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通过缺失突变定义人类raf氨基末端调节区。
马萨诸塞州波士顿哈佛医学院达纳-法伯癌症研究所，邮编：02115。
摘要
细胞raf基因转化潜能的激活与氨基末端编码序列的缺失一致相关。为了确定仅5’截断是否能激活细胞raf，我们构建了21个人类c-raf-1 cDNA，其在Moloney小鼠肉瘤病毒长末端重复序列远端具有可变BAL31生成的缺失和一致性翻译起始序列。编码序列的缺失范围为136到1399个核苷酸，648-氨基酸raf蛋白缩短了44到465个氨基酸。转染NIH 3T3细胞后，全长c-raf-1 cDNA未转化，四个缺失142个或更少氨基酸的突变体也未转化。九个缺失154到273个氨基酸的突变体中有七个诱导了转化，转化效率为每微克DNA 0.25到70焦。缺失303至324个氨基酸的突变体显示出较高的转化活性（与v-raf相比），当缺失305个氨基酸时，其峰值活性为每微克DNA 2400个焦点。延伸至raf激酶结构域的超过383个氨基酸缺失缺乏转化活性。Northern（RNA）印迹和免疫沉淀分析表明，转染NIH细胞表达预期大小的raf RNA和蛋白质。因此，单独的5’截短可以激活raf转化潜力，在氨基酸300附近有一个尖锐的激活峰。对之前通过转染肿瘤DNA检测到的三个raf基因的分析表明，这些基因通过raf内含子7中的重组和编码含有氨基末端非raf序列的融合蛋白而被激活。这些重组基因中raf序列的缺失范围与不显示高转化活性的BAL 31突变体相对应，表明融合的非raf编码序列也可能有助于生物活性。
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