世界胃肠病学杂志。2015年2月7日；21(5): 1531–1545.
白细胞介素-22通过减弱肝星状细胞活化和下调炎性细胞因子水平来改善肝纤维化
中国广西壮族自治区南宁530021，广西医科大学第一附属医院消化科，董洪路，郭晓云，秦珊玉，骆伟，黄晓丽，陈梅，王佳旭，马世嘉，杨贤文，蒋海兴
作者贡献：Lu DH、Guo XY、Qin SY、Luo W进行了实验；Lu DH对数据进行了分析；Lu DH、Huang XL、Chen M、Wang JX、Ma SJ、Yang XW对试剂、材料和分析工具做出了贡献；Lu DH撰写了论文；蒋HX设计了这个实验。通讯：Hai Xing Jiang，博士，教授，广西医科大学第一附属医院消化内科，中国广西壮族自治区南宁市双勇路22号，邮编530021。moc.361@ixahij
电话：+86-771-5356725传真：+86-71-5356725
2014年5月19日收到；2014年8月6日修订；2014年10月15日接受。
版权©作者2015。由Baisheding Publishing Group Inc.出版。保留所有权利。 摘要
目的：探讨白细胞介素（IL）-22对小鼠肝纤维化的影响及其可能机制。
方法：CCl诱导雄性BALB/c小鼠肝纤维化4在CCl中腹腔注射重组IL-22（rmIL-22）4-治疗小鼠。通过组织学和Masson染色评估纤维化。通过分析α-平滑肌肌动蛋白的表达来研究肝星状细胞（HSC）的激活。观察肝脏中辅助性T细胞（Th）22、Th17和Th1细胞的频率，炎性细胞因子[IL-22、IL-17A、干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-6、IL-1β]和转录因子[芳基烃受体（AHR）、RAR相关孤儿受体（RORγT）、T-bet]mRNA的表达。此外，检测血浆IL-22、IL-17A、IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-1β水平。
结果：与对照组相比，肝纤维化组的循环Th22细胞、Th17细胞、Th1细胞、IL-22、IL-17A和IFN-γ显著升高(P（P）< 0.01). rmIL-22对肝纤维化小鼠的治疗改善了肝纤维化的严重程度，这一点已被较低的肝纤维化病理评分所证实(P（P）< 0.01). RmIL-22降低Th22细胞的频率（6.71%±0.97%）与8.09% ± 0.74%,P（P）<0.01），Th17细胞（4.34%±0.37%与5.71% ± 0.24%,P（P）<0.01），Th1细胞（3.09%±0.49%与4.91% ± 0.73%,P（P）P<0.01）和IL-22水平（56.23±3.08与70.29 ± 3.01,P（P）<0.01），IL-17A（30.74±2.77与45.68 ± 2.71,P（P）<0.01）和干扰素-γ（74.78±2.61与124.89 ± 2.82,P（P）< 0.01). 在rmIL-22组中观察到肝脏中IL-22、IL-17A、IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-1β、AHR RORγt和t-bet基因表达下调(P（P）< 0.01).
结论：Th22、Th17和Th1细胞在肝纤维化中的频率升高。RmIL-22可以减弱HSC激活并下调炎性细胞因子水平，从而改善肝纤维化。
关键词：辅助T细胞22、辅助T细胞17、辅助T淋巴细胞1、白细胞介素-22、肝纤维化
核心提示：辅助性T细胞（Th）-22参与组织炎症和免疫。Th22细胞的存在和白细胞介素（IL）-22在肝纤维化中的作用鲜有报道。本研究检测了Th22细胞的频率，研究了IL-22的表达，并测定了重组IL-22对小鼠肝纤维化的影响。本初步研究的目的是确定Th22细胞的存在以及IL-22在肝纤维化中的功能特征。在患有肝纤维化的小鼠中，Th22细胞的频率升高。重组IL-22改善肝纤维化通过肝星状细胞活化减弱，炎性细胞因子下调。
简介
肝纤维化是全球慢性肝损伤发病率和死亡率的主要原因。肝星状细胞（HSC）的激活被认为是细胞外基质（ECM）和胶原蛋白生成过程中最重要的事件，从而导致肝纤维化[1]. 尽管在纤维化过程的表征方面取得了进展，但该病的确切分子机制尚不清楚。持续的免疫反应和免疫介质的不当释放与宿主组织中的损伤、损害和瘢痕形成有关，被认为是重要的病理过程。然而，肝纤维化的基本机制尚未完全阐明。
最近，新的证据表明CD4+T细胞在肝脏炎症和纤维化的发展中起着重要作用[2-4]. CD4细胞+辅助性T细胞最近被细分为四个主要亚群，主要基于其转录因子和分泌细胞因子的表达谱：辅助性T（Th）细胞1型、Th2、Th17和调节性T细胞[5,6]. Th1细胞的特征是分泌干扰素-γ（IFN-γ），这是激活巨噬细胞所必需的一种促炎细胞因子，并参与免疫细胞内病原体。研究表明，注射IFN-γ可降低二甲基亚硝胺诱导的纤维化大鼠的总肝胶原含量[7]. 然而，IFN-γ抑制HSC的增殖和激活，并下调这些细胞中ECM的表达。Th17细胞是最近发现的CD4亚群+以产生其标志性细胞因子IL-17为特征的T辅助细胞。它们代表另一种促炎性T辅助细胞亚型，在发育和功能上与Th1和Th2细胞不同。Th17细胞的分化需要转化生长因子β（TGF-β）、IL-6和IL-21在小鼠中的联合作用。这些细胞因子诱导孤儿核受体RAR相关孤儿受体（RORγt）（小鼠）或RORc（人类）的表达。Th17细胞通过分泌IL-17A和其他细胞因子，在炎症性疾病、自身免疫性疾病和移植物抗宿主病中发挥重要作用。几项研究表明Th17细胞参与了肝脏疾病的发病机制[8,9].
Th22细胞被认为是一种新的Th细胞亚群，其特征是大量产生IL-22，而不是IL-17或IFN-γ[10,11]. Th22细胞表达趋化因子受体CCR6、CCR4和CCR10，并高表达关键转录因子芳香烃受体（AHR），但低表达或检测不到T-bet和ROR-γT[10]. 此外，在IL-6和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）存在的情况下，幼稚T细胞向Th22表型分化[10]. 不断发展的文献表明，Th22细胞与银屑病、类风湿关节炎、系统性硬化症和人类免疫缺陷病毒感染有关。然而，Th22细胞的存在以及Th22在肝纤维化中的作用尚不清楚。IL-22是IL-10细胞因子家族的成员，主要由Th22细胞、Th17细胞和Th1细胞产生。IL-22可以发挥其作用通过由IL-10R2和IL-22R1组成的异二聚体跨膜受体复合物。人们认为IL-22可能在调节炎症疾病相关炎症反应中发挥重要作用。IL-22和IL-17之间以及IL-17和IFN-γ之间的关系特别令人感兴趣，它们的表达通常与促炎过程有关。IL-22的功能与IL-17相似，两者都有助于控制细胞外细菌感染。然而，IL-22具有特殊功能，如诱导创伤愈合反应和组织修复，防止心肌炎或肝脏疾病[12]IL-17不受影响。特别是，最近的一项研究表明，IL-22治疗可以预防T细胞性肝炎[13]，刺激肝脏再生[14]，改善脂肪肝[15]，诱导HSC衰老，从而改善肝纤维化[15].
众所周知，Th17和Th1细胞参与了肝纤维化。然而，Th22细胞在肝纤维化中的存在及其潜在机制尚不清楚。因此，在本研究中，我们研究了CCl中Th22细胞与Th17和Th1细胞的分布4-诱导小鼠肝纤维化，并检测IL-22、IL-17和IFN-γ的表达。用重组IL-22（rmIL-22）治疗肝纤维化小鼠，以确定Th22细胞的存在和IL-22在肝纤维化中的功能特征。
材料和方法
老鼠
从实验动物中心（中国广西医科大学，编号SCXKG 2010-0002）购买6周龄、体重18-20 g的特定无致病性雄性BALB/c小鼠。所有小鼠实验程序均经广西医科大学动物实验伦理委员会批准。将动物保存在无致病性的小鼠房间（12小时光照/12小时暗照；温度22-24°C），并接受水随意动物护理设施服务部（中国广西医科大学）。本研究严格按照美国国立卫生研究院《实验动物护理和使用指南》中的建议进行。
肝纤维化小鼠模型
共72只小鼠被随机分为肝纤维化组(n个=40，10只小鼠/亚组）和对照组(n个=32，8只小鼠/亚组）。每组分为四个亚组（第0、4、8和12周）。肝纤维化组给予2 mL/kg体重的20%CCl治疗4（中国上海长江化工有限公司）腹腔注射12周。对照组小鼠腹腔注射橄榄油（美国西格玛）。在最后一次注射后的第0、4、8和12周以及72小时处死所有存活动物。将肝脏和脾脏无菌取出作为新鲜样本进行测量，采集血液并制备血浆进行分析。
重组IL-22蛋白对小鼠的治疗作用
共16只小鼠接受了2 mL/kg体重的20%CCl治疗4（上海长江化工有限公司；中国上海）腹腔注射8周，然后随机分为两组。小鼠每天腹腔注射300μg/kg rmIL-22（0.3μg/g；美国明尼苏达州明尼阿波利斯市研发系统公司）14天，然后处死(n个=8，rmIL-22组）。对照组注射0.5%BSA的载体溶液（PBS中，pH 7.0）(n个=8，载体组）。CCl后第10周处死所有存活动物4注入。收集肝脏、脾脏和血浆。
组织病理学
将收获的肝组织固定在10%中性缓冲福尔马林中，并包埋在石蜡中。制备4μm厚的切片，并按照标准程序用苏木精/伊红（HE）和马森三色染色进行染色，并在光学显微镜下观察组织病理学变化（尼康Eclipse E800显微镜；日本神奈川川崎）。Ishak纤维化评分作为衡量肝纤维化程度的评分系统。0分表示无纤维化，1分和2分表示门脉纤维化程度，3分和4分表示桥接性纤维化。5分表示结节形成和不完全肝硬化，6分表示已形成肝硬化。两名临床病理学家在不了解实验设计的情况下进行组织学评估。
免疫组织化学
对肝组织切片进行脱蜡、水化并进行热诱导抗原回收。阻断切片，并在4°C下用小鼠抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）抗体（西格玛-阿尔德里奇，圣路易斯，密苏里州）以1:300稀释度孵育过夜。阴性对照抗体由物种匹配的，以及在适当的情况下，IgG亚类匹配的Ig组成，以相同的稀释度使用。随后清洗切片并用HRP-结合的山羊抗鼠IgG二级抗体孵育，然后用3,3′-二氨基联苯胺四氯化物孵育5-10分钟，并在光学显微镜下观察特异染色。用光学显微镜分析染色玻片，并对每只小鼠（奥林巴斯BX53；日本东京）的肝脏进行高倍视野成像（放大×400）。根据Image-Pro Plus 6.0版（美国马里兰州贝塞斯达市媒体控制论）染色的程度和强度，半定量评估细胞质中α-SMA的沉积。两位病理学专家从每个切片中随机选择了五个区域，但他们并不知道这些组。
流式细胞术
脾细胞通过尼龙网轻轻分散成单细胞悬浮液，并用RPMI 1640清洗（美国加利福尼亚州GIBCO）。通过使用红细胞裂解缓冲液（BD Biosciences；加州圣地亚哥）裂解红细胞制备单细胞悬浮液。然后将这些脾单核细胞重新悬浮在含有10%FCS（GIBCO；美国）的RPMI 1640培养基中，在GolgiPlug（1μL/10）的存在下用佛波肉豆蔻酸酯醋酸盐（25 ng/mL，Sigma-Aldrich）和离子霉素（1μg/mL，Sigra-Aldrich）刺激6细胞，BD Biosciences），37°C，5%CO2在24孔培养板中。培养5 h后，收集细胞并用PerCP-Cy5.5结合的抗小鼠CD4（BD Biosciences）染色。然后用抗IL-22-PE（美国加州圣地亚哥eBioscience）、抗IL-17-APC（美国eBioschience）和抗IFN-γ-Alexa-Fluor对细胞进行细胞内染色®固定和渗透后的488（BD Biosciences）单克隆抗体。使用同型匹配的对照抗体来确定背景染色水平并帮助设置门限。染色的细胞通过FACS-Calibur流式细胞仪（BD Bioscience）和FlowJo软件7.6.1（Tristar，El Segundo，CA，美国）进行分析。Th22、Th17和Th1细胞被定义为IL-22+IL-17-IFN-γ-CD4+，IL-17+CD4细胞+和干扰素-γ+CD4细胞+T细胞。
实时逆转录聚合酶链反应
用TRIZOL试剂W（美国加利福尼亚州Invitrogen）提取均质心脏组织的总RNA，然后根据制造商的说明用逆转录试剂盒（美国加州费尔马）将其逆转录成cDNA。Primer Premier 5.0设计了IL-22、IL-17A、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6 T-bet、RORγT、AHR和看家基因β-actin的引物。使用ABI 7500序列检测系统（Applied Biosystems，Foster City，CA，United States）使用SYBR green进行实时逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）。在94°C下进行初始变性步骤3 min后，使用三步循环程序（94°C变性30 s，60°C退火30 s，72°C延伸60 s）进行35个循环。模板和引物如下：小鼠IL-22（正向，F）5′-CGA TTG GGG AAC TGG ACC TG-3′和（反向，R）5′-GGA CGT TAG CTC ACT TT-3′；IL-17A，（F）5′-GTG TCT CTG ATG CTG TTG-3′和（R）5′-AAC GGT TGA GGT AGT CTG-3′；干扰素-γ，（F）5′-CTC AAG TGG CAT AGA TGT GGA AG-3′和（R）5′-GCT GGA CCT GTG GGT TGT TGA-3′；AHR（F）5′-ATG GAG GCC AGG ACC AGT GTA G-3′（R）5′-TGC TGT GAC CAG CAC AAA G-3’；RORγt，（F）5′-GCG GAG CAG ACA CAC TTA CA-3′和（R）5′-TTG GCA AAC TCC ACC TA-3′；T-bet、（F）5′-TTC CCA TTC CTG TCC TTC AC-3′和（R）5′-CCT CTG GCT CTC CAT TC-3′；TNF-α，（F）5′-AGT CCG GGC AGG TCT ACT TT-3′和（R）5′-TTG GAC CCT GAG CCA TAA TC-3′；IL-6，（F）5′-ACA GAA GGA GTG GCT AAG GAC C-3′和（R）5′-TAGA TAA CGC ACT AGG TTT-3′；IL-1β，（F）5′-CAG GAG GAC ATG AGC ACC-3′和（R）5′-CTC TGC AGA CTC AAA CTC CAC-3′；β-肌动蛋白，（F）5′-AAT TCC ATC ATG AAG TGT GA-3′和（R）5′-ACT CCT GCT TGC TGA TCC AC-3′。相关基因表达根据β-肌动蛋白转录水平进行标准化，并通过△△使用7500 System Sequence Detection软件（Applied Biosystems）的CT方法。每个样品的所有反应至少进行两次。
细胞因子测定
用酶联免疫吸附法测定血浆中细胞因子的含量。使用Quantikine Mouse IL-22 IL-17A免疫分析（美国eBioscience）检测IL-22的量。根据制造商的说明，使用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（中国博斯特）测定小鼠体内IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-1β的水平。ELISA试剂盒对IL-22、IL-17A、IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-1β的敏感性分别为5、5、7、4、7和7 pg/mL，在这些测定过程中未观察到交叉反应。所有样品均一式三份。
统计分析
根据重复三次的实验，将数据总结为平均值±SD。使用学生的t吨两组比较的检验，或多重比较的单向方差分析检验。使用Mann-Whitney评估病理学评分之间的差异U型测试。所有数据用SPSS 16.0进行分析。P（P）小于0.05的值被认为具有统计学意义。
结果
肝纤维化严重程度的评估
CCl公司4给药后引起显著的肝脏炎症，包括肝细胞膨胀、坏死和再生。肝纤维化程度逐渐加重。观察到进行性坏死炎症、窦周和门脉纤维化，第8周出现不规则坏死和桥接性纤维化（图). 在12周结束时，观察到了纤维索的延伸和肝小叶的形成，健康肝细胞的很少区域和胶原沉积以及间隔桥接的门静脉区域（图).
通过组织病理学检查评估小鼠肝纤维化程度。A： 组织学通过苏木精-伊红（HE）染色进行评估，纤维胶原沉积通过Masson染色进行评估（原始放大倍数×400）。通过α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组织化学染色（原始放大倍数×400），在肝脏切片上评估活化的肝星状细胞；B： 根据Ishak评分系统评估肝纤维化程度；C： α-SMA表达的形态计量学定量。每个标本五个视野（放大倍数×400）中α-SMA阳性细胞的平均数量以百分比面积进行评估。b条P（P）< 0.01与第0周模型组。数据为平均值±SD(n个= 8-10).
通过Masson染色评估肝纤维化程度（图)肝纤维化的定性评估，肝脏病理学评分在第12周达到峰值（图). 相比之下，对照组的肝脏没有炎症细胞浸润、坏死或纤维化。HSC是肝纤维化中主要的胶原蛋白生成细胞，我们通过α-SMA表达分析活化的HSC通过免疫组织化学染色（图). 遵循CCl4给药后，从第0周到第12周，在小鼠肝脏中观察到α-SMA染色增强（图). α-SMA扩散到门静脉区域，显示HSC的激活增加。
肝纤维化小鼠Th22、Th17和Th1细胞比例增加
如图所示脾Th22细胞（IL-22）的频率+白介素-17-干扰素-γ-CD4细胞+肝纤维化组0～12周的细胞数分别为1.98%±0.34%、18.2%±3.1%、12.45%±1.6%和8.62%±1.01%。对照组0～12周脾脏Th22细胞的频率分别为1.95%±0.25%、1.93%±0.25%，2.01%±0.22%和2.05%±0.24%。这些数据表明，从第4周开始，Th22细胞的时间进程显著高于对照组(P（P）<0.01），在第4周达到峰值(P（P）<0.01）（图，2D）。Th17细胞（IL-17）的频率+/CD4细胞+肝纤维化组0～12周的T细胞）分别为0.73%±0.15%、7.22%±0.67%、6.11%±0.74%和5.57%±0.68%。对照组Th17细胞在0～12周的频率分别为0.69%±0.1%、0.71%±0.09%、0.73%±0.07%和0.77%±0.09%。肝纤维化组Th17细胞百分比明显高于对照组(P（P）<0.01），在第4周达到峰值(P（P）<0.01）（图和E）。同样，Th1细胞（IFN-r）的频率+/CD4细胞+肝纤维化组0～12周T细胞）分别为0.87%±0.18%、6.63%±1.4%、4.64%±1.23%和4.53%±0.59%。对照组Th1细胞在0～12周的频率分别为0.94%±0.17%、0.87%±0.22%、1.01%±0.21%和1.02%±0.19%。与对照组相比，肝纤维化组Th1细胞水平显著增加(P（P）<0.01），在第4周达到峰值(P（P）<0.01）（图和F）。肝纤维化组Th22细胞的数量与Th17和Th1细胞的数量呈正相关，Th17和Th1细胞的数目呈正相关（两者均为P（P）<0.01，图-一） ●●●●。
在患有肝纤维化的小鼠中，T辅助因子22、T辅助因子17和T辅助因子1细胞的比例显著增加。A-C：纤维化组和对照组中辅助T细胞（Th）-22、Th17和Th1的代表性图像；D-F：不同亚群Th22、Th17和Th1细胞变化的统计分析结果；G-I：第4周纤维化组Th22和Th17细胞、Th22和Th1细胞、Th17和Th1细胞的相关性分析。b条P（P）< 0.01与同一时间点处死对照组；d日P（P）< 0.01与其他纤维化亚组。数据为平均值±SD(n个= 8-10). ILs：白细胞介素；干扰素：干扰素。
肝纤维化小鼠IL-22、IL-17A和IFN-γ的产生增加
肝纤维化组0～12周外周血IL-22水平分别为29.23±3.68、114.79±7.8、83.19±5.41和76.89±5.69。对照组0周至12周的外周血IL-22水平分别为29.31±4.35、30.45±3.66、29.79±3.9和29.89±3.93。根据Th22细胞的流式细胞术分析，IL-22从第4周起在肝纤维化小鼠中上调，并在第4周达到峰值(P（P）<0.01）（图). 肝纤维化组0～12周的IL-17A水平分别为10.79±2.6、71.9±5.72、50.03±4.84和39.62±3.84。对照组IL-17A水平分别为10.4±3.27、11.16±2.55、10.31±2.35和9.81±2.33。根据Th17细胞的流式细胞术分析，IL-17A从第4周起在肝纤维化小鼠中上调，并在第4周达到峰值(P（P）<0.01）（图). 同样，肝纤维化组0周至12周的IFN-γ水平分别为29.56±4.15、180.51±6.44、129.86±5.56和99.21±5.22。对照组IFN-γ水平分别为30.54±4.2、30.49±4.93、30.6±4.64和30.48±3.6。根据Th1细胞的流式细胞术分析，IFN-γ从第4周起在肝纤维化小鼠中上调，并在第4周达到峰值(P（P）<0.01）（图). 肝纤维化组Th22、Th17和Th1细胞的数量分别与IL-22、IL-17A和IFN-γ蛋白的产生呈正相关(P（P）<0.01，图-F） ●●●●。
肝纤维化小鼠白介素-22、白介素-17A和干扰素-γ蛋白的产生增加。A-C：不同亚组白细胞介素（IL）-22、IL-17A和干扰素（IFN）-γ变化的统计分析结果；D-F：第4周纤维化组辅助性T细胞（Th）-22与IL-22、Th17细胞与IL-17A、Th1细胞与IFN-γ呈正相关。b条P（P）< 0.01与同一时间点处死对照组；d日P（P）< 0.01与其他纤维化亚组。数据为平均值±SD(n个= 8-10).
肝纤维化小鼠IL-22、IL-17A和IFN-γmRNA的高表达
如图所示，肝纤维化组从0周到12周的肝IL-22mRNA强度标准化为β-肌动蛋白，其水平分别为1.02±0.08、5.36±0.57、3.77±0.49和3.03±4.42。在对照组，从第0周到第12周，这些水平分别为1.03±0.08、1.02±0.08，0.99±0.09和1.01±0.06。根据Th22细胞的流式细胞术分析，白介素-22mRNA在肝纤维化小鼠中从第4周开始上调，并在第4周达到峰值(P（P）<0.01）（图). 强度白细胞介素17A肝纤维化组mRNA在0～12周恢复为β-actin，分别为1.01±0.05、4.5±0.54、2.88±0.35和2.76±0.31。在对照组，从第0周到第12周，这些水平分别为1±0.05、1.02±0.07、0.99±0.04和1.02±0.05。根据Th17细胞的流式细胞术分析，白细胞介素17AmRNA在肝纤维化小鼠中从第4周开始上调，并在第4周达到峰值(P（P）<0.01）（图). 同样，肝纤维化组0周至12周肝IFN-γmRNA强度归一化为β-actin，水平分别为0.98±0.25、5.89±0.44、4±0.36和3.12±0.52。在对照组，从第0周到第12周，这些水平分别为：1.02±0.06、1.06±0.1、1.01±0.05和1.01±0.05。根据Th1细胞的流式细胞术分析，干扰素-肝纤维化小鼠的γmRNA从第4周开始上调，第4周达到高峰(P（P）<0.01）（图). 肝纤维化组Th22、Th17和Th1细胞的数量与肝纤维化的产生呈正相关白介素-22,白细胞介素17A和干扰素-γmRNA(P（P）<0.01）（图-F） ●●●●。
肝纤维化小鼠白介素22、白介素17和干扰素γmRNA的高表达。A-C：不同亚组白细胞介素（IL）-22、IL-17和干扰素（IFN）-γmRNA变化的统计分析结果；D-F：辅助性T细胞（Th）-22与白细胞介素-22mRNA、Th17细胞和白细胞介素17AmRNA、Th1细胞和干扰素-纤维化组在4周时γmRNA表达。b条P（P）< 0.01与对照组在同一时间点处死；d日P（P）< 0.01与其他纤维化亚组。数据为平均值±SD(n个= 8-10).
RmIL-22减轻了肝纤维化的严重程度
如图所示与载体组相比，rmIL-22显著减轻了肝脏炎症、坏死和纤维化（图). 采用Masson染色法观察两组小鼠的肝纤维化程度。rmIL-22组的纤维化评分显著低于携带者组(P（P）<0.01）（图). 与携带者组相比，rmIL-22组α-SMA阳性细胞数量减少(P（P）<0.01）（图). 这些结果表明，rmIL-22改善了CCl4-诱导肝纤维化。
重组IL-22减轻了肝纤维化的严重程度。A： 组织学通过苏木精-伊红（HE）染色进行评估，纤维胶原沉积通过Masson染色进行评估（原始放大倍数×400）。通过α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组织化学染色（原始放大倍数×400），在肝脏切片上评估活化的肝星状细胞；B： 根据Ishak评分系统评估肝纤维化程度；C： α-SMA表达的形态计量学定量。b条P（P）< 0.01与载体组。数据为平均值±SD(n个= 8). rmIL-22：重组IL-22。
RmIL-22降低Th22、Th17和Th1细胞的百分比
如图所示通过流式细胞术研究了rmIL-22组和载体组中Th22、Th17和Th1细胞的变化。rmIL-22组Th22细胞百分比低于携带者组（6.71%±0.97%）与8.09% ± 0.74%,P（P）<0.01）（图6B）。rmIL-22组Th17细胞百分比低于携带者组（4.34%±0.37%）与5.71% ± 0.24%,P（P）<0.01）（图). 同样，rmIL-22组的Th1细胞百分比低于载体组（3.09%±0.49%与4.91% ± 0.73%,P（P）<0.01）（图).
重组-22降低了T辅助细胞22、T辅助细胞17和T辅助细胞1的百分比。A： 重组（rmIL）-22组和载体组中辅助性T细胞（Th）-22、Th17和Th1细胞的代表性图像；B-D：统计分析结果显示，rmIL-22组Th22、Th17和Th1细胞的百分比低于载体组。b条P（P）< 0.01与载体组。数据为平均值±SD(n个= 8).
为了证实rmIL-22抑制Th22、Th17和Th1反应的发现，我们检测了rmIL-21对Th22细胞、Th17细胞和Th1细胞相关细胞因子表达的影响。采用RT-PCR方法检测炎症细胞因子IL-22、IL-17A和IFN-γ在肝脏的mRNA表达。此外，用酶联免疫吸附法测定了它们在血浆中的蛋白质生成量。如图所示-C、 与携带者组相比，rmIL-22组总循环IL-22、IL-17A和IFN-γ水平显著降低（56.23±3.08与70.29 ± 3.01, 30.74 ± 2.77与45.68 ± 2.71, 74.78 ± 2.61与124.89 ± 2.82,P（P）< 0.01). 同样，rmIL-22降低了伊利诺伊州-22,伊利诺伊州-17A和干扰素-γmRNA，远低于携带者组（1.01±0.06与1.77 ± 0.25, 0.98 ± 0.05与1.86 ± 0.19, 1.01 ± 0.06与2 ± 0.14,P（P）<0.01）（图-F） 。值得注意的是，肝组织中AHR、RORγt和t-bet的表达，即控制Th22、Th17和Th1细胞分化的转录因子，在rmIL-22组中的表达比载体组低1.5-2倍（图-一） ●●●●。
重组白细胞介素-22组中T辅助因子22-、T辅助因子17-和T辅助因子1-相关细胞因子的表达降低。A-C：重组IL（rmIL）-22组和载体组血浆白细胞介素（IL）-21、IL-17A和干扰素（IFN）-γ水平，采用酶联免疫吸附试验测定；D-I：rmIL-22组和载体组肝脏IL-22、IL-17A、IFN-γ、芳香烃受体（AHR）、维甲酸相关孤儿受体γ（RORγt）和t-bet的mRNA水平。b条P（P）< 0.01与载体组。数据为平均值±SD(n个= 8).
RmIL-22降低TNF-α、IL-6和IL-1β的生成
免疫细胞已被证明能浸润肝脏病变，其中一些可能产生炎性细胞因子，并可能参与Th22、Th17和Th1反应。为了确定这些炎症细胞因子对rmIL-22治疗的反应状态，我们还通过ELISA检测了血浆中的蛋白质生成。与载体组相比，rmIL-22组的TNF-α、IL-6和IL-1β蛋白水平显著降低(P（P）<0.01）（图-C） ●●●●。此外，通过RT-PCR检测肝脏TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的表达。我们观察到TNF公司-α,伊利诺伊州-6和伊利诺伊州-与携带者组相比，rmIL-22组肝组织中的1β(P（P）<0.01）（图-F） ●●●●。
重组白细胞介素22可降低肿瘤坏死因子-α、白细胞介导素-6和白细胞介介素-1β的产生。用酶联免疫吸附法测定肿瘤坏死因子（TNF）-α（A）、白细胞介素（IL）-6（B）和白细胞介素酶-1β（C）循环蛋白水平，用逆转录聚合酶链反应检测重组IL（rmIL）-22组和载体组（D-F）mRNA在肝脏的相对表达，b条P（P）< 0.01与载体组。数据为平均值±SD(n个= 8).
讨论
CD4细胞+辅助性T细胞适应并增强其反应，以匹配不同类型的感染，并协调多种可能影响纤维化的免疫细胞[16,17]. 越来越多的证据表明，T细胞活化及其细胞因子表达在肝纤维化的发病机制中起着关键作用，例如产生IFN-γ的Th1细胞和产生IL-17的Th17细胞[18,19]. 然而，Th22细胞在肝纤维化中的潜在作用尚不清楚。在本研究中，我们检测了脾脏Th22、Th17和Th1细胞的频率、血浆IL-22、IL-17A和IFN-γ的浓度以及肝脏的表达伊利诺伊州-22,伊利诺伊州-17A和干扰素-CCl小鼠的γmRNA4-诱导肝纤维化。为了进一步研究IL-22的作用，对用rmIL-22治疗的肝纤维化小鼠进行了检测。我们的数据显示，CCl小鼠脾脏Th22、Th17和Th1细胞的百分比显著升高4-诱导的肝纤维化程度高于对照组，并在第4周达到高峰。血浆IL-22、IL-17A和IFN-γ浓度与肝脏表达伊利诺伊州-22,伊利诺伊州-17A和干扰素-CCl小鼠的γmRNA4-诱导的肝纤维化明显高于对照小鼠，并在第4周达到峰值。用rmIL-22治疗肝纤维化小鼠可改善肝纤维化的严重程度，这一点已被较低的肝纤维化病理评分所证实。rmIL-22可降低Th22细胞、Th17细胞、Th1细胞的频率以及IL-22、IL-17、IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-1β的水平。下调伊利诺伊州-22,伊利诺伊州-17,干扰素-γ,TNF公司-α,伊利诺伊州-6,伊利诺伊州-1β,AHR公司,风险回报率γt吨、和T型赌注在rmIL-22组中观察到肝脏中的基因表达。
Th1细胞在肝纤维化的发病过程中起着重要作用。Shi等人[20]表明在C57BL/6小鼠中产生IFN-γ的Th1细胞的扩增导致了相对较小的纤维化，而具有主要Th2反应的BALB/c小鼠在CCl反应中发生了严重的纤维化4[20]. 我们的研究表明，CCl小鼠脾脏Th1细胞的百分比显著增加4-与对照组小鼠相比，诱导性肝纤维化在第4周达到高峰，与之前的观察结果一致[21]. 然而，与我们的数据不同，其他研究人员发现CCl小鼠的疾病进展4-诱导的肝纤维化与CD4产生的IL-4增加和IFN-γ降低有关+Th2和CD4+Th1细胞[22]. 这种差异可能源于这些小鼠的不同遗传背景。此外，我们还检测到血浆IFN-γ和肝脏表达水平显著升高干扰素-CCl小鼠的γmRNA4-诱导肝纤维化，在第4周达到高峰。此外，我们发现血浆IFN-γ浓度和肝脏的表达干扰素-γmRNA与CCl小鼠脾脏Th1细胞百分比呈正相关4-诱导的肝纤维化。这些结果证实了干扰素-γ主要由CCl小鼠的Th1细胞分泌4-Th1细胞数量增加和IFN-γ水平升高可能参与了肝纤维化的发病机制。
Th17细胞已被证明参与了肝纤维化的发病机制。病毒性肝炎患者病变肝脏中Th17细胞的频率与肝纤维化相关[23,24]、自身免疫性肝炎[25]和酒精性肝病[26]. 我们发现CCl小鼠脾脏Th17细胞的百分比显著增加4-与对照小鼠相比，诱导了肝纤维化，并在第4周达到峰值，与之前的观察结果一致[21]. 然而，与我们的数据不同，其他研究人员发现CCl小鼠Th17细胞的频率逐渐增加4-诱导肝纤维化。第4周亚组与对照组之间的差异不显著。与对照组相比，第8周和第12周亚组的Th17细胞频率显著增加[27]. 这种差异可能源于这些小鼠的不同遗传背景。此外，我们还检测到血浆IL-17A和肝脏表达水平显著升高伊利诺伊州-CCl小鼠的17A mRNA4-诱导肝纤维化，在第4周达到高峰。一些研究人员证明，IL-17A和IL-17RA缺乏可保护小鼠免受CCl诱导的肝纤维化4和胆管结扎术[28-30]. Tan等人[29]最近有报道称，CCl中HSC的激活和胶原蛋白的生成4-诱导的肝纤维化依赖于IL-17A。因此，IL-17A中和可能是慢性肝病患者抗纤维化治疗的一种有前景的方法。此外，我们发现血浆IL-17A浓度和肝脏的表达伊利诺伊州-17A mRNA与CCl小鼠脾脏Th17细胞百分比呈正相关4-诱导肝纤维化。这些发现证实了IL-17A主要由CCl小鼠的Th17细胞分泌4-Th17细胞数量增加和IL-17A水平升高可能参与了肝纤维化的发病机制。
Th22细胞在炎症和自身免疫性疾病中起着复杂而重要的作用。最近研究表明，Th22细胞可能在特应性皮炎、免疫性血小板减少、结核性胸腔积液和病毒性心肌炎的发病机制中发挥作用。然而，Th22细胞在肝纤维化中的潜在作用尚不清楚。这项研究表明，脾脏Th22细胞在患有CCl的小鼠中高度表达4-诱导的肝纤维化与对照组相比，在第4周达到高峰。这些发现表明炎症和肝纤维化的免疫微环境适合Th22细胞的分化和增殖。我们还检测到血浆IL-22和肝脏表达水平显著升高伊利诺伊州-CCl小鼠中的22 mRNA4-诱导肝纤维化，在第4周达到高峰。此外，我们发现血浆IL-22浓度和肝脏的表达伊利诺伊州-22mRNA与CCl小鼠脾脏Th22细胞百分比呈正相关4-诱导肝纤维化。这些结果证实，CCl小鼠的IL-22主要由Th22细胞分泌4-Th22细胞数量增加和IL-22水平升高可能参与了肝纤维化的发病机制。此外，CCl小鼠的Th22细胞与Th1细胞、Th22细胞和Th17细胞、Th17细胞和Th1细胞之间也存在正相关4-诱导肝纤维化。这些正相关表明，这些T细胞亚群可能在肝纤维化的发展中发挥协同作用。
IL-22是Th22细胞中的关键细胞因子，介导其作用通过IL-22R并传播下游信号，包括JAK/STAT、ERK、JNK、PI-3K和p38MAP激酶途径。例如，其他研究人员此前已经证明IL-22在保护肝脏免受损伤方面发挥着重要作用[31-33]，改善脂肪肝[15,34]促进肝脏再生[34]. 在本研究中，我们确定了IL-22在肝纤维化中的保护作用。在不同的动物模型中观察到IL-22的这种保护作用。我们的研究表明，与载体组相比，rmIL-22显著减轻了肝脏炎症、坏死和纤维化。根据ISHAK纤维化评分系统和计算机化形态定量Masson染色评估，rmIL-22组的纤维化评分显著低于携带者组。与载体组相比，rmIL-22显著减少了α-SMA染色面积，这表明活化的HSC数量减少。由于HSC激活负责ECM的生成，肝硬化肝内血管生成和血管重塑[1]这表明rmIL-22治疗通过靶向CCl小鼠模型中的HSC改善肝纤维化4-诱导性肝纤维化[16].
在我们的实验研究中，我们证明rmIL-22不仅降低了肝脏炎症，而且显著抑制了HSC的激活。与携带者组相比，这些变化伴随着脾脏中Th22、Th17和Th1细胞浸润的显著下调。rmIL-22治疗降低了Th22、Th17和Th1细胞的比例。我们的数据表明，rmIL-22通过调节Th22、Th17和Th1细胞的分化发挥其治疗作用。此外，我们发现rmIL-22降低了总循环IL-22、IL-17A和IFN-γ蛋白的水平，远低于携带者组。同样，与携带者组相比，rmIL-22组IL-22、IL-17A、IFN-γ、AHR、RORγt和t-bet mRNA水平显著降低。
Th22、Th17和Th1细胞的分化在很大程度上依赖于免疫系统产生的细胞因子。我们发现rmIL-22降低了CCl小鼠促炎细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的蛋白和mRNA浓度4-诱导肝纤维化。这一观察表明，rmIL-22调节了肝纤维化的免疫反应。先前的证据表明，rmIL-22显著下调了产脂小鼠肝脏中的TNF-α和其他基因[35]. 注射抗IL-22抗体后，急性病毒性心肌炎小鼠TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白水平显著上调[36]. 最近的证据表明，T辅助细胞的发育在很大程度上取决于其细胞因子环境。细胞因子IL-1β增强Th1和Th17反应[37,38]，IL-6加TGF-β诱导Th17反应[39,40]而IL-6加TNF-α诱导Th22反应[10]. TNF-α通过使树突状细胞具有诱导T细胞向Th1和Th17表型转化的能力而成为潜在的促发因子[41]. 因此，rmIL-22很可能通过调节细胞因子（TNF-α、IL-6和IL-1β）的释放来抑制Th22、Th17和Th1反应。
总之，本研究表明，CCl小鼠的Th22、Th17和TH1细胞数量显著增加4-诱导肝纤维化。另一方面，我们证明IL-22对肝纤维化小鼠具有深刻的抗纤维化作用。IL-22通过抑制TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌，限制Th22、Th17和Th1反应的发展。IL-22介导的细胞因子释放似乎是治疗肝纤维化的一个有希望的治疗靶点，尽管这一推测需要进一步严格的研究。
评论
背景
肝纤维化是一种常见的慢性进行性肝病，严重威胁人类健康，因此，预防其发生至关重要。然而，迄今为止，肝纤维化的发病机制尚未完全阐明。辅助性T细胞（Th）-22、Th17和Th1细胞是T淋巴细胞亚群。一些研究报道，Th22、Th17和Th1细胞与许多自身免疫性疾病密切相关。然而，Th22细胞和白细胞介素（IL）-22在肝纤维化中的功能特点尚未见报道。
研究前沿
Th22、Th17和Th1细胞与多种自身免疫性疾病密切相关。IL-22通过抑制肿瘤坏死因子-α、IL-6和IL-1β的分泌，阻止肝纤维化的发生，从而限制Th22、Th17和Th1反应的发展。
创新和突破
这被认为是第一次研究确定Th22细胞和IL-22在CCl中的作用4-诱导小鼠肝纤维化及其潜在机制。本研究表明，Th22细胞在肝纤维化中的比例较高，IL-22显著抑制肝星状细胞的激活。
应用
IL-22介导的细胞因子释放似乎是治疗肝纤维化的一个有希望的治疗靶点。
术语
Th22（产生IL-22的CD4+T辅助细胞）、Th17（产生IL-17的CD4+T辅助细胞）和Th1（干扰素γ产生CD4+辅助T细胞）被描述为三个额外的T淋巴细胞亚群，它们可以通过释放不同的细胞因子来协调宿主免疫反应。
同行评审
这是一项很好的描述性研究，作者分析了Th22、Th17和Th1细胞对CCl的影响4-诱导小鼠肝纤维化。结果很有趣，表明IL-22是一个潜在的治疗靶点，可以用于预防肝纤维化的发生。
脚注
国家自然科学基金资助项目81260083；广西自然科学基金项目，No.2014jjAA40237。
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同行评审开始时间：2014年5月20日
第一次决定：2014年6月27日
新闻稿：2014年10月15日
P-审核人：高B，Khattab MA，徐Y S-编辑：Gou SX L-编辑：O'Neill M E-编辑：Liu XM
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2Hashimoto N、Shimoda S、Kawanaka H、Tsuneyama K、Uehara H、Akahoshi T、Kinjo N、Taketomi A、Shirabe K、Akashi K等。丙型肝炎病毒相关性肝硬化脾切除术后CD4~+T细胞反应的调节。临床实验免疫学。2011;165:243–250. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 三。Heymann F、Hammerich L、Storch D、Bartneck M、Huss S、Rüsseler V、Gassler N、Lira SA、Luedde T、Trautwein C等。小鼠体内对肝纤维化至关重要的肝巨噬细胞迁移和分化由趋化因子受体C-C基序趋化因子8介导。肝病学。2012;55:898–909. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 4.Karlmark KR，Wasmuth HE，Trautwein C，Tacke F.急慢性肝病中趋化因子导向的免疫细胞浸润。胃肠病学专家肝素。2008;2:233–242.[公共医学][谷歌学者] 5Littman DR，Rudensky AY。Th17和调节性T细胞介导和抑制炎症。单元格。2010;140:845–858.[公共医学][谷歌学者] 6Miosec P、Korn T、Kuchro VK。白细胞介素-17和17型辅助性T细胞。N英格兰医学杂志。2009;361:888–898.[公共医学][谷歌学者] 7Baroni GS、D'Ambrosio L、Curto P、Casini A、Mancini R、Jezequel AM、Benedetti A。γ干扰素降低大鼠肝纤维化中肝星状细胞的活化和细胞外基质的沉积。肝病学。1996;23:1189–1199.[公共医学][谷歌学者] 8Zhang JY，Song CH，Shi F，Zhang Z，Fu JL，Wang FS。在接受恩替卡韦治疗的慢性乙型肝炎患者中，Treg细胞与Th17细胞比率的降低与HBV DNA抑制相关。公共科学图书馆一号。2010;5：e13869。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 9牛毅，刘浩，尹德，易锐，陈T，薛H，张S，林S，赵毅。肝内IL-17（+）T细胞和Foxp3（+）调节性T细胞之间的平衡在HBV相关的终末期肝病中起着重要作用。BMC免疫学。2011;12:47. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 10Duhen T、Geiger R、Jarrosay D、Lanzavecchia A、Sallusto F。人类皮肤归巢记忆T细胞亚群产生白细胞介素22而非白细胞介素17。自然免疫学。2009;10:857–863.[公共医学][谷歌学者] 11Trifari S、Kaplan CD、Tran EH、Crellin NK、Spits H。鉴定富含白细胞介素22且与T（H）-17、T（H。自然免疫学。2009;10:864–871.[公共医学][谷歌学者] 12Zenewicz LA、Yancopoulos GD、Valenzuela DM、Murphy AJ、Karow M、Flavell RA。白介素-22而非白介素-17在急性肝炎症期间对肝细胞提供保护。免疫。2007;27:647–659. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 13Radaeva S，Sun R，Pan HN，Hong F，Gao B。白细胞介素22（IL-22）在T细胞介导的小鼠肝炎中起保护作用：IL-22是通过STAT3激活的肝细胞生存因子。肝病学。2004;39:1332–1342.[公共医学][谷歌学者] 14Ren X、Hu B、Colletti LM。IL-22参与肝切除术后肝再生。美国生理学杂志胃肠病学肝病生理学。2010;298：G74–G80。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 15Yang L，Zhang Y，Wang L，Fan F，Zhu L，Li Z，Ruan X，Huang H，Wang Z，Huang-Z，et al.白细胞介素-22改善高脂饮食诱导的肝脂肪生成和肝脂肪变性。肝素杂志。2010;53:339–347.[公共医学][谷歌学者] 16Kong X，Feng D，Wang H，Hong F，Bertola A，Wang FS，Gao B。白细胞介素-22诱导小鼠肝星状细胞衰老并限制肝纤维化。肝病学。2012;56:1150–1159. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 17.Holt AP、Salmon M、Buckley CD、Adams DH。肝纤维化中的免疫相互作用。临床肝病。2008;12：861-882，x。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 18Weng HL，Feng DC，Radaeva S，Kong XN，Wang L，Liu Y，Li Q，Shen H，Gao YP，Müllenbach R，等。IFN-9抑制HBV感染患者和3,5-二乙氧羰基-1,4-二氢吡啶饮食喂养小鼠的肝祖细胞增殖。肝素杂志。2013;59:738–745. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 19.Gao B，Waisman A.Th17细胞通过靶向多种细胞类型调节肝纤维化：多鸟一石。胃肠病学。2012;143:536–539.[公共医学][谷歌学者] 20Shi Z，Wakil AE，Rockey DC。小鼠肝创伤愈合中的菌株特异性差异由不同的T辅助细胞因子反应介导。美国国家科学院程序。1997;94:10663–10668. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 21Tu CT，Li J，Wang FP，Li L，Wang JY，Jiang W.甘草甜素通过JNK，ERK和PI3K/AKT途径调节肝纤维化过程中的CD4+T细胞反应。国际免疫药理学。2012;14:410–421.[公共医学][谷歌学者] 22通过基因打靶产生的Bot A.免疫球蛋白缺乏小鼠作为研究免疫反应的模型。国际免疫学评论。1996;13:327–340.[公共医学][谷歌学者] 23孙总部、张JY、张H、邹ZS、王FS、贾建华。Th17细胞的增加有助于HBV相关肝硬化患者的疾病进展。《病毒性肝炎杂志》。2012;19:396–403.[公共医学][谷歌学者] 24葛杰、王凯、孟庆华、齐志新、孟福禄、范永春。慢性活动性乙型肝炎患者Th17和Th1细胞的意义。临床免疫学杂志。2010;30:60–67.[公共医学][谷歌学者] 25Longhi MS、Liberal R、Holder B、Robson SC、Ma Y、Mieli-Vergani G、Vergani D。在自身免疫性肝炎患者中，白细胞介素17的抑制促进CD25细胞分化为稳定的T调节细胞。胃肠病学。2012;142：1526–1535.e6。[公共医学][谷歌学者] 26Lemmers A、Moreno C、Gustot T、Maréchal R、Degre D、Demetter P、de Nadai P、Geerts A、Quertinmont E、Vercruysse V等。白介素-17途径与人类酒精性肝病有关。肝病学。2009;49:646–657.[公共医学][谷歌学者] 27孙晓芳，顾磊，邓伟思，徐琼。四氯化碳诱导小鼠肝纤维化中辅助性T细胞17/T调节细胞平衡受损。世界胃肠病学杂志。2014;20:2062–2070. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 28Meng F、Wang K、Aoyama T、Grivennikov SI、Paik Y、Scholten D、Cong M、Iwaisako K、Liu X、Zhang M等。炎症、Kupffer细胞和肝星状细胞中的白细胞介素-17信号传导加剧了小鼠的肝纤维化。胃肠病学。2012;143：765–776.e1-e3。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 29Tan Z，Qian X，Jiang R，Liu Q，Wang Y，Chen C，Wang X，Ryffel B，Sun B。IL-17A通过肝星状细胞活化在肝纤维化的发病机制中发挥关键作用。免疫学杂志。2013;191:1835–1844.[公共医学][谷歌学者] 30.Hara M、Kono H、Furuya S、Hirayama K、Tsuchiya M、Fujii H。白细胞介素-17A在小鼠胆汁淤积性肝纤维化中起着关键作用。外科研究杂志。2013;183:574–582.[公共医学][谷歌学者] 31Mastelic B、do Rosario AP、Veldhoen M、Renauld JC、Jarra W、Sponaas AM、Roetynck S、Stockinger B、Langhorne J.IL-22保护肝脏病理学和实验性血期疟疾感染的致死性。前免疫。2012;三:85. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 32Chestovich PJ、Uchida Y、Chang W、Ajalat M、Lassman C、Sabat R、Busuttil RW、Kupiec Weglinski JW。白细胞介素-22：与肝脏缺血再灌注损伤的关系。移植。2012;93:485–492. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 33Xing WW、Zou MJ、Liu S、Xu T、Gao J、Wang JX、Xu DG。IL-22对d-氨基半乳糖和脂多糖诱导的小鼠暴发性肝衰竭的肝保护作用。细胞因子。2011;56:174–179.[公共医学][谷歌学者] 34Ki SH，Park O，Zheng M，Morales Ibanez O，Kolls JK，Bataller R，Gao B。白细胞介素-22治疗改善慢性酗酒乙醇喂养小鼠模型中的酒精性肝损伤：信号转导子和转录激活子的作用3。肝病学。2010;52:1291–1300. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 35Park O，Wang H，Weng H，Feigenbaum L，Li H，Yin S，Ki-SH，Yoo SH，Dooley S，Wang FS，et al.小鼠肝脏特异性白细胞介素22表达的体内后果：对人类肝病进展的影响。肝病学。2011;54:252–261. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 36孔Q，吴伟，杨峰，刘毅，薛毅，高敏，赖伟，潘克星，严毅，庞毅，等。柯萨奇病毒B3诱导的小鼠急性病毒性心肌炎中IL-22和Th22细胞表达增加。维罗尔J。2012;9:232. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 37Ben-Sasson SZ、Hu-Li J、Quiel J、Cauchetaux S、Ratner M、Shapira I、Dinarello CA、Paul WE。IL-1直接作用于CD4 T细胞，以增强其抗原驱动的扩增和分化。美国国家科学院程序。2009;106:7119–7124. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 38Chung Y，Chang SH，Martinez GJ，Yang XO，Nurieva R，Kang HS，Ma L，Watowich SS，Jetten AM，Tian Q等。白细胞介素-1信号对早期Th17细胞分化的关键调节。免疫。2009;30:576–587. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 39.Veldhoen M、Hocking RJ、Atkins CJ、Locksley RM、Stockinger B.炎症细胞因子环境中的TGFbeta支持产生IL-17的T细胞的从头分化。免疫。2006;24:179–189.[公共医学][谷歌学者] 40Zhou L，Ivanov II，Spolski R，Min R，Shenderov K，Egawa T，Levy DE，Leonard WJ，Littman DR.IL-6通过促进IL-21和IL-23途径的顺序参与来编程T（H）-17细胞分化。自然免疫学。2007;8:967–974.[公共医学][谷歌学者] 41岩本S、岩井S、筑山K、仓桥C、竹下K、Naoe M、Masunaga A、Ogawa Y、Oguchi K、宫崎A。TNF-α驱动人CD14+单核细胞分化为CD70+树突状细胞，引发Th1和Th17反应。免疫学杂志。2007;179:1449–1457.[公共医学][谷歌学者] 
