图1

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雷帕霉素通过MTORC1降低SASP。()电离辐射暴露后,立即用指定浓度的雷帕霉素(Rapa;或作为对照的最高浓度的二甲基亚砜)处理非基因(NS)或电离辐射诱导衰老(IR;10 Gy)的HCA2成纤维细胞。7天后收集条件培养基,并通过ELISA分析IL6。非基因细胞分泌IL6的水平被任意设置为1。(b条)通过慢病毒介导的RAS或MKK6EE、2 mM丁酸钠(NaBu)3天、复制衰竭(Rep)或250 nM阿霉素24小时的过度表达(Doxo)诱导HCA2细胞衰老。治疗后给细胞注射12.5 nM雷帕霉素或二甲基亚砜(对照)。7天后收集条件培养基,并通过ELISA分析IL6。(c(c))用抗体阵列分析非新生(NS)或衰老(电离辐射;Sen(IR))细胞经雷帕霉素或二甲基亚砜处理6天的条件培养基。使用DMSO处理细胞的平均信号作为基线。颜色强度表示对数2-折叠基线中的更改。高于基线的信号显示为黄色;低于基线的信号以蓝色显示。所示为三个独立实验的平均值。(d日)两种不同的雷帕霉素治疗方案对衰老(电离辐射;Sen(IR))HCA2细胞IL6分泌的影响,一种在照射后立即开始(d0)并持续13天,另一种在辐照后7天开始并继续6天。(e、 (f))用二甲基亚砜或雷帕霉素处理衰老(电离辐射;Sen(IR))HCA2细胞,并对DNA-SCAR标记物53BP1进行免疫染色。使用CellProfiler确定53BP1病灶的数量。所示为病灶>2 53BP1的细胞百分比(e(电子)),以及每个细胞的平均焦点数((f)). 显示NS细胞以进行比较。对于所有面板,除了c(c),所示为两个独立实验的一个代表,每个实验都有三份样品。有关原始数据,请参阅补充表4.