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美国国家科学院程序。1979年8月;76(8): 3683–3687.
数字对象标识:10.1073/pnas.76.8.3683
预防性维修识别码:项目经理383897
PMID:291033

高效地将琼脂糖凝胶中的大DNA片段转移到重氮苯甲氧基甲基片上,并使用硫酸葡聚糖进行快速杂交。

摘要

我们描述了一种将电泳分离的双链DNA条带从琼脂糖凝胶转移到重氮苯甲氧基甲基板的技术。通过用稀酸进行顺序处理,控制DNA的原位切割,这会导致部分脱尿,而稀碱则会导致链的切割和分离,这使得DNA能够快速、完全地离开凝胶,其效率与凝胶的大小无关。DNA与纸张的共价连接可防止后续杂交和清洗步骤中的损失,并允许一张纸多次重复使用。最初发现,10%的硫酸葡聚糖可将溶液中的DNA杂交速度提高约10倍[J.G.Wetmur(1975)Biopolymers 14,2517-2524],可将随机切割的双链DNA探针与固定核酸的杂交速度提高100倍,而不会显著增加背景。

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