分子细胞生物学。1985年11月；5(11): 3251–3260.
用于哺乳动物细胞中基因的高频整合、表达和拯救的腺相关病毒载体。
摘要
我们描述了腺相关病毒（AAV）载体的构建，其中原核基因neo的编码序列在主要AAV启动子p40的控制下表达。这种AAV-neo载体通过选择对抗生素基因素（G418）耐药的细胞，使neo在哺乳动物细胞中稳定表达，成为主要的选择性标记。当通过DNA转染程序将载体导入人类（293或HeLa）细胞系时，获得了稳定的抗基因素菌落。当载体首先被包装成AAV颗粒，然后通过颗粒感染引入细胞时，获得了比DNA转染获得的频率更高的抗基因素细胞。在耐基因素细胞中，AAV-neo载体以低拷贝数整合，可通过随后感染野生型AAV和辅助性腺病毒或在某些情况下仅感染腺病毒来挽救。获救的AAV-neo载体随后可以从Hirt裂解物中扩增出完整的DNA进行回收。这些结果表明，AAV可以作为一种转基因病毒载体，在哺乳动物细胞中稳定整合和表达外源基因。高整合频率和拯救整合载体的能力表明，该载体系统可能有助于从cDNA文库中选择基因。这种载体也可能有助于将基因导入细胞，这些细胞在诸如使用CaPO4或DEAE-右旋糖酐的程序中难以转染。
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文章来自分子和细胞生物学由以下人员提供泰勒和弗朗西斯
