跳到主要内容
访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
投资眼科视觉科学。作者手稿；PMC 2013年10月17日提供。
以最终编辑形式发布为：
投资眼科视觉科学。2008年7月；49(7): 3239–3244.
2008年3月31日在线发布。 数字对象标识：10.1167/iovs.08-1755
预防性维修识别码：项目经理3798055
美国国立卫生研究院：美国国立卫生研究院518302
PMID：18378574

NADPH氧化酶在视网膜血管炎症中的作用

穆罕默德·萨布劳维,*,1中，2 莫德斯托·罗哈斯,2 塔米·桑德斯,1 阿里·贝扎迪安,2,三 阿扎·埃尔·雷梅西,三，4 马努埃拉·巴托利,2,5 阿卜杜勒·卡德·帕皮亚,6 格雷戈里·刘,7和露丝·B·考德威尔*,2,7,8,9
作者信息 版权和许可信息 PMC免责声明

摘要

目的

另一项研究表明，NADPH氧化酶衍生活性氧物种（ROS）对缺血诱导的血管内皮生长因子（VEGF）增加和视网膜新生血管形成具有重要作用。糖尿病诱导的视网膜ROS、VEGF表达和血管通透性增加伴随着视网膜血管内NADPH氧化酶催化亚单位NOX2的增加。本研究的目的是评估NOX2和NADPH氧化酶活性在视网膜血管炎症发展中的潜在作用。

方法

在内毒素血症和链脲佐菌素诱导的糖尿病模型中，对野生型小鼠、缺乏NOX2的小鼠和用NADPH氧化酶抑制剂apocynin治疗的小鼠进行了研究。通过Western blot分析测定细胞内粘附分子（ICAM）-1的表达。通过用伴刀豆球蛋白A标记粘附的白细胞来评估白细胞粘附。通过FITC-结合白蛋白外渗来评估血管通透性。通过二氯荧光素成像测定ROS生成。

结果

NOX2的缺失显著抑制了内毒素血症和糖尿病诱导的ICAM-1表达增加和白细胞抑制，表明该酶在这两种情况下都起着关键作用。此外，apocynin治疗和NOX2的缺失在预防糖尿病诱导的ICAM-1增加、白细胞抑制和血-视网膜屏障破坏方面同样有效，这表明NOX2是糖尿病视网膜病变早期症状的主要原因。

结论

这些数据表明，在与视网膜血管炎症反应相关的急慢性条件下，NOX2活性在视网膜血管炎症中起主要作用。以这种酶为靶点可能是治疗血管炎症相关视网膜病变的一种新的治疗策略。

血管炎症是各种潜在致盲性视网膜疾病的共同特征，这些疾病与视网膜血管通透性增高和玻璃体视网膜新生血管形成有关。炎症反应的早期特征是白细胞粘附在血管壁上。粘连导致视网膜毛细血管堵塞和不灌注，继而导致血管损伤和高渗透性。1——三黏附分子胞内黏附分子（ICAM）-1的表达增加在介导白细胞与血管内皮细胞的黏附中起主要作用，这与缺血性视网膜病、糖尿病视网膜病和葡萄膜炎相关的血管损伤有关。4——7

各种报告表明，活性氧是生长因子和细胞因子诱导的血管炎症的强制性介质。8,9此外，ROS激活转录因子NF-κB和AP-1在诱导炎症细胞因子和ICAM-1的表达中起着核心和关键作用。10——13先前的研究表明，糖尿病诱导的VEGF表达增加、白细胞粘附和血-视网膜屏障（BRB）破坏都与氧化应激增加有关。14——17氧化应激在触发视网膜血管炎症过程中的具体作用尚不清楚。然而，对动脉粥样硬化和其他形式的外周血管疾病模型的研究表明NADPH氧化酶参与炎症反应。18

在吞噬细胞中，NADPH氧化酶是一种由膜结合细胞色素组成的多蛋白复合物b条558，由催化亚单位NOX2（以前称为gp91）组成凤凰（phox）)，第22页凤凰（phox），细胞质亚基p47凤凰（phox）和p67凤凰（phox）和小型Rho GTPase Rac。血管内皮细胞表达相同的亚单位以及两个NOX2同源物NOX1和NOX4（有关综述，请参阅参考文献。18). 我们以前在动物和组织培养模型中的研究表明，NOX2在正常视网膜和维持在对照条件下的视网膜内皮细胞中低水平表达，但在糖尿病或缺血性视网膜病动物的视网膜血管和暴露于高糖或缺氧的视网膜内皮细胞中显著增加。此外，我们还发现，在糖尿病和缺血性视网膜病变期间，抑制NADPH氧化酶可阻断VEGF表达的上调19,20防止缺血性视网膜病变期间玻璃体视网膜新生血管。20本研究的目的是确定NADPH氧化酶和NOX2在内毒素血症和糖尿病视网膜病急性和慢性血管炎症反应相关的视网膜血管炎症中的具体作用。

材料和方法

动物的治疗

所有与动物相关的程序均按照ARVO《关于在眼科和视力研究中使用动物的声明》进行，并得到机构动物护理和使用委员会的批准（动物福利保障编号A3307-01）。实验使用C57Bl/6J小鼠和年龄匹配的NOX2缺乏小鼠在C57B1/6背景下回交（马萨诸塞州巴尔港Jackson Laboratories）。在实验之前对NOX2缺陷小鼠进行基因分型。

视网膜血管炎症小鼠模型

向缺乏NOX2的小鼠和年龄匹配的野生型小鼠（25 g）注射来自鼠伤寒沙门菌（LPS，0.1 mg/kg，PBS，IP；Sigma-Aldrich，St.Louis，MO）作为急性视网膜血管炎症模型。年龄匹配的对照小鼠单独接受载体。24小时后处死小鼠，准备量化视网膜中的白细胞粘附和ICAM-1表达。

糖尿病视网膜病变小鼠模型

年龄匹配的野生型和NOX2的其他组−/−通过腹腔注射溶于0.1 M新鲜柠檬酸缓冲液（pH 4.5）中的55 mg/kg链脲佐菌素（STZ；Sigma-Aldrich），使小鼠（25 g）成为糖尿病小鼠。当血糖水平超过250 mg/dL时，这些动物被视为糖尿病动物。在实验期间，用罗布青素（10 mg/kg/d，溶于饮用水中）治疗一些糖尿病小鼠。在高血糖5周后，对糖尿病小鼠和年龄匹配的正常血糖对照小鼠进行通透性或白细胞粘附的量化。制备相同的动物组，分别处理视网膜进行蛋白质分析或冰冻切片和免疫组织化学分析。

白细胞粘附分析

如前所述，对白细胞与视网膜血管壁的粘附性进行了评估，但略有改变。2深度麻醉诱导后，小心地打开胸腔，并将20号灌注套管插入主动脉。通过打开右心房实现引流。然后用10毫升磷酸盐缓冲盐水（PBS）灌流动物，以清除非粘附血细胞。接下来，用10 mL荧光异硫氰酸盐（FITC）标记刀豆球蛋白A（Con A）凝集素（40μg/mL，PBS，pH 7.4；Vector Laboratories，加利福尼亚州伯灵盖姆）标记粘附的白细胞和血管内皮细胞。用PBS灌注去除残留的未结合Con A。去除眼球并用4%多聚甲醛固定。然后通过荧光显微镜观察视网膜，并测定每个视网膜上粘附的白细胞总数。用特异性抗CD45抗体（加利福尼亚州圣地亚哥BD-PharMingen）进行CD45免疫组化，以确认血管内Con a染色的细胞为白细胞。

BRB渗透率分析

如前所述测量视网膜血管通透性。21糖尿病小鼠和对照小鼠均接受颈外静脉注射10 mg/kg牛血清白蛋白（BSA）-Alexa Fluor 488缀合物（Invitrogen Molecular Probes，Eugene，OR）。30分钟后，将眼睛取出，嵌入最佳切割温度（OCT）嵌入介质中，并在液氮中快速冷冻-μ制备了m厚切片。60岁时收集图像（每节三张）-μ每只视网膜的10个切片间隔m。通过对视网膜图像中非血管区域的荧光素水平进行形态计量分析，测量示踪剂外渗。使用荧光分光光度计（4000型；CytoFluor，加利福尼亚州福斯特市）分析血浆中的BSA-荧光素浓度。根据同一动物血浆中示踪剂的浓度，对视网膜切片中的荧光素强度进行标准化。

Western Blot分析

为了分析ICAM-1，在改良的RIPA缓冲液（20 mM Tris-HCl[pH7.4]，2.5 mM EDTA，50 mM NaF，10 mM Na4P（P）2O（运行）7、1%Triton X-100、0.1%十二烷基硫酸钠、1%脱氧胆酸钠和1mM苯基甲基磺酰氟），以及50-μg蛋白样品通过10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，转移到硝化纤维素膜上，并与抗ICAM-1（1:200兔抗人抗体；加州圣克鲁斯圣克鲁斯生物技术公司）反应随后是辣根过氧化物酶连接的第二抗体和增强化学发光（GE Healthcare，San Francisco，CA）。为了β-肌动蛋白显示等负荷，并使用密度测定法对结果进行分析。

NADPH氧化酶活性的测定

使用视网膜冷冻切片的二氯荧光素成像来测定NADPH氧化酶的活性。二氯荧光素（DCF）是2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯（DHDCF；Invitrogen）的氧化产物，它发出绿色荧光信号，是细胞被过氧化氢、过氧亚硝酸盐和羟基自由基氧化的标志。22视网膜切片与NADPH（100μM） 和DHDCF（10μM） 在37°C下保持20分钟。通过在含有或不含PEG-SOD、过氧化氢酶或载脂蛋白（Sigma-Al-drich）的DHDCF缓冲液中培养视网膜切片来确定反应的特异性。用荧光显微镜测量DCF形成，收集图像，并用计算机辅助形态计量学测定荧光强度。

统计分析

通过ANOVA和事后比较评估组间差异。结果被认为在P（P）<0.05. 数据表示为平均值±SE。

结果

LPS诱导NOX2缺乏小鼠视网膜白细胞粘附和ICAM-1表达增加的消除

为了评估含NOX2的NADPH氧化酶活性是否在视网膜血管炎症中起作用，我们分析了经LPS处理的野生型和NOX2缺乏小鼠视网膜血管中的白细胞粘附。与野生型相比，缺乏NOX2的LPS注射小鼠的粘附白细胞数量减少了约60%（平均值±SE±53±17 vs.127±13；图1A). CD45的免疫反应证实粘附细胞是白细胞(图1B). 由于ICAM-1是白细胞粘附的关键介质，我们测试了NOX2的缺失是否影响其在视网膜中的表达。我们的Western blot分析显示，LPS治疗后，ICAM-1在视网膜的表达显著增加。然而，这种增加在缺乏NOX2的小鼠中显著减少(图2)。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为nihms518302f1.jpg

LPS注射小鼠白细胞与内皮细胞相互作用的评估。野生型小鼠和缺乏NOX2的小鼠被注射LPS（0.1 mg/kg，腹腔内）作为急性视网膜血管炎症模型。用Con A凝集素标记的扁平视网膜(A类)显示视网膜血管中粘附的白细胞数量增加(箭头)注射LPS的野生型小鼠（+/+）与缺乏NOX2的小鼠（−/−）相比*P（P）<0.05与WT(n个=5). (B类)Con A和抗CD45抗体的免疫标记证实粘附细胞是白细胞。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为nihms518302f2.jpg

LPS注射小鼠ICAM-1的Western blot分析。与对照组小鼠（C）相比，注射LPS的野生型小鼠（+/+）ICAM-1增加。在缺乏NOX2（LPS）的小鼠中，该作用被显著抑制−/−)*P（P）<0.05与对照组#P（P）<0.05相对于LPS+/+(n个=3).

通过删除NOX2或抑制NADPH氧化酶阻断糖尿病诱导的白细胞粘附和ICAM-1表达增加

为了测试NOX2表达和NADPH氧化酶活性是否在糖尿病视网膜病变相关的血管炎症过程中起作用，我们检测了缺乏NOX2或用apocynin治疗的糖尿病小鼠视网膜中白细胞-内皮细胞粘附和ICAM-1的表达。白细胞粘附分析显示糖尿病视网膜中粘附白细胞的数量显著增加。NOX2或apocynin处理的缺失显著降低了这种增加(图3). 此外，Western blot分析显示糖尿病视网膜中ICAM-1的表达显著增加，这也被罗布青素或NOX2缺失完全阻断(图4). 这些结果表明，含NOX2的NADPH氧化酶的活性与糖尿病视网膜中白细胞-内皮细胞的附着密切相关。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为nihms518302f3.jpg

用Con A凝集素评估糖尿病小鼠白细胞与内皮细胞的相互作用。用Con A凝集素标记的扁平视网膜显示糖尿病野生型小鼠（DM）视网膜血管中粘附的白细胞增加+/+)与对照野生型小鼠（C）相比，缺乏NOX2（DM）的糖尿病小鼠白细胞减少−/−)或用罗布麻素（DM+罗布麻）治疗*P（P）<0.05与C#P（P）<0.05与DM+/+(n个=7).

保存图片、插图等的外部文件。对象名为nihms518302f4.jpg

糖尿病小鼠ICAM-1的Western blot分析。糖尿病野生型小鼠（DM）ICAM-1增加+/+)与对照小鼠（C）相比。在缺乏NOX2（D−/−)或用罗布青素（DM+罗布青霉素）治疗*P（P）<0.05与C#P（P）<0.05与DM+/+(n个=7).

NOX2缺失对糖尿病视网膜ROS形成的影响

为了评估NADPH氧化酶活性对糖尿病视网膜氧化应激的潜在贡献，我们使用闪光冷冻视网膜的实时DCF成像研究了ROS的生成。糖尿病小鼠的视网膜表现出ROS产生增加。删除NOX2或用apocynin治疗小鼠可阻止糖尿病诱导的ROS形成增加(图5)表明NOX2和NADPH氧化酶活性在糖尿病诱导的视网膜氧化应激增加中的作用。

保存图片、插图等的外部文件。对象名称为nihms518302f5.jpg

通过二氯荧光素（DCF）成像测量ROS的原位生成。糖尿病野生型小鼠（D+/+)与对照野生型小鼠相比（C）。NOX2中的增加被阻止−/−糖尿病小鼠（D−/−)以及用罗布青素（D+罗布青霉素）治疗的糖尿病小鼠*P（P）<0.05与C#P（P）<0.05与D+/+(n个=7).

NOX2缺失对糖尿病小鼠BRB的影响

因为ICAM-1表达和白细胞粘附的增加已被证明与糖尿病患者BRB的分解相关，2,23我们还测定了NOX2缺失和apocynin治疗对视网膜血管通透性的影响。通过BSA-Alexa-Fluro 488结合物外渗试验评估BRB功能表明，NOX2缺失或apocynin治疗可防止糖尿病引起的视网膜血管通透性增加(图6)表明含NOX2的NADPH氧化酶的活性也在调节糖尿病血管通透性增加中发挥作用。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为nihms518302f6.jpg

通过测量FITC-结合白蛋白的外渗定量BRB分解。糖尿病小鼠（DM）的血管通透性显著增加+/+)与对照野生型（C）或NOX2敲除（C−/−)老鼠。用罗布青素（DM-apocynin）治疗糖尿病小鼠或通过删除NOX2（DM）阻断通透性增加−/−). *P（P）<0.05与C#P（P）<0.05与DM+/+(n个=7).

讨论

这些实验表明，敲除NOX2或通过apocynin治疗抑制NADPH氧化酶活性可完全阻断糖尿病诱导的视网膜ICAM-1水平升高和白细胞粘附，并保持BRB。此外，NOX2缺失和罗布麻素处理也显著减少了ROS的形成，这意味着NADPH氧化酶衍生的ROS在炎症反应中的因果作用。据报道，在脂多糖诱导的内毒素血症期间，活性氧的生成是触发血管损伤的主要因素，24我们还测定了删除NOX2对LPS注射小鼠ICAM-1表达和白细胞抑制的影响。这些研究表明，LPS治疗后ICAM表达和白细胞抑制均显著增加，并且在缺乏NOX2的小鼠中这种作用被消除。这些发现证实了NOX2 NADPH氧化酶活性在急性和慢性疾病条件下介导视网膜血管炎症反应的重要性。

先前的研究表明，NADPH氧化酶活性与血管炎症反应之间存在潜在联系，这表明糖尿病诱导的氧化应激增加、VEGF和ICAM-1的表达、白细胞抑制和BRB的破坏都被辛伐他汀阻断，辛伐他汀可抑制NADPH酶。19,23研究表明，罗布青素可以阻止糖尿病诱导的系统氧化应激增加，也支持NADPH氧化酶在糖尿病组织损伤中的作用。25研究表明，用apocynin治疗可以预防糖尿病或玻璃体内注射血管紧张素II引起的视网膜白细胞增多，也支持NADPH氧化酶活性在视网膜病变中的作用。16进一步支持NADPH氧化酶在视网膜血管炎症反应中的作用的研究表明，在葡萄膜炎或糖尿病模型中，阻断血管紧张素II 1型受体信号传导（一种已知的NADPH酶激活刺激物）可以阻止白细胞粘附到视网膜血管和ICAM-1的表达。26,27对糖尿病猪冠状动脉的研究表明，糖尿病诱导的NADPH氧化酶活性增加伴随着炎症细胞因子（IL-6和TNF）的上调-α)、趋化因子（MCP-1）和血管细胞粘附分子（VCAM-1），进一步支持NADPH氧化酶在血管炎症中的作用。28总的来说，这些报告表明，NADPH氧化酶衍生的ROS在糖尿病或其他炎症条件下严重参与触发白细胞-内皮细胞粘附和血管损伤。

据我们所知，本研究首次表明NOX2与视网膜血管炎症和糖尿病诱导的BRB破坏密切相关。然而，与我们的发现一致的是，糖尿病诱导的ROS在NOX2基因敲除小鼠视网膜中的生成减少，其他人报告说，NOX2的缺失抑制了各种组织中ROS的生成，包括DOCA（脱氧皮质酮醋酸盐）盐诱导高血压的主动脉，29脑出血，30肺内动脉慢性缺氧，后肢缺血。31此外，在高胆固醇血症或脑缺血再灌注损伤的小鼠模型中，敲除NOX2可以减少白细胞粘附。32

在糖尿病的实验模型中，已经确定了氧化应激的各种来源。对糖尿病动物和体外暴露于高糖条件下的视网膜细胞的研究表明，线粒体电子传递链的激活是氧化应激的主要来源。33线粒体衍生的活性氧通过蛋白激酶C触发多条高血糖损伤途径的激活，包括NADPH氧化酶。34,35此外，其他模型中的研究表明，虽然线粒体衍生的活性氧对氧化应激反应的启动很重要，但NADPH氧化酶的活性需要维持足够水平的活性氧形成，以传导特定细胞反应。36——38需要进一步研究以确定线粒体ROS在糖尿病和内毒素血症模型中激活NADPH氧化酶的潜在作用。然而，我们的发现是，在LPS模型中，ICAM-1的视网膜表达增加和白细胞与内皮细胞的粘附被显著抑制，并且在缺乏NOX2的糖尿病小鼠或经apocynin治疗的糖尿病小鼠中完全被阻断，这有力地证明了NOX2和NADPH氧化酶活性在在两种模型中调节视网膜血管炎症反应。

还需要进一步的工作来确定NADPH氧化酶活性的特定细胞来源，该活性与我们在实验中观察到的视网膜血管炎症反应有关。NOX2由吞噬细胞和血管内皮细胞表达。在炎症或宿主防御反应期间，吞噬细胞NADPH氧化酶会产生高水平的ROS。在正常内皮细胞中，ROS主要由NOX4酶的活性产生。39,40然而，以前的研究表明，糖尿病和高糖治疗促进视网膜内皮细胞中NOX2水平的显著增加。19因此，吞噬细胞和内皮细胞衍生的活性氧似乎都参与了病理反应。

总之，我们目前的结果表明，NOX2 NADPH氧化酶产生的活性氧物种介导与视网膜血管疾病急性和慢性模型相关的视网膜血管炎症反应。抑制这种酶可能为改善视网膜病期间的血管损伤提供一种新的治疗策略。

致谢

由青少年糖尿病研究基金会（JDRF）、争取视力和美国心脏协会AHA00104（MA）资助；国家眼科研究所授予R01 EY04618和R01 EY11766，以及退伍军人管理职业发展奖（CDA）和绩效评估奖（RBC）。

脚注

披露：M.Al-Shabrawey先生，无；M.罗哈斯，无；T.桑德斯，无；A.贝扎迪安，无；A.El-Remessy公司，无；M.巴托利，无；A.K.帕皮亚，无；G.刘，无；R.B.考德威尔，无

工具书类

1阿达米斯亚太地区。糖尿病视网膜病变是一种炎症性疾病吗？英国眼科杂志。2002;86:363–365. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
2Joussen AM、Poulaki V、Le ML等。炎症在糖尿病视网膜病变发病机制中的中心作用。美国财务会计准则委员会J。2004;18:1450–1452.[公共医学][谷歌学者]
三。Miyamoto K、Hiroshiba N、Tsujikawa A、Ogura Y。糖尿病大鼠视网膜微循环中白细胞滞留增加的体内证明。投资眼科视觉科学。1998;39:2190–2194.[公共医学][谷歌学者]
4Ishida S、Yamashiro K、Usui T等。白细胞在疾病发展和血管闭塞过程中介导视网膜血管重塑。自然医学。2003;9:781–788.[公共医学][谷歌学者]
5Joussen AM、Murata T、Tsujikawa A、Kirchhof B、Bursell SE、Adamis AP。白细胞介导的糖尿病视网膜内皮细胞损伤和死亡。《美国病理学杂志》。2001年；158:147–152. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
6Koizumi K、Poulaki V、Doehmen S等。在体内内毒素诱导的葡萄膜炎中，TNF-α对白细胞粘附、血管渗漏和凋亡细胞死亡的作用。投资眼科视觉科学。2003;44:2184–2191.[公共医学][谷歌学者]
7Kern TS.炎症过程对糖尿病视网膜病变早期发展的贡献。实验糖尿病研究。2007;2007:95103. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
8Nagata M.炎症细胞和氧自由基。当前药物针对炎症过敏。2005年；4:503–504.[公共医学][谷歌学者]
9Hordijk PL.NADPH氧化酶的调节：Rac蛋白的作用。圆形Res。2006;98:453– 462.[公共医学][谷歌学者]
10王T，张X，李JJ。NF-kappaB在调节细胞应激反应中的作用。国际免疫药理学。2002;2:1509–1520.[公共医学][谷歌学者]
11Kitamei H、Iwabuchi K、Namba K等。用核因子κB（NF-kappaB）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯改善实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）。白血病生物学杂志。2006;79：1193–1201。[公共医学][谷歌学者]
12Fang IM，Yang CH，Lin CP，Yang CM，Chen MS。NF-kappaB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对实验性自身免疫性前葡萄膜炎细胞因子表达和眼部炎症的影响。《Ocul药理学与治疗杂志》。2005年；21:95–106.[公共医学][谷歌学者]
13Chen CC、Chow MP、Huang WC、Lin YC、Chang YJ。类黄酮通过激活蛋白-1和核因子-kappaB抑制肿瘤坏死因子α诱导的呼吸道上皮细胞细胞间粘附分子-1（ICAM-1）上调：结构-活性关系。摩尔药理学。2004;66:683– 693.[公共医学][谷歌学者]
14El-Remessy AB、Behzadian MA、Abou-Mohamed G、Franklin T、Caldwell RW、Caldwill RB。实验性糖尿病通过酪氨酸硝化和血管内皮生长因子和尿激酶纤溶酶原激活物受体表达增加的机制导致血-视网膜屏障的破坏。《美国病理学杂志》。2003;162:1995–2004. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
15Abiko T，Abiko A，Clermont AC等。胰岛素抵抗和糖尿病患者视网膜白细胞沉积和血流动力学特征：氧化剂和蛋白激酶C激活的作用。糖尿病。2003;52:829– 837.[公共医学][谷歌学者]
16Chen P，Guo AM，Edwards PA，Trick G，Scicli AG。NADPH氧化酶在血管紧张素II在糖尿病诱导的视网膜白细胞增多中的作用。美国生理学杂志Regul Integr Comp Physiol。2007;293（4） ：R1619–R1629。[公共医学][谷歌学者]
17Kern TS、Miller CM、Du Y等。局部服用奈帕芬酸可抑制糖尿病引起的视网膜微血管疾病以及潜在的视网膜代谢和生理异常。糖尿病。2007;56:373–379.[公共医学][谷歌学者]
18Griendling KK、Sorescu D、Ushio-Fukai M.NAD（P）H氧化酶：在心血管生物学和疾病中的作用。圆形Res。2000;86:494–501.[公共医学][谷歌学者]
19Al-Shabrawey M、Bartoli M、El-Remessy A等。NADPH氧化酶和Stat3在他汀类药物介导的糖尿病视网膜病变保护中的作用。投资眼科视觉科学。2008;49:3231–3238. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
20Al-Shabrawey M，Bartoli M，El-Remessy AB，等。抑制NAD（P）H氧化酶活性可阻止缺血性视网膜病变期间血管内皮生长因子的过度表达和新生血管形成。《美国病理学杂志》。2005年；167:599– 607. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
21Antonetti DA、Barber AJ、Khin S、Lieth E、Tarbell JM、Gardner TW。实验性糖尿病的血管通透性与内皮闭塞素含量降低相关：血管内皮生长因子降低视网膜内皮细胞中的闭塞素。宾夕法尼亚州立大学视网膜研究小组。糖尿病。1998;47:1953–1959.[公共医学][谷歌学者]
22Munzel T、Afanas’ev IB、Kleschyov AL、Harrison DG。检测血管组织中的超氧化物。动脉硬化血栓血管生物学。2002;22：1761–1768。[公共医学][谷歌学者]
23Miyahara S、Kiryu J、Yamashiro K等。辛伐他汀抑制链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠视网膜中的白细胞积聚和血管通透性。《美国病理学杂志》。2004;164:1697–1706. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
24Brandes RP、Koddenberg G、Gwinner W等。NAD（P）H氧化酶和黄嘌呤氧化酶增加超氧阴离子生成在延长内毒素血症中的作用。高血压。1999;33:1243–1249.[公共医学][谷歌学者]
25Sonta T、Inoguchi T、Tsubouchi H等。血管NAD（P）H氧化酶对糖尿病和肥胖动物模型中氧化应激增加作用的证据。自由基生物医药。2004;37:115–123.[公共医学][谷歌学者]
26Nagai N、Izumi-Nagai K、Oike Y等。通过阻断血管紧张素II 1型受体或其下游核因子-κB通路抑制糖尿病诱导的视网膜炎症。投资眼科视觉科学。2007;48:4342– 4350.[公共医学][谷歌学者]
27Nagai N，Oike Y，Noda K等。通过阻断血管紧张素II 1型受体抑制内毒素诱导葡萄膜炎中的眼部炎症。投资眼科视觉科学。2005年；46:2925–2931.[公共医学][谷歌学者]
28Zhang L，Zalewski A，Liu Y，等。糖尿病诱导的猪冠状动脉氧化应激和低度炎症。循环。2003;108：472–478。[公共医学][谷歌学者]
29Fujii A、Nakano D、Katsuragi M等。含有gp91phox的NADPH氧化酶在脱氧皮质酮醋酸盐诱导的高血压中的作用。欧洲药理学杂志。2006;552:131–134.[公共医学][谷歌学者]
30唐杰，刘杰，周C，等。NADPH氧化酶在脑出血脑损伤中的作用。神经化学杂志。2005年；94:1342–1350.[公共医学][谷歌学者]
31Tojo T，Ushio Fukai M，Yamaoka Tojo M，Ikeda S，Patrushev N，Alexander RW。含有gp91phox（Nox2）的NAD（P）H氧化酶在后肢缺血血管生成中的作用。循环。2005年；111:2347–2355.[公共医学][谷歌学者]
32石川M、斯托克斯KY、张建华、南达A、格兰杰DN。脑微血管对高胆固醇血症的反应：NADPH氧化酶和P-选择素的作用。圆形Res。2004;94:239–244.[公共医学][谷歌学者]
33Du Y，Miller CM，Kern TS。高血糖增加视网膜和视网膜细胞线粒体超氧化物。自由基生物医药。2003;35:1491–1499.[公共医学][谷歌学者]
34Inoguchi T、Sonta T、Tsubouchi H等，糖尿病血管组织中活性氧（ROS）生成的蛋白激酶C依赖性增加：血管NAD（P）H氧化酶的作用。《美国肾脏病杂志》。2003;14：S227–S232。[公共医学][谷歌学者]
35Inoguchi T、Tsubouchi H、Etoh T等。糖尿病血管并发症抗氧化治疗的可能靶点——血管NAD（P）H氧化酶。当前医学化学。2003;10:1759–1764.[公共医学][谷歌学者]
36Lee SB、Bae IH、Bae YS、Um HD。线粒体和NADPH氧化酶1同工酶之间的联系，用于持续产生活性氧和细胞死亡。生物化学杂志。2006;281:36228–36235.[公共医学][谷歌学者]
37Kimura S，Zhang GX，Nishiyama A等。NAD（P）H氧化酶和线粒体衍生活性氧在血管紧张素II对缺血再灌注损伤的心脏保护中的作用。高血压。2005年；45:860– 866.[公共医学][谷歌学者]
38Schafer M，Schafer C，Ewald N，Piper HM，Noll T。氧化还原信号在内皮细胞对缺氧自主增殖反应中的作用。圆形Res。2003;92:1010–1015.[公共医学][谷歌学者]
39Sorescu D、Weiss D、Lassegue B等。人类动脉粥样硬化中Nox家族蛋白的超氧化物产生和表达。循环。2002;105:1429–1435.[公共医学][谷歌学者]
40Ago T、Kitazono T、Ooboshi H等。Nox4是内皮NAD（P）H氧化酶的主要催化成分。循环。2004;109:227–233.[公共医学][谷歌学者]