拉明B1介导脑白质营养不良的细胞自主神经病理学小鼠模型

ADLD小鼠模型表现出认知障碍和年龄依赖性运动赤字。

ADLD患者存在认知和运动障碍。我们表演了莫里斯水迷宫（MWM）和被动回避（PA）任务最小1^{生物活性炭}和WT小鼠评估认知损伤12个月龄时，加速旋转和平衡梁测量12岁时的运动缺陷24个月大。MWM是测试空间记忆的既定范例啮齿类动物(19–21).最小1^{生物活性炭}老鼠与WT相比，MWM分析显示出明显的空间记忆缺陷控制。WT小鼠对平台所在的目标象限表现出偏好与其他象限相比，位于训练期间（图​（图2A），2A） 表明他们记住了平台的位置。相反，最小1^{生物活性炭}老鼠是受损，与其他人相比，在目标象限没有花费更多时间（图​（图2A）。2A） ●●●●。虚拟平台分析探针测试中的交叉显示，野生动物表现出明显的偏好用于目标平台位置（图​（图2B）。非选择性2B） ●●●●。目标平台的非选择性偏好最小1^{生物活性炭}老鼠表示他们不记得隐藏平台的位置和空间记忆保持能力受损（图​（图2B）。2B） ●●●●。最小1^{生物活性炭}和WT动物在可见平台测试中表现同样出色等速，证明最小1^{生物活性炭}动物没有视力受损，他们的线索参考记忆和游泳受损（数据未显示）。与这些发现一致，最小1^{生物活性炭}小鼠在逐步完成PA任务，反映长期空间联想学习和恐惧对厌恶经历的记忆。WT但不是最小1^{生物活性炭}小鼠为了躲避光和跨过，潜伏期显著增加前一天他们受到电击的黑暗房间(P（P）<0.01）（图​（图2C）。2C） ●●●●。这表明最小1^{生物活性炭}老鼠有与12个月大的WT小鼠相比，空间联想记忆缺陷。期间在训练中，穿过暗室的潜伏期在基因型，表明所有小鼠都表现出相同程度的自发厌恶到灯光。总之，这些研究表明最小1^{生物活性炭}老鼠。

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图2

ADLD小鼠模型表现出认知和运动缺陷。

最小1^{生物活性炭}和WT小鼠的行为测试评估MWM和PA测试中的空间和恐惧记忆以及旋转和平衡梁试验。(A类和B类)最小1^{生物活性炭}小鼠表现出空间记忆缺陷12个月大时在MWM中。(A类)最小1^{生物活性炭}小鼠在目标象限和(B类)相比之下，站台区域的交叉口更少在探针试验期间与WT一起。(C类)最小1^{生物活性炭}老鼠没能回忆起一个讨厌的东西前一天进行PA测试的经验有所减少与12个月大的WT小鼠相比，单步穿越潜伏期。酒吧指出训练日进入黑暗隔间的平均延迟时间（白色）和24小时后的保留日（黑色）。(D类–F类)电机逐渐退化中的函数最小1^{生物活性炭}小鼠与WT小鼠相比，(D类)最小1^{生物活性炭}老鼠在上面花的时间更少所有8个试验中24个月龄的加速旋转试验与WT相比(E类)最小1^{生物活性炭}老鼠12岁时通过5毫米宽平衡木的延迟时间增加个月，24个月时逐渐恶化。(F类)最小1^{生物活性炭}老鼠的后肢也增加了与WT控制相比，滑动。数值表示为平均值±SEM。n个=每个基因型组10–14个*P（P）< 0.05; **P（P）< 0.01; ***P（P）<0.001.

最小1^{生物活性炭}动物表现出2种不同的渐进性运动障碍运动任务、加速旋转木马和平衡木。

加速旋转木马在12个月时未检测到明显的运动损伤中的年龄最小1^{生物活性炭}小鼠与野生型相比。然而月龄，最小1^{生物活性炭}老鼠无法继续活动与WT对应物一样长的旋翼机（图​（图2D）。2D） ●●●●。平衡木，通常是一种更敏感的步态测试12个月时检测到步态缺陷，并发展到24个月大。最小1^{生物活性炭}小鼠表现出潜伏期和数量增加后肢滑动以穿过直径为5 mm的42 cm横梁（图​（图2，2E和F）。这些数据共同表明年龄依赖性运动障碍最小1^{生物活性炭}动物。

拉明B1过度表达导致ADLD小鼠癫痫发作。

最近的研究报告了一些髓磷脂疾病患者的癫痫，包括MS和遗传性脑白质营养不良，如PMD(22,23). 一些小鼠模型脑白质营养不良表现为癫痫(24). 在此外，一些ADLD患者出现癫痫症状（未发表的观察，Eric Huang）。我们观察到最小1^{生物活性炭}动物，从全身痉挛和震颤到全身阵挛活动性乏力和尾巴伸展。为了证实这些观察结果，我们使用脑电图记录。皮层脑电图记录显示频繁的自发癫痫活动，包括癫痫样放电和癫痫发作最小1^{生物活性炭}小鼠，但不在WT对照组中。代表24小时录音的2分30秒的记录显示最小1^{生物活性炭}老鼠，但不是WT老鼠，表现频繁左右半球的顶间棘（箭头）（图​（图3A）。三A） ●●●●。最小1^{生物活性炭}老鼠发作间期棘波数量增加了约20倍与WT小鼠相比（图​（图3B）。三B） ●●●●。给定一个戊四唑（PTZ）（一种GABA）的亚惊厥剂量_A类受体敌手，最小1^{生物活性炭}动物更容易受到与WT对照组相比，PTZ诱导的癫痫发作。九分之七最小1^{生物活性炭}动物在5到7天内出现癫痫发作与9只野生动物中只有1只相比，给药时间为分钟（图​（图3C）。三C） ●●●●。这些发现表明层粘连蛋白B1过度表达诱导异常的脑网络活动，如神经元超同步性和超兴奋性，使动物易患癫痫。

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图3

拉明B1过度表达导致癫痫发作。

大脑顶叶皮层自发脑电图活动最小1^{生物活性炭}并记录WT小鼠24小时。(A类)左右半球的脑电图记录，分别显示了一个过度表达lamin的代表性转基因小鼠B1（顶部记录道）或WT控制（底部记录道）。箭头标记间歇峰值。(B类)24小时间歇峰的量化记录表明在最小1^{生物活性炭}特别是小鼠。n个=每个基因型组10只动物。(C类)直方图量化百分比服用30 mg/kg PTZ后动物被抓。n个=每个基因型组9只动物。数值表示为平均值±SEM。*P（P）< 0.05.

层粘连蛋白B1过度表达导致髓鞘形成异常，轴突变性和脱髓鞘。

为了研究层粘连蛋白B1的过度表达是否与髓磷脂病理学相关，我们用电子显微镜检查12个月和24个月大婴儿的髓鞘完整性最小1^{生物活性炭}和WT小鼠。因为病理学研究显示ADLD患者锥体束白质损失最大(25)，我们对脑桥脑区的锥体束。尽管这些超微结构分析没有确定由g评估的12个月大的动物的整体脱髓鞘比率（内轴突直径与总外径之间的比率[图​[图4，4，A和B]），他们确实确定了然而，与WT对照组相比，脱髓鞘减少了24个月（图​（图4，4、C和D）。超微结构分析显示各种异常结构，通常以外折为主，髓鞘的延伸和内陷。髓鞘异常环由同一有髓轴突内的多个环组成，这可能导致从单个内折的逆行反转，因为可以看到轴突物质内部和外部折叠件之间的间隙中（图​（图4，4、F和G，12个月大的动物；图​图4H，4H、 24个月大最小1^{生物活性炭}动物）。在WT小鼠中未发现这些形态异常（图​（图4，412月龄和24月龄的动物，分别）。除了髓鞘异常外，轴突在与WT对照组相比，该水平明显更高（图​（图4，4、I和J，12个月大的动物；图​图4，4，M和N，24个月大的动物）。此外，多髓鞘纤维（图​（图4，4、K和L，12个月大的动物）。频繁死亡和退化在24个月大的婴儿中也发现了少突胶质细胞最小1^{生物活性炭}动物（图​（图4P），4P） ，与脱髓鞘轴突相对应（图​（图4R）4R） 与WT控制相比（图​（图4，4、O和Q）。邻区甲苯胺蓝染色切片显示类似的脱髓鞘和异常结构24个月大最小1^{生物活性炭}动物（补充图1；本文的在线补充材料；数字对象标识：10.1172/JCI66737DS1号机组). 约150至200个轴突的量化各组在12个月大时均表现出明显的轴突变性和异常髓鞘形成最小1^{生物活性炭}动物对比带WT控件（图​（图4，4、S和T），类似于在其他一些髓鞘疾病中发现的观察结果(26–28). 因为炎症出现在活动性MS病变中，我们额外评估了Iba1和GFAP小胶质细胞活化和反应性星形胶质细胞的免疫染色大脑的不同区域，包括大脑皮层、海马体和小脑12个月大最小1^{生物活性炭}和对照动物。没有大脑皮层（补充图2）、海马体或小脑的差异（数据未显示）。这些数据与ADLD患者数据一致，没有显示出明显的差异炎症。

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图4

层粘连蛋白B1过度表达导致髓鞘形成异常，轴突变性和脱髓鞘。

对12个月龄和24个月龄婴儿的锥体束进行超微结构分析最小1^{生物活性炭}和相应的WT小鼠。(A类和B类)12和(C类和D类)24个月，此时脱髓鞘在最小1^{生物活性炭}老鼠。P（P）< 0.05.(E类)12个月时的WT控制。(F类和G公司)超微结构分析揭示了许多异常结构，包括起源于髓鞘的外折、延伸和内陷12个月和(H（H）)24个月。(我和J)观察到整个轴突髓鞘单位的轴突崩解和降解在12个月时达到显著更高的水平(M（M）和N个)24个月时，与WT对照组相比。(K（K）和L（左）)此外，还观察到髓鞘增生纤维和死亡轴突最小1^{生物活性炭}12个月大的小鼠。(O（运行）)正常少突胶质细胞和(问)正常压实对照动物24个月龄时的髓磷脂。(P（P）)的代表24个月龄少突胶质细胞频繁死亡和退化最小1^{生物活性炭}老鼠。死亡少突胶质细胞相关增加了(R（右）)24个月龄儿童的不规则和脱髓鞘纤维最小1^{生物活性炭}动物。(S公司和T型)大约150到200个轴突的定量12个月大最小1^{生物活性炭}小鼠表现出显著的与WT对照组相比，轴突变性和异常髓鞘形成。n个=每个基因型3只动物。值表示为平均值±扫描电镜**P（P）< 0.01, ***P（P）< 0.001. 比例尺：2μm。

拉明B1过度表达诱导细胞自主神经病理学少突胶质细胞。

ADLD的一个有趣的特征是在出现普遍过度表达的层粘连蛋白B1。研究病理学我们认为，层粘连蛋白B1过度表达对大脑中不同细胞系的影响在少突胶质细胞、神经元和细胞特异性启动子驱动的星形胶质细胞(第1页,凸轮2a、和GFAP公司）。每一个株系的层粘连蛋白B1的表达水平同样高于WT对应物，在12个月时通过Western blot分析和qRT-PCR进行量化年龄（图​（图5，5，A–C）。蛋白质印迹对总层粘连蛋白B1的分析显示，平均增加2.2倍、2.4倍和2.3倍鼠标，其中最小1是由第1页,凸轮2a、和GFAP公司分别与WT相比控件（图​（图5，5、A和B）.过度表达水平与ADLD患者的观察结果一致平均增长2倍(1,11). 出于我们不完全理解的原因，由于层粘连蛋白B1过度表达，内源性层粘连素B1似乎增加与WT控制相比（补充图3A）.通过qRT-PCR检测信使核糖核酸分析还显示，在所有3个细胞特异性品系中都有显著且可比较的增加（图​（图5C）。5C） ●●●●。只有过度表达层粘连蛋白的动物少突胶质细胞中的B1(PLP-LMNB1型^玻璃钢)展出从10个月开始（观察到）的年龄依赖性运动障碍发育到12个月大时，这些动物就奄奄一息了。5点月，PLP-LMNB1基因^玻璃钢动物在与WT相比，在11 mm宽的平衡梁上或加速旋转控件（图​（图5，5，D–F）。然而，12个月前，PLP-LMNB1型^玻璃钢动物表现出相当的降低落在加速旋转木马上的延迟（图​（图5D）5D） 并显示出穿越平衡的延迟显著增加梁与WT控制的比较(P（P）<0.001）（图​（图5E）。5E） ●●●●。此外，PLP-LMNB1型^玻璃钢动物表现出更多的后肢滑移（图​（图5F）。5F） ●●●●。在这个PLP-LMNB1型^玻璃钢小鼠伴有脱髓鞘，异常髓鞘形成和轴突变性（图​（图6，6，B–D）。在异常髓鞘环中PLP-LMNB1型^玻璃钢动物的髓鞘-轴突结构与WT控制相比，不规则和不均匀（图​（图6，6E和F）。散布于脱髓鞘轴突区域（例如，图​图6E，6E、 箭头）是正常的轴突髓鞘厚度（如图​图6E，6E、 箭头）。髓鞘厚度的异质性由g比率表示（图​（图6B）。6B） ●●●●。WT对照组未出现脱髓鞘或显示异常髓鞘环（图​（图6，6、A和F） ●●●●。相邻切片的甲苯胺蓝染色显示类似的结果脱髓鞘和异常结构PLP-LMNB1型^玻璃钢老鼠（补充图1）。观察到的神经病理学和年龄依赖性运动障碍在里面PLP-LMNB1型^玻璃钢动物可以更准确地反映与ADLD退化相关的机制。与全球过度表达一致最小1^{生物活性炭}老鼠，PLP-LMNB1型^玻璃钢动物也表现出自发性癫痫发作（数据未显示）。神经元特异性过表达层粘连蛋白B1的动物(CAM/tet-Lmnb1)和星形胶质细胞(GFAP/tet-Lmnb1)在12个月时，平衡梁和加速旋转木马没有出现运动障碍1年以上无明显行为异常（补充图3，B和C，分别）。总之，这些结果表明少突胶质细胞天生与其他细胞类型相比，层粘连蛋白B1更容易过度表达。

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图5

少突胶质细胞中Lamin B1过度表达导致进行性运动损伤和髓鞘缺陷。

(A类)层粘连蛋白B1的代表性Western blot，FLAG-tagged laminB1，转基因小鼠半脑裂解物中的α-微管蛋白在少突胶质细胞、神经元和星形胶质细胞中选择性过度表达层粘连蛋白B1由细胞型特异性启动子驱动(第1页,凸轮2a、和GFAP公司分别）与对照12个月大的小鼠（泳道不连续）。红外双色检测抗层粘连蛋白B1抗体（绿色）和抗标记有FLAG的层压板B1（红色；顶板）。针对FLAG的单独检测（第二次面板）、层粘连蛋白B1（第三面板）和α-微管蛋白（底部面板）。(B类)归一化总层粘连蛋白B1的Western blots定量α-微管蛋白。(C类)层粘连蛋白B1转录水平的qRT-PCR在12个月龄时从相应的细胞特异性半脑归一化为GAPDH年龄。误差条表示3-4个独立的平均值±SEM实验。(D类–F类)动物过度表达少突胶质细胞中的层粘连B1选择性(PLP-LMNB1型^玻璃钢)在加速转盘和平衡梁上显示出渐进性的运动缺陷。(D类)PLP-LMNB1型^玻璃钢小鼠缩短了落在加速旋转木马上的延迟和(E类)展出的增加了穿越11毫米宽平衡梁的延迟(F类)后肢打滑。数值表示为平均值±扫描电镜，n个=每组10-12人***P（P）< 0.001.

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图6

PLP-LMNB1型^玻璃钢小鼠出现脱髓鞘，异常髓鞘形成和轴突变性。

(A类和B类)PLP-LMNB1型^玻璃钢与WT对照组相比，动物表现出脱髓鞘，用g比率量化150–200个轴突，P（P）< 0.05. (C类和D类)PLP-LMNB1型^玻璃钢动物展示异常髓鞘形成和轴突变性。(E类和F类)脱髓鞘轴突（如箭头）和髓鞘正常的轴突厚度（如箭头）在PLP-LMNB1型^玻璃钢老鼠(E类)但在WT中没有控件(F类). 髓磷脂结构也不规则在中不均匀PLP-LMNB1型^玻璃钢小鼠与WT的比较控制。n个=每个基因型4只动物。比例尺：2微米。

Lamin B1过度表达导致高丰度髓磷脂蛋白PLP。

我们使用定量质谱iTRAQ标记来比较后脑蛋白质12个月大时的水平最小1^{生物活性炭}和WT小鼠。500个高质量评分肽95%置信区间的蛋白质鉴定候选者中，只有4种蛋白质显示出实质性变化(P（P）<0.05). 异质核核糖核蛋白（HNRNPN）和组蛋白H4（H4）分别为分别增加20%和30%，而神经丝介质多肽蛋白质（NEFM）减少20%。有趣的是，PLP降低了30%（图​（图7A）。7A） ●●●●。降低第1页通过qRT-PCR确认表达（图​（图7B）。老鼠7B） ●●●●。小鼠在少突胶质细胞中特异性过度表达层粘连蛋白B1(PLP-LMNB1型^玻璃钢)PLP进一步降低转录水平（图​（图7C）。7C） ●●●●。然而，老鼠神经元特异性过表达层粘连蛋白B1(CAM/tet-Lmnb1）做不显示中的任何更改第1页与WT控件相比的级别（补充图3D）。

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图7

Lamin B1过度表达导致高度丰富的髓磷脂减少蛋白质PLP。

(A类)后脑定量质谱iTRAQ标记12个月大最小1^{生物活性炭}小鼠和WT小鼠鉴定出PLP高质量评分肽候选的95%置信区间为30%在中下调最小1^{生物活性炭}与WT比较的动物控制。(B类)这一发现通过qRT-PCR进行了验证。(C类)小鼠在少突胶质细胞中特异性过度表达层粘连蛋白B1(PLP-LMNB1型^玻璃钢)显示出进一步减少第1页转录水平。值表示为平均值±扫描电镜。n个=每组3人**P（P）<0.01; ***P（P）< 0.001. (D类)转录组对纯化少突胶质细胞进行的分析验证了蛋白质组的变化包括Pol II与第1页启动子最小1^{生物活性炭}小鼠与WT对照组进行比较。拉明B1还调节额外的基因。x个轴定义为M:log差异表达比（对数倍变化）；年轴已定义as A：少突胶质细胞的平均对数强度（每kb基因长度的读数）之间最小1^{生物活性炭}小鼠和WT对照组。

此外，我们通过鉴定Pol进行转录组分析II–纯化的少突胶质细胞全基因组范围内的结合位点从最小1^{生物活性炭}和WT对照小鼠。Pol II绑定是在多种基因的启动子上发生了变化。然而，Pol II绑定已验证蛋白质组变化，包括确定Pol II与第1页启动子最小1^{生物活性炭}老鼠与WT控制相比（图​（图7D）。7D） ●●●●。一起，这两种独立的方法表明，层粘连蛋白B1的过度表达导致改变了基因表达，特别表明髓鞘高度丰富蛋白质基因，第1页，在转录水平上减少。这个降低第1页转录水平是旨在了解ADLD的病理生理学的研究。因此，我们寻求进一步检查层粘连蛋白B1过度表达如何导致产品生命周期1转录。

行为测试

视频-EEG监控

如前所述进行脑电图记录(43). 简单地说，涂有特氟隆的银线被植入左侧和右侧顶叶皮质以及左侧额叶皮质上的硬膜下间隙用作参考。记录自由运动小鼠的脑电图活动Harmonie 5.0b软件（Stellate）。异常癫痫样棘波的数量（振幅超过平均脑电图振幅6倍的锐波放电，以及持续20–70 ms）被Gotman峰自动检测到超过24小时记录的探测器（Harmonie；Stellate）。捕获和目测癫痫发作次数。

PTZ挑战

PTZ（Sigma-Aldrich）溶于PBS中。给药剂量为30 mg/kg腹腔注射。

透射电子显微镜

表达式分析

采用ΔΔCt法进行qRT-PCR使用ABI Sybr Green/ROX基因特异性引物标准化为GAPDH对照。数据为使用ABI 7900HT机器和软件进行收集和分析。总RNA为从11周龄和12月龄小鼠的全脑中分离(n个≥3/组），使用RNeasy隔离试剂盒（QIAGEN）。总RNA反向根据制造商说明（Invitrogen）。

引物序列GAPDH公司(46)和第1页(47)具体如下：最小1（跨越外显子2–3）；向前地序列，5′-CAGATTGCCAGCTAGAGC-3′；相反的顺序，5′-CATTGATCTCCTCTTCATAC-3′。

脑裂解物和蛋白质印迹

如前所述进行脑裂解物和蛋白质印迹(48). 简言之，快速冷冻的半脑在RIPA缓冲液（20 mM Tris，150 mM NaCl，0.1%SDS，0.5%脱氧胆酸，1%Nonide P-40，pH 7.4）和蛋白酶抑制剂（PI）（Sigma-Aldrich）。上清液添加1%最终SDS和100 mM DTT，煮沸，加载7.5%或10%SDS-PAGE凝胶并转移至PVDF膜。初级抗体YY1（1:500，sc-1703；圣克鲁斯生物技术公司），层粘连蛋白B1（1:50，sc-6216；圣克鲁斯生物技术公司）和α-微管蛋白（1:5000，Sigma-Aldrich T9026）隔夜孵化，然后进行物种匹配、红外标记（IR标记）次级抗鼠或抗兔抗体（稀释1:5000；Li-Cor生物科学）。使用Odyssey红外成像系统（Li-Cor）对印迹膜进行成像生物科学）。

免疫组织化学

如前所述进行免疫组织化学分析(48). 简而言之，大脑半球固定在4%多聚甲醛24小时，在0.1%磷酸盐缓冲液中20%蔗糖中冷冻保护在4°C下再保存24小时，冷冻并储存于使用前为-80°C。自由浮动30-μm系列切片用抗GFAP的初级抗血清（1:1000，Millipore ab5804）处理和Iba1（1:1000，Wako Chemical，019-19741）。免疫反应检测为使用Vectastain Elite试剂盒（Vector Laboratories）根据制造商的协议和部分在ImmPACT DAB中开发（矢量实验室）进行可视化。分段安装并脱水分级醇和二甲苯。盖玻片上粘贴了DPX（电子显微镜科学）。使用NIH定量GFAP和Iba1免疫反应ImageJ软件。颗粒数量通过“分析粒子在阈值与测度中的作用标尺标准化到标尺并全局设置的功能。实验习惯于n个=每组3个，共7–10个节段每个部分有两个视野。

定量ChIP聚合酶链式反应

使用SimpleChIP-Enzymatic Chromatin IP Kit（细胞信号）。脑裂解物在PBS中用PI制备。输入DNA的样品以相同的方式制备。用正常IgG或特异性IgG对细胞裂解物进行声波和免疫沉淀YY1抗体（sc-1703；圣克鲁斯生物技术公司）。由此获得的DNA用一组针对第1页包含YY1共识位点的启动子区域(18).第1页3′UTR为用作阴性对照。PCR反应在SYBR Green（罗氏诊断公司）的存在。

iTRAQ分析

iTRAQ分析如前所述进行(49). 分离的后脑蛋白粉末溶解于50μl iTRAQ溶解缓冲液（稀释20倍，最终浓度=25mM，pH 8.5），并且使用蛋白质测定试剂盒测量蛋白质浓度（生物阅读）。为每个iTRAQ标记每个样品的40μg蛋白质遵循制造商的说明。使用MCX筒（混合模式阳离子交换，绿洲固相萃取，30微米，3立方厘米，60毫克）。然后对其进行HPLC分级和质量光谱分析。

转录组分析

统计

在实验中对不同组（基因型之间）进行了比较要求使用双尾独立的非重复试验t吨测试和回归分析。重复措施t吨受试者之间的测试在实验中进行基因型因子和重复训练测量用于需要重复试验的行为测试。没有观察到相互作用在基因型和训练之间。如果反复训练没有效果坍塌了，还有一个2尾t吨进行了测试。配对t吨当动物受到不同的给定范例中的行为条件。全部t吨测试和P（P）给出的值来自双尾测试。所有数据表示为平均值±SEM。P（P）<0.05是被认为具有统计学意义。Huynh-Feldt调整用于必要时纠正球度违规以调整不均匀性跨天或组的差异。数据采用IBM SPSS 20.0进行分析。

作者感谢来自电子显微镜和转基因的Jinny Wong和Junli ZhangJ.David Gladstone研究所的基因靶向核心。作者还认可了美国大学的质谱和蛋白质组学中心明尼苏达州和各种支持机构，包括国家科学基金会主要研究仪器拨款9871237和NSF-DBI-0215759用于购买本研究中描述的仪器。这项工作得到了NIH拨款F32的支持NS066722-01A1发给M.Y.Heng，以及a.P.Giannii基金会发给M.Y的奖学金。恒；NIH NS062733授予Y.H.Fu，Sandler神经遗传学基金授予Y.H.Fu和L.J。普塔克χek。L.J.Ptácχek是一名调查员霍华德·休斯医学院。