雷帕霉素不能逆转细胞衰老。(一)衰老（电离辐射；Sen（IR））HCA2细胞用二甲基亚砜或雷帕霉素（Rapa）处理6天，通过光学显微镜（右图）和计数（左图）测定表达SA-β-gal的细胞百分比。(b条)细胞在电离辐射照射后用雷帕霉素或二甲基亚砜处理28天，清洗，并在无药培养基中培养14天，然后测定细胞数量。(c（c）)用BrdU脉冲处理HCA2细胞（非基因（NS）或电离辐射导致的衰老细胞，用二甲基亚砜或雷帕霉素处理6天）24小时，并用荧光显微镜测定掺入BrdU的部分。(d日)克隆形成实验比较了雷帕霉素或PP242（500 nM）慢性治疗对非新生（NS）和衰老（电离辐射；Sen（IR））HCA2细胞的影响。在电离辐射暴露前后的指定时间，对细胞进行电镀并添加药物，并培养细胞10–14天（显示了一个代表性实验）。(e（电子）)HCA2细胞被携带致癌RAS的对照慢病毒（L3P）或慢病毒感染。细胞在药物中生长三天（急性），然后释放或连续治疗10–14天（慢性），然后进行克隆形成染色。(（f）)HCA2细胞与携带shRNAs的RAS和慢病毒共同感染，以耗尽指示蛋白。成绩单IL6（IL6）通过qPCR定量。(g、 小时)HCA2细胞被携带shRNAs的慢病毒感染，以耗尽指示的蛋白质。对致癌RAS诱导衰老的感染细胞进行克隆形成分析(克)或电离辐射(小时)（显示了一个具有代表性的实验）。(我)用携带抗GFP（对照）或猛禽shRNAs的慢病毒感染HCA2细胞，用10Gy电离辐射（IR）或250nM阿霉素（Doxo）诱导或不诱导（NS）衰老24小时，并用二甲基亚砜或雷帕霉素处理。细胞培养10-14天，并使用结晶紫进行克隆染色（显示了一个具有代表性的实验）。(j个)细胞被视为我诱导衰老7天后，收集条件培养液并用ELISA分析IL6。对于一–c、 （f）和j个所示为两个独立实验的一个代表，每个实验都有三份细胞培养样本。对于d、 e，克–我所示为一次重复的具有代表性的克隆形成实验。有关原始数据，请参阅补充表4.
