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在哺乳动物细胞中表达氯霉素乙酰转移酶的重组基因组。
摘要
我们构建了一系列重组基因组，用于指导氯霉素乙酰转移酶（CAT）在哺乳动物细胞中的表达。该系列中的原型重组体pSV2-cat由β-内酰胺酶基因和pBR322的复制起源组成，该基因与猴病毒40（SV40）的早期转录区耦合，cat编码序列插入其中。将pSV2-CAT DNA导入非洲绿猴肾CV-1细胞后48小时内，即可测量到CAT的蓄积水平。由于内源性CAT活性在CV-1或其他哺乳动物细胞中不存在，并且可以快速、灵敏地检测CAT活性，因此这些重组体为监测组织培养细胞中外源DNA的表达提供了一个独特方便的系统。为了证明这个系统的有用性，我们构建了pSV2-cat的衍生物，从中去除了部分或全部SV40启动子区域。SV40启动子中72碱基对重复序列的一个拷贝的缺失未导致猴肾CV-1细胞CAT合成的显著降低；然而，从重复序列的第二个拷贝中额外删除50个碱基对会将CAT合成降低到野生型CAT合成水平的11%。我们还构建了一个重组体pSV0-cat，其中删除了整个SV40启动子区域，并用一个独特的HindIII位点替换了其他启动子序列的插入。
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