美国国家科学院院刊。1984年12月；81(24): 7728–7731.
黄曲霉毒素的高亲和力单克隆抗体及其在固相免疫分析中的应用。
摘要
将小鼠SP-2骨髓瘤细胞与用与牛丙种球蛋白共价结合的黄曲霉毒素B1免疫的小鼠脾细胞融合后，获得了对黄曲霉素B1、黄曲霉肽B2、黄曲毒素M1和主要黄曲霉蛋白-DNA加合物特异性的单克隆抗体。用于免疫小鼠的黄曲霉毒素修饰蛋白是通过将黄曲霉素B1活化为2,3-环氧衍生物，然后与该蛋白共价结合而产生的。分离出的一种单克隆抗体（2B11）是一种高亲和力IgM抗体，对黄曲霉毒素B1、黄曲霉素B2和黄曲霉霉素M1的亲和力常数约为1×10（9）升/摩尔。在使用[3H]黄曲霉蛋白酶B1、3 pmol（1 ng）黄曲霉酶B1、，或黄曲霉毒素M1对该抗体的抑制率为50%。该抗体还对主要黄曲霉毒素-DNA加合物具有显著的交叉反应性：2,3-二氢-2-（N7-鸟苷基）-3-羟基黄曲霉素B1和2,3-二羟基-2-（N-甲酰基-2'，5'，6'-三氨基-4'oxo-N5-嘧啶基）-3-hydroxyaflatoxin B1。抗体也与Sepharose-4B共价结合，并用于柱状固相免疫吸附分析系统。通过将混合物应用于该抗体亲和柱纯化系统，定量回收体外添加到磷酸盐缓冲液、人尿液、人血清或人乳中的黄曲霉毒素，所述黄曲霉毒素的水平预期在从环境暴露个体获得的人类样品中获得。使用注射放射性标记黄曲霉毒素B1的大鼠尿液样本进行的初步研究也表明，这些方法可以分离黄曲霉素代谢物。此外，我们发现单克隆抗体亲和柱可以再生以供多次使用。因此，单克隆抗体及其在亲和色谱中的应用代表了一种有用且快速的技术，可以净化这种致癌物及其某些代谢物的环境发生水平，以便进行定量测量。
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