软骨膜Osx/LacZ+细胞包括产生基质细胞、成骨细胞和发育中骨骼内的骨细胞以及周细胞的成骨细胞前体（A–C）软骨膜Osx-CreERt表达的成骨细胞前体在E12.5处标记，通过E16.5产生骨内成骨细胞（OBs）、小梁OBs和小梁周围基质细胞以及皮质骨细胞。概述部分显示在右侧。（A） 插图放大的组织学。比例尺，200μm。（B） Col1 ISH（红色信号，叠加在对比度或Hoechst图像上）。箭头，表达Col1 mRNA的Osx/LacZ+细胞；箭头，Col1-阴性Osx/LacZ+细胞；hc，软骨肥大。区域（1）和（2）来自概览图像中的框；区域（3）显示皮层细节。（C） 通过对齐甲苯胺蓝、LacZ和EM视图对红框区域（1–4，如右侧概述部分所示）进行EM分析，并在平行EM图像上用蓝色“+”标记Osx/LacZ+细胞，通过蓝色染色进行识别。底部放大视图；注意这些LacZ+细胞中的细胞质X-gal沉积。
（D） 矿化骨（“+”和箭头）上立方体Osx/LacZ+成骨细胞与含RBC的血管（V）的频繁接近。顶部，区域轮廓（（C）中的白框）和EM在（D）（1-2）和（E）（3）中分析的区域。底部，通过（左）曙红或（右）附加PECAM-1染色进行组织学检查（棕色）。注意与Osx/LacZ+成骨细胞直接相邻的血管（左图），或仅由纺锤形血管周围细胞分隔（星号），其中一些是Osx/LacZ+（红色箭头）（右图）。
（E和F）EM（E）和PECAM-1 IHC（F）显示Osx/LacZ+细胞的周细胞定位。（E） 区域3（见D）（血管进入骨干的入口位置）的概述和放大倍数增加。箭头，EC之间的紧密连接；插图和箭头，重叠内皮下覆盖的细胞延伸。（F） X-gal、PECAM-1（棕色）和曙红染色部分的顶部、概述和放大图。血管周围Osx/LacZ+细胞的底部详细视图。另请参见图S5，使用Osx-Cre:GFP小鼠模型提供Osx表达细胞的分子特征。
