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Cell Rep.作者手稿;可在2013年1月3日的PMC中获得。
以最终编辑形式发布为:
Cell Rep.2012年12月27日;2(6): 1684–1696.
2012年11月29日在线发布。 数字对象标识:2016年10月10日/j.celrep.2012.10.021

图2

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FRS2击倒下调let-7家族

(A) 对照组或FRS2敲低的HUAEC用DMSO或10µg/ml放线菌素D(ActD)处理指定时间。然后用qRT-PCR测定TGFβR1的表达。18S rRNA用于标准化模板加载的变异性。(B) 对齐let-7人TGFβR1的3’UTR序列。(C) 使用实时PCR miRNA阵列和来自对照细胞或FRS2敲除细胞的cDNA评估miRNA表达谱。(D) 转Lin28的HUVEC中TGFβR1和SM-钙蛋白的qRT-PCR,let-7海绵表示或空向量。β-actin用于标准化模板加载的变异性。(E) 对照组TGFβR1、p-Smad2、Smad2和FRS2的免疫印迹以及用let-7慢病毒。(F) 用qRT-PCR方法分析对照组和FRS2敲除的HUAEC中TGFβR1、TGFβ下游靶分子、平滑肌标志物和间充质标志物基因的表达let-7慢病毒(与对照组相比,*p<0.05;**p<0.01;**p<0.001)。β-actin用于标准化模板加载的变异性。所示数据(A和D–F)是三个独立实验的代表。(G) 小鼠静脉注射对照药物或胆固醇制剂安替戈米尔-let-7b/c(单次注射2mg/kg),6d时分离肝内皮细胞。的表达式let-7通过qRT-PCR分析miRNA。SNORD66用于标准化模板加载的可变性(***p<0.001;NS:与对照组相比不显著)。(H) 经对照或配方安替戈米治疗的小鼠肝内皮细胞中K-ras、N-ras、HMGA2、CDK6、CDC25A、TGFβR1和波形蛋白的基因表达水平-let-76天。β-actin用于标准化模板负荷的变异性(与对照组相比,*p<0.05;***p<0.001)。(一) CD31/波形蛋白的免疫荧光染色(细胞核用DAPI(蓝色,比例尺:7µm)复染),在用对照药物或配方安替戈米尔治疗的小鼠肝切片中-let-7第6天。(J) 注射对照或配方安替戈米尔的小鼠肝脏EC表达波形蛋白的定量-let-7(与对照组相比***p<0.001)。

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