。在签署筛查同意书和父母同意书（如果受试者<18岁）后，对受试者进行CMV抗体筛查。CMV血清阴性的受试者随后同意参加疫苗研究（如果<18岁，父母同意），并以1:1的比例随机接受疫苗或生理盐水安慰剂。随机序列使用置换块（随机选择块大小为4或8）。随机列表仅适用于非盲药剂师和疫苗管理员。所有其他现场工作人员、受试者和实验室工作人员对治疗任务一无所知。为了参与，如果受试者性活跃，他们必须使用有效的节育方法。受试者也不可能正在接受或有接受任何影响免疫系统的药物或治疗的历史，不可能在3个月内接受过输血或血液制品，或有积极的或以前的药物滥用。有关纳入/排除标准的完整描述，请参见补充表1受试者接受了3剂疫苗或生理盐水安慰剂，分别在0、1和6个月的时间表中通过三角肌肌肉注射（IM）。在筛查时、研究第0天、第6个月、第7个月和第7个月中每三个月收集一次血清，并在第7个月末的两年内收集一次，用聚合酶链反应（PCR）分析巨细胞病毒的脱落情况，用gB吸附法评估血清转化为非疫苗巨细胞病毒抗原的情况。在研究第0天、第1个月、第2个月、6个月、7个月收集尿液，并在第7个月后每三个月收集一次尿液，以通过PCR评估CMV的脱落情况。
如果受试者在研究第0天当天或之后的任何时候血清转化或PCR检测到巨细胞病毒，他们有资格进入研究的脱落部分。受试者及其父母（如果受试者<18岁）签署了另一份知情同意书，详细说明了研究的这一部分。脱落子研究包括每月随访4个月，获取尿液、唾液和血液样本，以通过PCR定量CMV，然后每隔一个月随访8个月，以达到相同目的。
研究目标
疗效分析的主要目的是保护患者免受全身感染，即通过PCR检测尿液或血液中的巨细胞病毒。次要疗效目标是防止CMV感染，定义为全身感染或血清转化为非疫苗CMV抗原。主要安全性结果是接种疫苗后7天内局部和全身反应的发生率，接种疫苗后30天内（±2天）发生的不良事件（AEs），以及在整个研究过程中的任何时间观察到的严重不良事件（SAEs）。
其他次要结果包括通过尿液和血液中CMV复制的持续时间和数量测量感染受试者的CMV脱落，以及通过CMV gB酶联免疫分析（ELISA）测量CMV抗体。
疫苗
CMV gB/MF59是人巨细胞病毒（Towne株）在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中表达的一种亚单位gB糖蛋白。CMV gB/MF59疫苗（20μg CMV糖蛋白gB和10.75 mg MF59）由赛诺菲·巴斯德提供，作为两个单独的小瓶成分，在给药前合并。20μg剂量基于之前的评估[14]. 无菌盐水（0.9%氯化钠）用作安慰剂。
安全性评估
在接种当天和每次接种后的6个随访日内，收集局部和全身症状，包括体温，并由受试者在记忆辅助器上记录。每次给药后30天内，收集所有不良事件。在研究期间收集了SAE。安全监测委员会监测了研究进展，并解决了任何具体的安全问题。未经请求的AE被编码为监管活动术语医学词典（MedDRA）14.0版或更高版本的术语。
免疫原性评估
在基线检查时、第三次疫苗接种前6个月以及第7、13、19、25和31个月时采集血液进行免疫原性检测。
实验室测试
抗CMV IgG抗体的筛选
使用Wampole CMV IgG酶免疫分析（EIA）试剂盒检测抗-CMV IgG抗体（宾夕法尼亚州匹兹堡Fisher Scientific）。根据制造商的说明，在中心位置进行该测定，以确定受试者是否符合研究条件。
CMV gB IgG ELISA检测CMV抗gB抗体反应
使用辛辛那提儿童医院医疗中心（CCHMC）开发和验证的ELISA测定法测定gB的IgG抗体滴度。用0.75μg/mL gB（疫苗制剂）稀释在涂层缓冲液（pH 9.5）中，在4°C下涂布过夜，测定血清抗体水平。在用磷酸盐缓冲液加0.05%吐温20（洗涤缓冲液）清洗平板后，用0.89%的牛血清白蛋白（西格玛，圣路易斯，密苏里州）在洗涤缓冲液中封闭平板。使用指定了5120个单位的任意值的人类gB阳性血清，以1:400的稀释度开始绘制标准曲线。样品以一系列两倍稀释液进行稀释。从板中清洗封闭溶液后，将标准品和样品添加到孔中，并在37°C下培养45分钟。清洗后，添加过氧化物酶结合的山羊抗人IgG（KLP，Inc.，Gaithersburg，MD），并在37°C下培养30分钟。洗涤板，并在室温下加入3,3′，5,5′-四甲基联苯胺（TMB）、过氧化物酶底物系统（KLP，Inc.）30分钟。通过添加1.0M H停止反应三人事军官4和A450在分子器件SpectraMax ELISA阅读器上读取。使用4参数最佳拟合方法绘制标准品三个重复孔的平均OD值，并用于计算gB抗体的ELISA单位（EU）。该分析的定量下限为15个单位。
巨细胞病毒检测；CMV PCR
使用Qiagen QIAamp DNA血液提取系统（除尿液外的所有样本）或制造商（加利福尼亚州巴伦西亚市Qiangen）规定的Qiagen-QIAamp-病毒RNA迷你试剂盒（尿液样本）从受试者样本中分离核酸。CMV检测是使用先前描述的方法和引物通过实时PCR进行的[15,16]. 从Integrated DNA Technologies（Coralville，IA）获得了特定的5′和3′引物序列和杂交探针。使用两组引物和探针同时扩增了68 bp的gB区（UL 55）和84 bp的UL123-exon 4。作为内部对照，将来自水母DNA序列的EXO DNA添加到每个反应中，以确定PCR反应是否受到非特异性因素的抑制。每个PCR反应包含400 nM每个引物和100 nM探针、Applied Biosystems 2X PCR Master混合物（纽约州格兰德岛生命科技公司）和5μl总体积为25μl的提取DNA。使用Applied Biosystems 7500 PCR机器和软件进行实时PCR。温度循环曲线从初始50°C持续2分钟开始，随后95°C持续10分钟，然后95°C保持20秒，60°C保持2分钟，持续45个循环。为了对CMV检测呈阳性，样本的Ct值必须小于45。CMV培养物（Towne株，ATCC#VR-977）和无核水分别用作阳性和阴性对照。
对于参与脱落研究的受试者，使用相同的引物和探针，但使用商用定量CMV DNA制剂生成的标准曲线，建立了定量实时PCR分析（Advanced Biotechnologies，Inc.，Columbia，MD）。使用该方法分析尿液、唾液和血浆样本。CMV阳性样本的数据报告为每毫升体液的基因组拷贝数，报告极限为每毫升体液50个基因组拷贝数。
统计分析
样本量估计基于之前的研究，研究表明CCHMC青春期女孩每年感染CMV的风险为13%至14%[17]; 然而，其他临床站点的年度风险未知。因此，本研究采用每年10%的保守发病率（两年内为20%）进行设计。该研究设计假设疫苗有效性（VE）为60%，每年退出率为12%，产生350名受试者的样本，80%的能力检测出安慰剂组和CMV gB/MF59疫苗组未感染存活比例的差异为0.12（分别为0.80和0.92）使用0.05显著性水平的双侧对数库。由于辍学率（每年）高于预期，攻击率低于最初的预期，目标注册人数后来增加到400名受试者。
对于每个结果测量，VE使用Cox比例风险模型进行分析，并使用log-rank检验比较各治疗组之间的累积发病率曲线（1-Kaplan-Meier）。通过log-rank检验获得的p值被用作主要结果测量的统计显著性的主要测定。此外，对于每种结果测量，使用Fisher精确检验比较发病率，并估计每100人年95%置信区间（CI）的事件数。
安全性分析包括所有随机受试者，这些受试者至少服用了一剂研究产品，并且至少进行了一次基线后安全性评估。确定分析人群以评估3次给药后的疗效。三个per-protocol（PP）人群由服用一剂PP-1（N=381）、两剂PP-2（N=336）或三剂PP-3（N=249）的受试者组成。要纳入指定剂量的PP分析，受试者必须在方案定义的窗口内接受了所有达到并包括该剂量的疫苗接种，在剂量之前或之后20天内不得有CMV感染，并且在该剂量之前不得发生任何重大方案偏差。1次给药后意向治疗（ITT-1，N=400）人群包括至少服用一剂研究产品的所有受试者，并且在第一次给药前或给药后20天内没有CMV感染。同样，ITT-2（N=385）和ITT-3人群（N=349）分别接受了至少2次或全部3次剂量，并且在第二次或第三次剂量之前或之后20天内没有CMV感染。
免疫原性分析包括接受至少两次剂量研究产品并至少进行一次基线后免疫原性评估的所有受试者。脱落分析包括在第0天或之后血清转化或检测到巨细胞病毒的受试者，并提供至少1天的定量PCR分析结果。脱落子研究的数据分析主要是描述性的，包括PCR分析的脱落研究访视次数、可检测CMV脱落的访视次数、可检测CMV脱落的初始持续时间（天）和总持续时间（天）的总结，以及脱落种群中观察到的最大CMV复制。
所有统计分析均在SAS 9.2版或更高版本中进行。所有测试都是双向的，没有对多重比较进行调整。
结果
研究人群
共筛选出2137名受试者参与该研究，409名合格受试者参加疫苗研究；402名受试者接种了疫苗(). 32名受试者随后参加了脱落子研究并提供了样本。受试者中49%是白种人，41%是黑人，主要是非西班牙裔，平均年龄为14.6岁(). 各组之间的人口统计学相似，所有接种疫苗的受试者之间的人口统计相似()符合协议人群（未显示）。汇总分析人口的表格如下所示补充2.
表1
| CMV gB+MF59（N=195）
n（%） | 安慰剂（N=207）
n（%） | 全部（N=402）
n（%） |
|---|
| 筛选的受试者数量 | - | - | 2137 |
| 登记/随机的受试者人数 | 200 | 209 | 409 |
| 登记和未接种疫苗的受试者人数 | 5 | 2 | 7 |
| 第一次给药的受试者人数 | 195 (100.0) | 207 (100.0) | 402 (100.0) |
| 接受第二剂的受试者人数 | 187 (95.9) | 200 (96.6) | 387 (96.3) |
| 第三次给药的受试者人数 | 171 (87.7) | 186 (89.9) | 357 (88.8) |
| 完成研究的受试者人数[1] | 174 (89.2) | 179 (86.5) | 353 (87.8) |
| 进入脱产子研究的受试者人数 | 16 (8.2) | 18 (8.7) | 34 (8.5) |
| 提前停止研究的受试者人数 | 23 (11.8) | 23 (11.1) | 46 (11.4) |
| 研究早期中断的原因 | | | |
| 不合规/协议偏差 | 1 (0.5) | - | 1 (0.2) |
| 无法跟进 | 13 (6.7) | 12 (5.8) | 25 (6.2) |
| 受试者或父母/监护人自愿退出 | 3 (1.5) | 9 (4.3) | 12 (3.0) |
| 研究人员撤回 | 1 (0.5) | - | 1 (0.2) |
| 随机但未接种/剂量 | 5 (2.6) | 2 (1.0) | 7 (1.7) |
| 安全人群中的受试者人数 | 195 (100.0) | 207 (100.0) | 402 (100.0) |
| 1次给药后意向治疗人群中的受试者人数（ITT-1） | 195 (100.0) | 205 (99.0) | 400 (99.5) |
| 1个剂量组（PP-1）后符合方案的受试者人数 | 189 (96.9) | 192 (92.8) | 381 (94.8) |
| 2次给药后意向治疗的受试者人数（ITT-2） | 186 (95.4) | 199 (96.1) | 385 (95.8) |
| 两次给药后按方案接受治疗的受试者人数（PP-2） | 164 (84.1) | 172 (83.1) | 336 (83.6) |
| 三次给药后意向治疗人群中的受试者人数（ITT-3） | 168 (86.2) | 181 (87.4) | 349 (86.8) |
| 3次给药人群后按方案接受治疗的受试者人数（PP-3） | 124 (63.6) | 125 (60.4) | 249 (61.9) |
| 免疫原性人群中的受试者人数 | 180 (92.3) | 192 (92.8) | 372 (92.5) |
| 脱落人群中的受试者数量 | 16 (8.2) | 16 (7.7) | 32 (8.0) |
表2
| CMV gB+MF59（N=195） | 安慰剂（N=207） | 全部（N=402） | P值 |
|---|
| 安全人群中的N名受试者 | 195 | 207 | 402 | |
| 接种年龄（年） | | | | 0.1890[1] |
| 平均值（SD） | 14.7 (1.64) | 14.5 (1.60) | 14.6 (1.62) | |
| 中值的 | 15 | 15 | 15 | |
| 最小值、最大值 | 12, 18 | 12, 17 | 12, 18 | |
| 第一季度：第三季度 | 13.0 : 16.0 | 13.0 : 16.0 | 13.0 : 16.0 | |
| 接种时的年龄类别，n（%） | | | | 0.5860[2] |
| 12-15岁 | 124 (64) | 137 (66) | 261 (65) | |
| > 15岁 | 71 (36) | 70 (34) | 141 (35) | |
| 民族血统，n（%） | | | | 0.5956[2] |
| 西班牙裔或拉丁裔 | 22 (11) | 20 (10) | 42 (10) | |
| 不是西班牙裔或拉丁裔 | 173 (89) | 187 (90) | 360 (90) | |
| 种族，n（%） | | | | 0.2494[2] |
| 黑色 | 77 (39) | 88 (43) | 165 (41) | |
| 高加索人 | 103 (53) | 95 (46) | 198 (49) | |
| 其他 | 15 (8) | 24 (12) | 39 (10) | |
安全
总的来说，疫苗似乎是安全的，尽管在7天反应期内局部注射部位反应显著增加(). 92%（95%可信区间：87-95%）的疫苗接种者报告了任何疫苗剂量后的局部注射部位反应，而64%（95%置信区间：57-71%）的安慰剂接种者报告的局部注射位置反应（p值<0.001）。除两个局部注射部位反应外，其余均为轻度或中度反应；CMV gB/MF59组在第三次给药后出现两种严重的局部反应。其中一名受试者在第3天报告注射部位剧烈疼痛，而另一名受试验者在接种疫苗的第1天报告严重硬化。在CMV gB/MF59和安慰剂组中，疼痛是最常见的局部反应。
接种疫苗后的安全性分析这包括所有接受了至少一剂研究产品的受试者。报告在任何疫苗剂量后出现每次请求注射部位反应或全身症状的受试者百分比与95%置信区间一起显示。
全身反应比局部反应少见，但CMV gB/MF59组（82%，95%CI:75-87%）比安慰剂组（67%，95%CI：60-74%；p值=0.001）发生频率更高。在CMV gB/MF59组中，疲劳和头痛是最常见的系统性事件。在安慰剂组中，疲劳是最常见的系统性事件。9%（95%CI:5-14%）的疫苗接种者和3%（95%CI：1-7%）的安慰剂受试者检测到发热（温度>100.2）（p值=0.034）。首次接种疫苗后，5名受试者报告了严重的系统性事件（2名接种者，1名严重疲劳，1名重度疲劳和肌痛；3名安慰剂受试者：2名严重头痛，1名剧烈疲劳和肌酸）；第二次接种后的4名受试者（2名疫苗接种者：1名患有严重头痛，1名患有重度疲劳和肌痛；2名安慰剂接种者：一名患有严重头疼，1名伴有严重疲劳和头痛）；第三次接种5名受试者（4名接种者：2名严重疲劳和头痛，1名严重疲劳、头痛和肌痛，1名重度肌痛，一名安慰剂严重肌痛）。总的来说，报告局部和全身反应的受试者比例在第二次或第三次注射后似乎没有增加。没有受试者因不良事件或SAE提前终止研究。
研究期间，277名（69%）受试者报告了未经请求的不良事件；疫苗组72%（95%可信区间：6679%），安慰剂组66%（95%置信区间：59-72%）（p值=0.162）。在疫苗组中，胃肠道疾病更常见；安慰剂组22%（95%CI:16–28%）vs.11%（95%CI:7–16%）（p值=0.006），神经系统疾病分别为15%（95%CI：10–21%）vs.8%（95%CI:5–13%）（p价值=0.041）。然而，未发现AE在这些分类中的分布问题，疫苗组中没有哪种类型的AE更常见。24名受试者报告了30例严重不良事件；疫苗组16人（12名受试者），安慰剂组14人（12人）。所有SAE均与研究产品无关。
免疫原性
gB/MF59疫苗具有免疫原性(). 第二次接种疫苗（第一次接种后测量）大约5个月后，所有接种gB/MF59疫苗的受试者的抗体都增加了10倍（通过ELISA测定）。除一名受试者外，所有受试者在第三次接种疫苗后的2年内，反应仍增加了10倍。gB-ELISA抗体的GMT显著增加，从第2次给药后5个月（即第3次给药前）的1204 EU/mL（95%CI:1075-1349）的GMT增加到第3次用药后1个月的13400 EU/mL的GMT（95%CI：11436–15700）。接种第三剂疫苗后，GMT仍然很高，一年为2259 EU/mL（95%置信区间：1985–2572），两年为1453 EU/mL（95%置信区间：1252–1685）。作为比较，在研究期间感染的安慰剂受试者的gB抗体GMT峰值为2162（95%CI:1026–4554）。
CMV gB ELISA滴度的GMT分别于第三次免疫前、免疫后1个月、免疫后2年每6个月采集血清，用ELISA法检测CMV gB抗体。所有接受过至少2剂疫苗且至少有1个基线后ELISA结果的受试者均被纳入研究。受试者在感染巨细胞病毒后进行审查。
功效
在每次给药后对PP和ITT人群的疗效进行评估(). 对全身CMV感染和所有CMV感染的疗效进行评估。因为疫苗组和安慰剂组的全身感染占总感染的比例相似；例如，在ITT-1人群中，分别有75%和76%的人只讨论了总感染。这些分析均未显示疫苗接种者和安慰剂受试者的发病率在统计上存在显著差异，尽管每次分析中，疫苗组的发病率都较低(). PP人群服用3剂后的评估()125名安慰剂受试者中有14例感染，而124名疫苗受试者有8例感染；Cox比例风险模型的VE为43%（95%CI−36，76；p值=0.200）。使用观察到的发病率（疗效42%[95%CI:−32，75%]）（Fisher精确检验，p值=0.264），对PP人群的VE进行了类似的估计（数据未显示）。ITT分析显示，三次给药后，Cox比例风险模型中的VE为23%（95%CI:-57,62%）。
巨细胞病毒感染的累积发病率对受试者进行为期3年的尿液PCR分析或血清转化为非疫苗CMV蛋白，以获取CMV感染的证据。使用Cox比例风险模型分析疫苗疗效，并使用log-rank检验比较各治疗组之间的累积发病率曲线（1-Kaplan-Meier）。图A包括3剂疫苗或安慰剂后符合方案的人群。图B包括按方案接受2剂疫苗或安慰剂的人群。
表3
| 巨细胞病毒gB/MF59 | 安慰剂 | |
|---|
| n巨细胞病毒感染（%） | N个 | n巨细胞病毒感染（%） | N个 | 疫苗效力（%）[1] | 疫苗效力95%置信区间[2] | P值[3] |
|---|
| 三次给药后CMV感染 | | | | | | | |
| 3次给药后按方案 | 8 (6.5%) | 124 | 14(11.2%) | 125 | 42.9 | −36.2, 76.0 | 0.200 |
| 三次给药后的治疗意向 | 13 (7.7%) | 168 | 18 (9.9%) | 181 | 23.2 | −56.7, 62.4 | 0.466 |
| 2次给药后CMV感染 | | | | | | | |
| 2次给药后按方案 | 13 (7.9%) | 164 | 24 (14.0%) | 172 | 44.5 | −8.9, 71.8 | 0.082 |
| 2次给药后的治疗意向 | 20 (10.8%) | 186 | 25 (12.6%) | 199 | 15 | −53.1, 52.8 | 0.589 |
| 1次给药后CMV感染 | | | | | | | |
| 1次给药后按照方案 | 18 (9.5%) | 189 | 26(13.5%) | 192 | 30.7 | −26.4, 62.0 | 0.229 |
| 1次给药后的治疗意向 | 21 (10.8%) | 195 | 27 (13.2%) | 205 | 18.5 | −44.1, 53.9 | 0.480 |
在ITT人群中，一次给药后VE为19%（95%置信区间：−44–54%）。两次给药后，ITT人群的VE为15%（95%置信区间：−53，53%）。仅考虑PP受试者，两次给药后的VE为45%（95%CI:-9,72%）(). 在该人群中：疫苗组164人中有13人感染，而172名安慰剂受试者中有24人感染(，p值=0.082）。
对32名CMV感染受试者（16名疫苗接种者和16名安慰剂受试者）的脱落情况进行分析，未发现CMV脱落的幅度或持续时间有任何明显差异。例如，任何视线的峰值脱落为5.8x105疫苗和1.8 x 10的基因组拷贝数/mL5安慰剂受试者的基因组拷贝数/mL，而疫苗和安慰剂受试者的CMV脱落持续时间分别为（223天和212天）（数据未显示）。
讨论
巨细胞病毒是发达国家先天性感染最常见的原因。据估计，美国每年有5000至8000名婴儿因先天性巨细胞病毒感染而致残，包括智力低下和感觉神经性耳聋[2–4]. 由于概念前的CMV母源抗体有助于预防先天性感染的后遗症，因此CMV疫苗的开发备受关注[2,18–20]. 这里评估的亚单位疫苗是在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中表达的gB蛋白的重组形式。它包含整个gB编码序列，但跨膜结构域除外，该结构域被删除以促进分泌。此外，弗林蛋白酶切割位点已被诱变，导致gB作为未切割的蛋白质分泌。重组gB，长度为807个氨基酸，由专利实验佐剂MF59（10.75 mg/剂量），一种角鲨烯水乳剂配制而成。
总的来说，疫苗似乎是安全的，尽管正如预期的那样，与安慰剂受试者相比，疫苗受试者的局部注射部位和全身反应显著增加。92%的疫苗接种者报告了任何疫苗剂量后的局部注射部位反应，而安慰剂接种者报告的局部注射位点反应为64%（p值<0.001），而疫苗接种者和安慰剂接种者分别报告了82%和67%的全身反应（p值=0.001）。研究期间，277名（69%）受试者报告了未经请求的不良事件；疫苗组72%，安慰剂组66%（p值=0.162）。未发现不良事件的分布模式或问题。
与之前的研究类似，CMV gB/MF59疫苗具有免疫原性[13,14,21]. 第二次接种疫苗（第一次接种后测量）大约5个月后，所有接种gB/MF59的受试者对CMV gB的抗体反应增加了10倍（通过ELISA测定）。接种第三剂疫苗后，这一数字又增加了10倍。连续两年，滴度保持在第二次给药后检测到的水平之上。先前研究的抗体数据显示，按照与本研究报告相同的时间表接种三剂疫苗，诱导的CMV gB抗体水平比过去感染CMV的成年人高出数倍。这些先前的研究还表明，第三次接种疫苗后出现的中和抗体峰值水平与自然感染后相似。
在至少1、2或3次给药后，对多个分析人群进行疗效评估。这些分析均未显示疫苗接种者和安慰剂接受者之间的发病率有显著差异，尽管在每次分析中，疫苗组的发病率都较低。对PP人群服用3剂后的CMV感染防护评估显示，Cox比例风险模型中的VE为43%（95%CI:-36,76%；p值=0.200）。使用观察到的攻击率得到了VE的类似估计；疗效42%（95%置信区间：-32，75%）。在PP人群中，2次剂量VE 45%（95%CI:-9，72%；p值=0.082）后，发病率差异最大。由于攻击率低于预期，导致置信区间较宽，因此分析受到一定限制。最初的样本量估计基于在辛辛那提进行的一项研究[17]，但其他网站的攻击率大大降低。
在这里报道的试验中检测到的效力低于但与之前在稍年长女性人群中对相同疫苗进行评估时获得的效力一致[13]. 在先前报告的464名CMV血清阴性妇女的研究中，在分娩后一年接种疫苗，基于每100人年的感染率，VE为50%（95%CI:7,73%）。先天性巨细胞病毒感染分别发生在接种巨细胞病毒gB疫苗和安慰剂的婴儿中的1/81（1%）和3/97（3%）。这些数字太小，无法得出任何关于疫苗预防先天性感染的能力超出其预防母亲感染效力的结论。本试验期间出生的婴儿未进行CMV感染评估，因此未提供有关这一重要结果的其他信息。
尽管诱导了高抗gB滴度，但疫苗似乎只起到了轻微的保护作用。这有几种可能性，包括诱导的抗体功能较差或广度受到CMV株系差异的限制，或者需要细胞介导的免疫反应进行保护，但没有诱导到所需的水平。CMV疫苗在预防先天性感染或先天性疾病方面可能比母体感染更有效，但这一假设需要进行大规模的第三阶段试验。在先天性巨细胞病毒豚鼠模型中，gB疫苗在预防先天性感染方面确实比母体感染更有效[22].
尽管在本文报道的研究中，这种候选疫苗似乎提供了一些保护，并且在Pass等人的评估中具有显著的保护作用[13]疗效不足以继续开发该制剂作为预防CMV感染的独立制剂。我们认为，在进行困难而昂贵的预防先天性巨细胞病毒感染的疗效研究之前，需要开发更有效的疫苗。可能会在该疫苗中添加其他CMV抗原以提高中和活性或T细胞介导的免疫，也可能需要使用其他疫苗策略来提高疗效[10,23].
集锦
CMV血清阴性的12至17岁女孩在0个月、1个月和6个月时接种带有MF59或生理盐水安慰剂的CMV糖蛋白B（gB）疫苗
尽管局部和全身不良事件在疫苗组中更为常见，但疫苗总体耐受性良好
在符合方案的人群中，3次接种后的疫苗有效性为43%，P=0.20和45%，2次接种后P=0.08。
我们得出的结论是，该疫苗是安全的，具有免疫原性，尽管疗效没有达到常规的显著水平，但结果与之前使用相同配方对成年女性进行的研究一致（Pass等人，NEJM 360:11912009）。
致谢
本项目全部或部分由NIAID/NIH/HHS的联邦资金资助，合同编号：HHSN272200800006C（辛辛那提儿童医院医疗中心）；HHSN272200800002C（贝勒医学院和UT休斯顿分校）；HHSN27220080000C（范德比尔特大学）；HHSN272200800013C（EMMES公司），部分资金来自卫生与公众服务部生物医学高级研究与发展局的联邦资金。在范德比尔特，CTSA还从NIH获得了UL1 RR024975-01拨款，提供了部分支持。SHW还获得了KL2 CCTS增补奖#3KL2RR024149-05S1的部分支持。内容完全由作者负责，不一定代表NIH的官方观点。
我们要感谢所有的志愿者，如果没有他们，这项研究是不可能的。特别感谢NIAID的Walla Dempsey的努力。我们要感谢每一个VTEU网站全体员工的非凡努力，特别感谢辛辛那提儿童医院的米歇尔·迪基、塔拉·福尔茨和杰西·勒佩奇；来自贝勒医学院的科尼·契斯曼、塞尔萨·塔琼斯、珍妮特·布朗和特蕾西·兰德福德；莫妮卡·鲁申斯基（Monika Ruscheinsky-Jaso），德克萨斯大学休斯顿分校；盖尔·约翰逊（Gayle Johnson）、盛达·菲利普斯（Shanda Phillips）、朱莉·安德森（Julie Anderson）、范德比尔特大学（Vanderbilt University）的费斯·布伦德（Faith Brendle）、德克萨斯大学加尔维斯顿分校（University at Galveston）的玛丽安·谢弗（Marianne Shafer）、奥利维娅·
脚注
临床试验.gov标识符：NCT00133497号
利益冲突
DIB已经咨询了默克公司关于疱疹疫苗的事宜，并正在为Hookipa Biotech AG评估CMV疫苗，KE是诺华流感研究DSMB主席，SP是赛诺菲巴斯德的员工，其他均无冲突。
出版商免责声明：这是一份未经编辑的手稿的PDF文件，已被接受出版。作为对客户的服务，我们正在提供这份早期版本的手稿。手稿在以最终可引用的形式出版之前，将经过编辑、排版和校对结果证明。请注意，在制作过程中可能会发现可能影响内容的错误，适用于该期刊的所有法律免责声明均适用。
工具书类
1Kenneson A，Cannon MJ。先天性巨细胞病毒（CMV）感染流行病学回顾与荟萃分析。医学版Virol。2007;17:253–76.[公共医学][谷歌学者] 2Dollard SC、Grosse SD、Ross DS。与先天性巨细胞病毒感染相关的神经和感觉后遗症患病率和死亡率的新评估。医学版Virol。2007;17:355–63.[公共医学][谷歌学者] 三。Bate SL、Dollard SC、Cannon MJ。美国巨细胞病毒血清阳性率：1988–2004年国家健康和营养检查调查。临床传染病。2010;50:1439–47. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 4大炮MJ。先天性巨细胞病毒（CMV）的流行病学和认识。临床病毒杂志。2009;46（补充4）：S6–10。[公共医学][谷歌学者] 5.Goderis J、De Leenher E、Smets K、Van Hoecke H、Keymeulen A、Dhooge I。听力损失和先天性巨细胞病毒感染：系统综述。儿科。2014;134:972–82.[公共医学][谷歌学者] 6斯特拉顿D，劳伦斯RS，编辑。21世纪疫苗：决策工具。国家学院出版社；2000. [公共医学][谷歌学者] 7Krause PR、Bialek SR、Boppana SB、Griffiths PD、Laughlin CA、Ljungman P等。巨细胞病毒疫苗开发的优先事项。疫苗。2013;32:4–10. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 8Griffiths P、Plotkin S、Mocarski E、Pass R、Schleiss M、Krause P等。巨细胞病毒疫苗的可取性和可行性。疫苗。2013;31（补充2）：B197–203。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 9.Rieder F，Steininger C.巨细胞病毒疫苗：II期临床试验结果。临床微生物感染。2014;20（补充5）：95–102。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 11Kharfan-Dabaja MA、Boeckh M、Wilck MB、Langston AA、Chu AH、Wloch MK等。异基因造血干细胞移植中新型治疗性巨细胞病毒DNA疫苗：一项随机、双盲、安慰剂对照的2期试验。柳叶刀传染病。2012;12:290–9.[公共医学][谷歌学者] 12Griffiths PD、Stanton A、McCarrell E、Smith C、Osman M、Harber M等。移植受者使用MF59佐剂的巨细胞病毒糖蛋白-B疫苗：一项2期随机安慰剂对照试验。柳叶刀。2011;377:1256–63. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 13Pass RF、Zhang C、Evans A、Simpson T、Andrews W、Huang ML等。母体巨细胞病毒感染的疫苗预防。N英格兰医学杂志。2009;360:1191–9. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 14Frey SE、Harrison C、Pass RF、Yang E、Boken D、Sekulovich RE等。抗原剂量和免疫方案对巨细胞病毒糖蛋白B亚单位疫苗抗体反应的影响。传染病杂志。1999;180:1700–3.[公共医学][谷歌学者] 15Limaye AP，Huang ML，Leisenring W，Stensland L，Corey L，Boeckh M.造血干细胞移植受者植入前血浆中巨细胞病毒（CMV）DNA载量用于诊断CMV疾病。传染病杂志。2001;183:377–82.[公共医学][谷歌学者] 16Boeckh M，Huang M，Ferrenberg J，Stevens-Ayers T，Stensland L，Nichols WG，等。实时PCR定量检测血浆中巨细胞病毒DNA的优化。临床微生物学杂志。2004;42:1142–8. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 17Stanberry LR、Rosenthal SL、Mills L、Succop PA、Biro FM、Morrow RA等。青少年女孩单纯疱疹病毒（HSV）1型、HSV 2型和巨细胞病毒感染的纵向风险。临床传染病。2004;39:1433–8.[公共医学][谷歌学者] 18Fowler KB、Stagno S、Pass RF、Britt WJ、Boll TJ、Alford CA。先天性巨细胞病毒感染与母亲抗体状态的关系。N英格兰医学杂志。1992;326:663–7.[公共医学][谷歌学者] 19Fowler KB、Stagno S、Pass RF。母体免疫与先天性巨细胞病毒感染的预防。贾马。2003;289:1008–11.[公共医学][谷歌学者] 20Adler SP、Starr SE、Plotkin SA、Hempfling SH、Buis J、Manning ML等。原发性人类巨细胞病毒感染诱导的免疫可保护育龄妇女免受继发感染。传染病杂志。1995;171:26–32.[公共医学][谷歌学者] 21Pass RF、Duliege AM、Boppana S、Sekulovich R、Percell S、Britt W等。基于重组包膜糖蛋白B和新佐剂的亚单位巨细胞病毒疫苗。传染病杂志。1999;180:970–5.[公共医学][谷歌学者] 22Schleiss MR、Bourne N、Stroup G、Bravo FJ、Jensen NJ、Bernstein DI。纯化重组糖蛋白B疫苗对豚鼠先天性巨细胞病毒感染和疾病的保护作用。传染病杂志。2004;189:1374–81.[公共医学][谷歌学者] 23Fu TM，An Z，Wang D.人类巨细胞病毒疫苗预防先天性感染和疾病的研究进展。疫苗。2014;32:2525–33.[公共医学][谷歌学者] 
