图8

一（左上角）总结旁分泌衰老/条件培养基实验的图表。用4OHT孵育7天后，收集指示细胞的CM。通过IF评估CM对IMR90 wt细胞中BrdU掺入和SASP诱导的影响(n个=4个独立实验）。（右上）IMR90 ER:RAS shmTOR（左下）IMR90ER：表达4EBP1-DN的RAS细胞^重量/ZFP36L1型^静音.b-f。雷帕霉素治疗可降低SASP、衰老和免疫清除体内（b）Nras^G12伏转座子和转座酶通过水动力注射（第0天）共同传递到小鼠肝脏。从第−3天（Nras前3天）开始用载体或药物治疗小鼠^G12伏注射），并根据实验结果在注射后6或9天处死。（c） Nras后6天，通过qRT-PCR定量指定小鼠肝脏中SASP组分的表达^G12伏注入。承运人，n个=5只小鼠；雷帕霉素，n个=4只小鼠。包括P值。（d） 通过免疫印迹分析MAPKAPK2表达和4EBP1磷酸化（参见补充图S8d)并进一步量化。MAPKAPK2水平正常化为GAPDH表达和4EBP1磷酸化（p4EBP1^T37/T46)参考正常化4EBP1。Nras后6天获得小鼠肝脏^G12伏诱导。(n个=每种情况4只小鼠）。（e） Nras+的量化（左），p21^{Cip1号机组}+（中间）和p16^墨水4a+Nras后9天肝切片上的（右）细胞^G12伏注入(n个=每种情况5只小鼠）。顶部面板中量化的截面的代表性图像显示在底部。比例尺，40μm（f）肝脏切片在Nras后6天采集^G12伏注射并染色CD3（T细胞标记物）和F4/80（巨噬细胞标记物）。（承运人n个=5只小鼠，雷帕霉素n个=4只小鼠；200倍）。箭头表示浸润免疫细胞簇，表明衰老肝细胞被清除。阳性细胞数量/mm²图像中包括（CD3+T细胞）或阳性区域的%（F4/80+巨噬细胞）。比例尺，50μm。所有统计显著性均使用双尾Student’st吨-测试，***P<0.001；**P<0.01*P<0.05；n.s，不重要。所有误差条表示平均值±标准差。有关原始数据，请参阅补充表7.