高血压杂志。作者手稿；PMC 2012年12月5日提供。
以最终编辑形式发布为：
预防性维修识别码：项目经理3515639
美国国立卫生研究院：NIHMS303142标准
TRPV4激活引起的低血压：钙的作用2+-激活的K+经络和感觉神经
*和*††
唐娜·H·王
*密歇根州立大学医学系
†密歇根州立大学神经科学项目
†密歇根州立大学细胞和分子生物学项目
*密歇根州立大学医学系
†密歇根州立大学神经科学项目
†密歇根州立大学细胞和分子生物学项目
通信地址：Donna H.Wang，医学博士，美国密歇根州东兰辛市密歇根州立大学B316临床中心FAHA纳米医学和分子干预医学部，传真号码：517-432-1326电话号码：517-2432-0797ude.usm.th@gnaW.annoD 摘要
目标
研究瞬时受体电位香草醛4（TRPV4）激活引起低血压的机制。
方法
Wistar大鼠出生后1-2天皮下注射50 mg/kg辣椒素，导致辣椒素敏感的感觉神经退化。给相应的新生大鼠注射溶媒作为对照组。断奶后，选择雄性大鼠进行进一步研究。在8周龄时，平均动脉压（MAP）及其对含/不含CGRP的4α-佛波醇12,13-癸酸盐（4α-PDD，一种选择性TRPV4激活剂，2.5 mg/kg，静脉注射）的反应8-37（1 mg/kg/min，静脉注射），降钙素基因相关肽（CGRP，一种从感觉神经释放的有效血管扩张剂）的拮抗剂，在用戊巴比妥钠（50 mg/kg，静脉滴注）麻醉的溶媒/辣椒素复治大鼠中进行监测，以观察感觉神经释放神经肽对4α-PDD诱导的低血压的作用。为了检测血管内皮释放的各种血管舒张因子在TRPV4激活诱导的降压效应中的作用，相应的抑制剂/阻滞剂包括吲哚美辛（环氧合酶抑制剂，10 mg/kg，静脉注射）、Nω-硝基-L-精氨酸（L-NA，NO合酶抑制剂），阿帕明（小电导率钙的阻滞剂2+-激活的K+在注射4α-PDD之前的不同时间使用（MaxiК）通道（50μg/kg，静脉注射）和charybodotoxin（一种中、大导Maxi-К通道阻滞剂，50μg/kg.静脉注射）。采用相应的放射免疫分析法测定给药前后大鼠血浆CGRP和P物质水平。最后用免疫组化染色观察TRPV4/CGRP/MaxiК在肠系膜阻力动脉和感觉神经元/神经纤维中的表达。
结果
静脉注射4α-PDD可显著降低车辆给药大鼠的血压。辣椒素敏感性感觉神经的退化减弱了降压作用(P（P）<0.05）或服用CGRP8-37(P（P）<0.05). 在溶媒和辣椒素复治的大鼠中，阿帕明和河豚毒素的联合用药显著降低了4α-PDD诱导的降压作用(P（P）<0.05），但静脉注射吲哚美辛和L-NA没有产生类似的效果。静脉注射4α-PDD仅增加了车用大鼠的血浆CGRP水平，但不增加P物质水平(P（P）<0.05），不受吲哚美辛、L-NA或阿帕明加河豚毒素的影响。免疫组织化学染色显示，TRPV4在肠系膜阻力动脉内皮细胞与MaxiК通道共定位，在感觉神经元/神经纤维与CGRP共定位。
结论
我们的数据表明，TRPV4激活引起的降压效应至少部分归因于感觉神经释放CGRP时MaxiК通道和CGRP受体的激活。
关键词：血压、降钙素基因相关肽、感觉神经、钙2+-激活的K+通道
介绍
TRPV4是瞬时受体电位（TRP）通道香草醛亚家族的成员，是一种非选择性阳离子通道，具有中等钙2+选择性（P钙/P（P）纳=6，其中P为渗透率）[1]. 与其他TRP通道类似，TRPV4有六个跨膜结构域，两侧是细胞质N端和C端[2]. TRPV4在多种细胞和组织中广泛表达，并参与多种生理过程。TRPV4可被多种刺激物激活，包括热、细胞肿胀、外源性佛波酯化合物或内源性生理活性脂质，如5′，6′-环氧碳三烯酸（5′，6'-EET）[三]. 这些TRPV4激活刺激通过两种不同的途径促进通道开放：PLA2-细胞色素P450第三跨膜结构域N端芳香残基介导的环氧酶依赖途径或直接激活[4].
TRPV4在体温下具有组成活性[5]. 最近的研究表明，TRPV4在全身渗透调节、机械调节和体温调节中起着重要作用[6-10]. 此外，TRPV4还参与血管张力的调节，并且TRPV4的激活产生血管舒张[三]. 我们之前已经证明，选择性TRPV4激活剂4α-佛波醇12，13-二癸酸酯（4α-PDD）激活TRPV4会导致大鼠血压的剂量依赖性降低[11]. 然而，TRPV4诱导的降压作用的机制尚不清楚。
我们之前的研究还表明，降钙素基因相关肽（CGRP）的释放在香草素亚家族另一成员TRPV1的激活引起的低血压中起着重要作用。众所周知，CGRP是最有效的血管扩张神经肽之一，主要由表达TRPV1的感觉神经释放[12,13]. 与TRPV1类似，据报道TRPV4在感觉神经中表达，并与CGRP和P物质共定位，P物质也是一种血管扩张神经肽[14,15]. 基于上述信息，我们假设4α-PDD的降压作用至少部分是通过刺激感觉神经和随后释放血管扩张性神经肽来介导的。众所周知，出生后1-2天，当感觉神经尚未完全发育时，以50 mg/kg的剂量皮下注射辣椒素会导致对辣椒素敏感的感觉神经永久性损伤和变性[16,17]. 使用该模型，结合使用拮抗剂阻断神经肽受体，以及测量血浆CGRP和P物质水平，我们旨在检查感觉神经释放的神经肽在TRPV4介导的降压作用中的作用。
血管内皮通过释放包括前列环素、一氧化氮（NO）和内皮衍生超极化因子（EDHF）在内的血管舒张因子，在控制潜在血管平滑肌张力方面发挥着重要作用[18,19]. 研究表明，内皮细胞中TRPV4的激活导致大鼠冠状动脉内皮依赖性血管舒张[20]. 此外，TRPV4的功能丧失导致剪切应力诱导的血管舒张功能丧失，这是一种严重依赖内皮TRPV4表达的反应模式[21]. 这些发现表明，TRPV4激活诱导的血管舒张至少部分依赖于内皮。为了确定TRPV4介导的降压效应涉及哪种内皮途径，我们使用了各种抑制剂/阻滞剂与4α-PDD结合来实现这一目标。这些抑制剂/阻滞剂包括吲哚美辛（一种环氧合酶抑制剂）、Nω-硝基-L-精氨酸（L-NA，一种一氧化氮合酶抑制剂2+-激活的K+（MaxiК）通道、SKCa）和charybodotoxin[一种中、大电导Maxiк通道、IKCa和BKCa的抑制剂]。
总的来说，本研究旨在探讨TRPV4激活诱导的降压效应的相关机制。首先，我们测定了4α-PDD诱导的溶媒或辣椒素复治大鼠的降压效应，以测试感觉神经释放的神经肽是否在降压效应中发挥作用，然后，通过使用各种抑制剂/阻断剂来确定所涉及的特定内皮依赖性途径。
方法
动物准备
所有实验都得到了机构动物护理和使用委员会的批准。怀孕的Wistar大鼠（美国马萨诸塞州威明顿Charles River Laboratories）在分娩前至少在动物设施中饲养一周。新生大鼠在出生后1-2天内接受辣椒素50 mg/kg皮下注射，剂量为10 mL/kg[16,17]. 对照新生大鼠用等量的溶媒溶液（5%乙醇，5%吐温80盐水）治疗。断奶3周后，将雄性和雌性大鼠分开，本研究仅使用8周龄的雄性大鼠。
手术准备
在静脉注射戊巴比妥钠50 mg/kg麻醉下，用含有等渗肝素盐水溶液（5 U/ml）的聚乙烯管对左颈动脉进行插管，并连接Statham 231 D压力传感器和Gould 2400s记录仪，以持续监测平均动脉压（MAP）。右颈静脉插管用于静脉给药。
样品的制备
当注射4α-PDD后，即注射后4-6分钟，降压期接近最低点时，大鼠被斩首处死。采集动静脉血并离心，以进行血浆CGRP和P物质测定。为了确定TRPV4与MaxiК在肠系膜阻力动脉中的共定位，或与CGRP在背根神经节（DRG）神经元/血管周围感觉神经纤维中的共位置，在不进行急性实验的情况下，用断头处死车用大鼠，收集肠系膜阻力动脉和DRG进行免疫组织化学染色。
实验方案平均动脉压和给药
通过监测静脉注射30μg/kg辣椒素给药给药后的MAP反应，验证了辣椒素敏感感觉神经退化的有效性。将溶媒和辣椒素复治大鼠进一步分为五组，在存在或不存在吲哚美辛、L-NA的情况下，静脉注射溶媒或4α-PDD，或联合注射阿帕明和河豚毒素。在静脉注射2.5 mg/kg的4α-PDD之前，分别静脉注射10 mg/kg的吲哚美辛、20 mg/kg的L-NA或50μg/kg的apamin和50μg/kg的charybdotoxin的组合15分钟、30分钟或20分钟。吲哚美辛、L-NA、apamin和charybdotoxin的剂量是根据先前的研究选择的[22-27]. 每种药物的静脉注射量为400μl。在上述特定剂量下，这些药物几乎完全抑制/阻断了相应内皮通路的活动。
检查CGRP的影响8-37CGRP受体拮抗剂CGRP8-37对4α-PDD诱导的低血压大鼠进行静脉注射，剂量为1 mg/kg/min，持续2 min，然后以0.4 mg/kg/min的剂量给药，持续15 min。CGRP后1分钟静脉注射2.5 mg/kg的4α-PDD8-37管理。CGRP8-37的剂量和时间范围是在先前研究的基础上选择的[28].
放射免疫分析
为了测定血浆中的免疫活性CGRP和P物质，使用市售的兔抗大鼠CGRP放射免疫分析试剂盒和兔抗大鼠P物质放射免疫分析试剂盒（Bachem Americas Inc.，Torrance，CA）。按照制造商的建议进行分析。
免疫组织化学
肠系膜阻力动脉血管周围感觉神经TRPV4和CGRP的克隆化
肠系膜阻力动脉用含有2%甲醛、15%苦味酸和0.1 M磷酸盐缓冲液的Zamboni固定液在冰上固定2小时，用二甲基亚砜（1×10分钟）和磷酸盐缓冲液（3×10分钟，并在室温下在0.4%Triton-X100中培养30分钟以进行渗透，在PBS中培养5%胎牛血清以阻断非特异性结合。随后用山羊抗鼠CGRP（1:500，Santa Cruz Biotechnology，加利福尼亚州圣克鲁斯）和/或兔抗鼠TRPV4（1:300，Alomone labs，Jerusalem，Israel）孵育动脉，然后用驴抗羊CY3二级抗体鸡尾酒孵育和驴抗兔FITC（1:300，Jackson ImmunoResearch，West Grove，PA）30分钟。用PBS清洗后，将血管安装在载玻片上，并使用488-nm和543-nm激光在蔡司-帕斯卡共焦激光扫描显微镜下观察血管的光学切片。阴性对照通过省略无免疫反应的一级抗体进行。
DRG神经元中TRPV4和CGRP的克隆化
将DRG包埋在OCT化合物中并置于液氮中。将新鲜冷冻的DRG样品在Cryotome FSE（宾夕法尼亚州匹兹堡热电电子公司）上5μm处切片，置于3-氨基乙氧基硅烷涂层载玻片上，在75%丙酮/乙醇（v/v）中固定5分钟，并在正常驴血清中孵育30分钟（宾夕法尼亚州西格罗夫Jackson ImmunoResearch实验室1:28）。使用山羊抗鼠CGRP（1:50，Santa Cruz Biotechnology，CA）和兔抗鼠TRPV4（1:50；Alomone labs，Jerusalem，Israel）检测DRG切片中CGRP和TRPV4的表达，然后使用驴抗羊CY3二级抗体鸡尾酒（1:136，Jackson ImmunoResearch labs，West Grove，PA）和驴抗兔FITC（1:136，宾夕法尼亚州西格罗夫Jackson ImmunoResearch labs，West Grove）30分钟。使用488-nm和543-nm激光在蔡司-帕斯卡共焦激光扫描显微镜下观察载玻片。阴性对照通过省略无免疫反应的一级抗体进行。
TRPV4和MaxiК在肠系膜阻力动脉内皮细胞中的克隆化
肠系膜阻力动脉嵌入OCT复合物中并置于液氮中。新鲜冷冻肠系膜阻力动脉的样品在Cryotome FSE（宾夕法尼亚州匹兹堡Thermo Electron）上以5μm的深度切片，放置在3-氨基乙氧基硅烷涂层的载玻片上，在75%丙酮/乙醇（v/v）中固定5分钟，并在正常驴血清中孵育30分钟（宾夕法尼亚州西格罗夫Jackson ImmunoResearch实验室1:28）。肠系膜耐药动脉切片在亲和素（载体）和d-生物素（西格玛化学公司，密苏里州圣路易斯）中培养15分钟。用PBS清洗后，将动脉在4°C下培养过夜，在山羊抗鼠MaxiКβ（1:200，Santa Cruz Biotechnology，Santa Cruz，CA）和兔抗鼠TRPV4（1:100，Alomone labs，Jerusalem，Israel）的一级抗体混合物中，然后是驴抗羊CY3二级抗体鸡尾酒（1:136，宾夕法尼亚州西格罗夫Jackson ImmunoResearch labs，West Grove）和驴抗兔FITC二级抗体鸡尾酒（1:136，宾夕法尼亚州西格罗夫杰克逊ImmunoResearch lab，West Grove），持续30分钟。使用488-nm和543-nm激光在蔡司-帕斯卡共焦激光扫描显微镜下观察载玻片。阴性对照通过省略无免疫反应的一级抗体进行。
药物
将辣椒素和4α-PDD（马萨诸塞州沃本市LC实验室）溶解在乙醇（5%v/v）、吐温-80（5%v/v）和生理盐水中，以供新鲜使用。消炎痛溶于0.24%钠中2一氧化碳三解决方案。将Apamin、charybdotoxin、L-NA或CGRP8-37溶于盐水中。
统计分析
所有数值均表示为平均值±SE。使用未配对学生分析两组之间的差异t吨测试。使用单因素方差分析（ANOVA）分析各组之间的差异，然后使用Bonferroni校正进行多重比较。差异被认为具有统计学意义（P<0.05）。
结果
为了检测辣椒素敏感感觉神经退化的有效性，我们在溶媒或辣椒素复治大鼠中检测了静脉注射辣椒素（一种选择性TRPV1通道激活剂）后的MAP反应。术后1小时测得的基线MAP在预先处理过辣椒素的大鼠中稍低，但显著低于车辆处理的大鼠（100±4 mmHg vs 116±3 mmHg，P（P）<0.05). 静脉注射辣椒素的大鼠MAP下降幅度（-20±1%）大于再注射辣椒碱的大鼠（-6±1%，P（P）<0.05) ()表明新生儿辣椒素预处理有效地使辣椒素敏感的感觉神经失神经[17,28,29].
静脉注射辣椒素（CAP，30μg/kg）对麻醉载体或辣椒素再治疗大鼠的MAP反应。数值为平均值±SE（n=5至6）*与相应的赋形剂预处理组相比，P＜0.05。
结果表明，静脉注射4α-PDD可使车用大鼠产生显著的低血压（-53±1%）。MAP迅速下降，在4-6分钟左右达到最低点，在20分钟的记录过程中逐渐恢复到基线。为了确定哪些内皮通路参与TRPV4介导的降压作用，本研究中使用了各种抑制剂/阻滞剂，吲哚美辛、L-NA和阿帕明加鱼腥草毒素。静脉注射吲哚美辛或阿帕明加鱼腥草毒素可诱导MAP短暂升高，而注射后20分钟L-NA可使MAP稳定升高（溶媒预处理，115±3 mmHg与143±4毫米汞柱，P（P）<0.05; 辣椒素预处理，99±5与124±4毫米汞柱，P（P）<0.05). 在吲哚美辛或阿帕明联合木瓜毒素给药的MAP恢复基线后10-15分钟和L-NA给药后30分钟注射4α-PDD。在车用给药大鼠中，联合服用阿帕明和河豚毒素（-27±3%，P（P）<0.05），但不通过吲哚美辛（-52±3%）或L-NA（-51±2%），表明MaxiК通道在4α-PDD诱导的低血压中起关键作用。
在麻醉的溶媒或辣椒素复治大鼠中，静脉注射4α-PDD（2.5 mg/kg）和吲哚美辛（10 mg/kg，静脉注射）、L-NA（20 mg/kg，腹腔注射）和阿帕明（50μg/kg，静脉注射，再加上鱼腥草毒素（50μg/kg，静脉滴注）后的MAP反应。A： 大鼠平均动脉压（MAP）对团注4α-PDD的时间-过程反应。B-D：平均动脉压（MAP）对4α-PDD分别与吲哚美辛、L-NA或阿帕明加河豚毒素团注的时间-过程反应。E： 静脉给药后MAP的最大变化。数值为平均值±SE（n=5至6）*与相应的给药组相比，P<0.05，†与给药4α-PDD的相应组相比，P<0.05。
与车辆治疗的大鼠相比，辣椒素敏感感觉神经失神经显著减弱了4α-PDD诱导的降压效应（-39±2%，P（P）<0.05），表明感觉神经和/或其神经肽调节4α-PDD活动。此外，4α-PDD的降压作用通过联合服用阿帕明和河豚毒素（-15±1%，P（P）<0.05），但不使用吲哚美辛（-40±1%）。有趣的是，L-NA的给药略微增强了辣椒素复治大鼠4α-PDD的降压作用（-49±2%，P<0.05）。综上所述，这些发现表明MaxiК通道和感觉神经参与了4α-PDD诱导的低血压，并且NO和前列环素对降压作用没有贡献。
五组中每一组的血浆CGRP和P物质水平如所示静脉注射4α-PDD显著增加了赋形剂预处理大鼠的血浆CGRP水平（35.8±1.0 pg/ml与42.3±1.1 pg/ml，P<0.05），但辣椒素复治组没有（32.3±2.1 pg/ml与36.3±1.5微微克/毫升）。吲哚美辛、L-NA或阿帕明和木瓜毒素的联合用药对车用大鼠血浆CGRP水平的4α-PDD-inudced升高没有影响，但在辣椒素复治大鼠中，这些抑制剂/阻断剂的施用略微提高了4α-PDR诱导的CGRP释放，尽管没有观察到明显变化。相比之下，静脉注射4α-PDD（含或不含吲哚美辛、L-NA），或联合注射阿帕明和河豚毒素，均不会影响两种口服药物的血浆P物质水平（7.9±0.6 pg/ml与9.1±0.4 pg/ml）或辣椒素复治大鼠（5.0±0.5 pg/ml与6.2±0.4微微克/毫升）。这些结果表明，只有当感觉神经完好无损时，TRPV4的激活才会引起CGRP而不是P物质从感觉神经中释放。
/B> 静脉注射或不注射吲哚美辛（10 mg/kg）、L-NA（20 mg/kg）和阿帕明（50μg/kg，静脉注射）加鱼腥草毒素（50μg/mg，静脉滴注）后，血浆CGRP和P物质（SP）水平的变化。数值为平均值±SE（n=4-7）*P（P）与相应的对照组相比<0.05。
为了评估CGRP释放增加在赋形剂预处理大鼠4α-PDD诱导的低血压中的作用，MAP对4α-PDD的反应（含或不含CGRP）8-37进行了检查。用CGRP阻断CGRP受体8-37在给药大鼠中显著减弱了4α-PDD的降压作用（P<0.05），表明CGRP受体在4α-PDD诱导CGRP释放时的激活有助于TRPV4介导的低血压(). 考虑到给药大鼠对CGRP8-37加上4α-PDD治疗的MAP降低幅度（-32±4%）与给药后的辣椒素复治大鼠的MAP减少幅度（-39±2%）非常相似，这些结果表明，4α-PDD不能诱导辣椒素复治大鼠CGRP的释放，这可能是4α-PDF对感觉神经损伤大鼠降压作用减弱的原因。
在有或无CGRP8-37的大鼠中，对4α-PDD（2.5 mg/kg）的团注平均动脉压反应。数值为平均值±SE（n=5至6）*与相应的4α-PDD治疗组相比，P<0.05。
双重染色显示TRPV4在DRG的感觉神经元和支配肠系膜阻力动脉的感觉神经纤维中表达，与CGRP共定位(). 此外，肠系膜阻力动脉切片的免疫组织化学染色显示TRPV4和MaxiК通道在血管内皮中共定位(). 彩色化用蓝色箭头表示。这些结果为TRPV4激活导致CGRP释放或MaxiК通道开放的概念提供了解剖学支持。
肠系膜阻力动脉（A、B、C、G、H、I）和DRG神经元（D、E、F）双重免疫荧光染色的共焦显微镜图像。A、 D和G：FITC-标记的TRPV4受体染色（绿色）。B和E:Cy3-标记的CGRP染色（红色）。C和F：TRPV4和CGRP的共定位（黄色）。H： Cy3-标记的MaxiК通道染色（红色）。一： TRPV4和MaxiК通道的共定位（黄色）。蓝色箭头：共定位区域。阴性对照未显示。比例尺，20μm。
讨论
本研究旨在确定TRPV4激活引起的降压作用的潜在机制。我们发现：1）当感觉神经受到新生儿辣椒素预处理的损害时，4α-PDD降低血压的效果较差，表明感觉神经和/或其神经肽有助于4α-PDD诱导的低血压；2） 当感觉神经完整时，4α-PDD增加血浆CGRP水平，但不增加P物质水平，并且阻断CGRP受体可减轻4α-PDD诱导的低血压。这些结果支持以下观点：TRPV4激活触发CGRP释放后CGRP受体激活有助于4α-PDD诱导的低血压；3） 阻断MaxiК通道但不抑制环氧合酶或NO合成酶可显著减轻4α-PDD诱导的低血压，这表明Maxi-К通道在4α-P-D诱导的降压中的作用，NO和前列环素在4α-PDD诱导的降压作用中缺乏显著作用；和4）TRPV4与耐药血管内皮细胞中的MaxiК通道和感觉神经元/神经纤维中的CGRP共定位，为TRPV4和Maxi-К通道之间的相互作用以及TRPV4介导的CGRP释放提供了解剖学证据。综上所述，这些数据表明，TRPV4的降压作用归因于激活TRPV4诱导CGRP释放后MaxiК通道的开放和CGRP受体的激活。
在几乎所有血管床的血管周围都发现了一个致密的血管周围含CGRP的感觉神经网络，可以平衡几种神经激素系统的促高血压作用，从而维持正常血压。在本研究中，我们预计辣椒素复治大鼠的基线血压会升高。然而，我们在麻醉大鼠中看到了相反的结果。一种可能的解释是，辣椒素敏感感觉神经的退化导致交感神经活动相对增加，而麻醉对交感神经的抑制会降低血压。
内源性大麻素脂质anandamide可能激活TRPV1，导致血管舒张和随后的低血压，这取决于血管周围感觉神经释放CGRP[30-32]. 类似地，TRPV4在含有CGRP的感觉神经元中表达[33]这一发现与本研究结果一致，表明TRPV4与CGRP在DRG和血管周围神经纤维中共定位。此外，本研究中的数据表明，TRPV4激活增加了血浆CGRP水平，并且阻断CGRP受体以与感觉神经损伤相似的方式抑制4α-PDD诱导的降压效应。这些发现表明CGRP在调节TRPV4介导的低血压中起着关键作用。
感觉神经纤维可分为辣椒素敏感人群和辣椒素不敏感人群。新生大鼠皮下注射50 mg/kg的辣椒素会导致DRG中70-80%的小直径感觉神经元不可逆地丢失，并耗尽神经肽的神经元储存，然而，由于甲状腺等其他组织的补充，这些神经肽的血浆水平可能不会显著改变[17,28,31,32]. 如所示，血浆CGRP水平与之前的研究结果一致，尽管辣椒素复治组大鼠的血浆CGRP浓度较车用组低。
CGRP可能通过其作为有效血管扩张剂的直接作用或通过抑制交感神经活动而引起低血压[13]. 迄今为止，CGRP是发现的最有效的血管扩张剂。研究表明，在获得性高血压动物模型中，血浆免疫反应性CGRP水平升高，CGRP对缓冲血压升高起代偿作用[34]. 在本研究中，静脉注射吲哚美辛/阿帕明和河豚毒素可导致血压短暂升高，注射L-NA可延长高血压效应。虽然这些抑制剂/阻滞剂对车辆给药大鼠中4α-PDD诱导的CGRP释放没有影响，但这些药物倾向于增强辣椒素复治大鼠中的4α-PDF诱导的CPRP释放，尽管这种增强没有统计学意义。此外，研究表明，L-NAME（L-NA的衍生物）诱导的高血压增加了血管对CGRP反应的敏感性[34]. 综上所述，服用L-NA加4α-PDD的辣椒素复治大鼠血压升高的原因可能是CGRP释放增强以及血管对CGRP的反应性增强。此外，以前的研究表明，环氧合酶介导的前列腺素生成增加参与了缓激肽介导的CGRP合成和释放[34,35]这可能解释了吲哚美辛加4α-PDD对大鼠的延迟降压效应。
血管内皮主要通过释放三种血管舒张因子（包括前列环素、NO和EDHF）来控制潜在血管平滑肌的张力[18,19]. 已有研究表明，4α-PDD激活内皮细胞中表达的TRPV4，导致大鼠冠状动脉和脑动脉内皮依赖性血管舒张[20]. TRPV4通道的开放，模拟TRPV1的激活，导致钙的增加2+流入，流入[36,37]可能还有Ca2+-诱导释放血管扩张剂NO[20]. 因此，使用NO合成酶抑制剂检查NO在TRPV4作用中的作用。然而，我们发现抑制NO合成酶对4α-PDD诱导的血压降低没有影响。此外，抑制环氧合酶途径未能减轻4α-PDD诱导的低血压。这些结果表明，NO和前列环素都可能不是TRPV4诱导的降压作用的关键因素。
EDHF由内皮合成并释放，EDHF最可能的候选成分包括环氧三烯酸（EETs）、内皮衍生钾离子（K+)、过氧化氢（H2O（运行）2)和C型利钠肽[38]. EDHF与NO或前列环素（PGI）一样强大2)在调节血压方面，EDHF信号的损伤可导致多种心血管疾病，包括高血压、慢性肾功能衰竭和糖尿病[39]. EDHF可增加细胞内钙浓度，导致MaxiК（SKCa、IKCa和BKCa）通道开放和内皮细胞超极化[40]. 越来越多的证据表明EDHF可能参与TRPV4激活诱导的动脉扩张[41-43]. 本研究的数据表明，通过联合应用阿帕明和木瓜毒素阻断SKCa、IKCa和BKCa，可能通过阻止MaxiК通道的开放来减轻4α-PDD诱导的低血压，这表明TRPV4介导的降压效应在很大程度上是内皮和Maxiк通道依赖性的。
总之，我们的数据表明，TRPV4在阻力血管中与MaxiК通道共同表达，在感觉神经元/神经纤维中与CGRP共同表达，可介导深度降压效应。TRPV4的降压作用归因于感觉神经释放TRPV4依赖性CGRP所触发的MaxiК通道和CGRP受体的激活。这些发现可能对未来抗高血压治疗的发展具有重要意义。
致谢
资金来源这项工作得到了美国国立卫生研究院的部分支持（拨款HL-57853、HL-73287和DK67620）和密歇根经济发展公司的拨款。
工具书类
(1)Strotmann R、Schultz G、Plant TD.Ca2+-非选择性阳离子通道TRPV4的依赖性增强由C末端钙调素结合位点介导。生物化学杂志。2003;278:26541–9.[公共医学][谷歌学者] (2)Owsianik G、Talavera K、Voets T、Nilius B.TRP通道的渗透和选择性。《生理学年鉴》。2006;68:685–717.[公共医学][谷歌学者] (3)Watanabe H、Vriens J、Prenen J、Droogmans G、Voets T、Nilius B.Anandamide和花生四烯酸使用环氧碳三烯酸激活TRPV4通道。自然。2003;424:434–8.[公共医学][谷歌学者] (4)Vriens J、Watanabe H、Janssens A、Droogmans G、Voets T、Nilius B。细胞肿胀、发热和化学激动剂使用不同的途径激活阳离子通道TRPV4。美国国家科学院院刊。2004;101:396–401. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] (5)Nilius B、Vriens J、Prenen J、Droogmans G、Voets T.TRPV4钙进入通道：门控多样性的范例。美国生理学杂志《细胞生理学》。2004;286：C195–205。[公共医学][谷歌学者] (6)Liedtke W、Choe Y、Martí-Renom MA、Bell AM、Denis CS、Sali A、Hudspeth AJ、Friedman JM、Heller S.Vanilloid受体相关渗透激活通道（VR-OAC），一种候选脊椎动物渗透感受器。单元格。2000;103:525–35. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] (7)Liedtke W，Friedman JM.trpv4-/-小鼠的异常渗透调节。美国国家科学院院刊。2003;100:13698–703. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] (8)Liedtke W、Tobin DM、Bargmann CI、Friedman JM。哺乳动物TRPV4（VR-OAC）指导秀丽隐杆线虫对渗透和机械刺激的行为反应。美国国家科学院院刊。2003;100:14531–6. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] (9)Chung MK、Lee H、Caterina MJ。温暖的温度激活小鼠308角质形成细胞中的TRPV4。生物化学杂志。2003;278:32037–46.[公共医学][谷歌学者] （10）Güler AD、Lee H、Iida T、Shimizu I、Tominaga M、Caterina M。离子通道的热激活，TRPV4。神经科学杂志。2002;22:6408–14. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] (11)Gao F、Sui D、Garavito RM、Worden RM、Wang DH。盐摄入增强瞬时受体电位香草素4的降压作用：功能意义和意义。高血压。2009;53(2):228–35. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] (12)川崎H、高崎K、斋藤A、后藤K。降钙素基因相关肽是大鼠肠系膜阻力血管中的一种新型血管扩张神经递质。自然。1988;335:164–7.[公共医学][谷歌学者] (13)Oh-hashi Y、Shindo T、Kurihara Y、Imai T、Wang Y、Morita H、Imaiy Y、Kayaba Y、Nishimatsu H、Suematsu Y、Hirata Y、Yazaki Y、Nagai R、Kuwaki T、Kuriehara H。α-CGRP缺乏小鼠的交感神经活性升高。圆形Res。2001;89:983–90.[公共医学][谷歌学者] (14)Grant AD、Cottrell GS、Amadesi S、Trevisani M、Nicoletti P、Materazzi S、Altier C、Cenac N、Zamponi GW、Bautista-Cruz F、Lopez CB、Joseph EK、Levine JD、Liedtke W、Vanner S、Vergnolle N、Geppetti P和Bunnett NW。蛋白酶激活的受体2使瞬时受体电位香草酸4离子通道敏感，导致小鼠机械性痛觉过敏。生理学杂志。2007;578:715–33. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] (15)Koltzenburg M.感觉神经元中TRP通道的作用。诺华发现交响乐。2004;260:206–13.[公共医学][谷歌学者] (16)JancsóG，Kiraly E，Jancsó-Gábor A.药理学诱导的化学敏感性初级感觉神经元的选择性变性。自然。1977;270：741-3。[公共医学][谷歌学者] （17）王德华，李杰，邱杰。感觉神经失神经诱导的盐敏性高血压：一种新模型的介绍。高血压。1998;32:649–53.[公共医学][谷歌学者] （18）Campbell WB，Falck JR。花生四烯酸代谢物作为内皮衍生超极化因子。高血压。2007;49:590–6.[公共医学][谷歌学者] （19）科恩·RA。内皮衍生超极化因子之谜：一种无介质的机制？循环。2005;111:724–7.[公共医学][谷歌学者] (20)Köhler R，Heyken WT，Heinau P，Schubert R，Si H，Kacik M，Busch C，Grgic I，Maier T，Hoyer J.内皮瞬时受体电位V4在剪切应力诱导的血管舒张中功能作用的证据。动脉硬化血栓血管生物学。2006;26:1495–502.[公共医学][谷歌学者] (21)Harmannsgruber V、Heyken WT、Kacik M、Kaistha A、Grgic I、Harteneck C、Liedtke W、Hoyer J、Köhler R。剪切应力的动脉反应严重依赖于内皮TRPV4的表达。《公共科学图书馆·综合》。2007;2：e827。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] (22)Schaeffer P、Laplace MC、Prabonnaud V、Bernat A、Gully D、Lespy L、Herbert JM。神经降压素在体外诱导人脐静脉内皮细胞释放前列环素，并增加大鼠血浆前列环素水平。欧洲药理学杂志。1997;323:215–21.[公共医学][谷歌学者] (23)Travis MD、Hoque A、Bates JN、Lewis SJ。阻断电压敏感钙2+-通道显著减少一氧化氮，但不减少体内L-S-亚硝基半胱氨酸或内皮依赖性血管舒张。欧洲药理学杂志。2000;408:289–98.[公共医学][谷歌学者] (24)Izuta M、Clavier N、Kirsch JR、Traystman RJ。正常、高血压和中风大鼠脑一氧化氮合酶活性抑制期间的脑血流。(打、击等的)一下。1995;26:1079–85.[公共医学][谷歌学者] (25)Brooks VL、Clow KA、Welch LS、Giraud GD。一氧化氮是否有助于清醒兔妊娠期的基础血管舒张？美国生理学杂志Regul Integr Comp Physiol。2001;281：R1624–32。[公共医学][谷歌学者] (26)川端康成A、中谷Y、黑田R、Wakisaka M、Masuko T、Nishikawa H、Kawai K。EDHF参与PAR-2激活引起的大鼠低血压和胃粘膜血流量增加。英国药理学杂志。2003;140:247–54. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] (27)Sankaralingam S，Desai KM，Wilson TW。氯贝特可急性逆转盐诱导的内皮功能障碍：钙激活钾通道的作用。Am J高血压。2006;19：1167–73。[公共医学][谷歌学者] (28)王毅，王德华。高盐摄入期间N-花生四烯醇-多巴胺的降压反应增加：TRPV1受体的作用。高血压杂志。2007;25:2426–33.[公共医学][谷歌学者] (29)Ralevic V、Kendall DA、Randall MD、Zygmunt PM、Movahed P、Högestätt ED。辣椒素敏感感觉神经上的香草样受体在大鼠离体肠系膜动脉床和肠系膜小动脉中介导对甲酰胺的舒张作用。英国药理学杂志。2000;130:1483–8. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] (30)Zygmunt PM、Petersson J、Andersson DA、Chuang H、Sörgórd M、Di Marzo V、Julius D、Högestätt ED。感觉神经上的香草样受体介导anandamide的血管扩张作用。自然。1999;400:452–7.[公共医学][谷歌学者] (31)Wang Y，Kaminski东北，Wang DH。VR1介导的高盐摄入期间的降压效应：anandamide的作用。高血压。2005;46：986–91。[公共医学][谷歌学者] （32）Li J，Kaminski NE，Wang DH。安乃近诱导的自发性高血压大鼠降压作用：香草醛受体的作用。高血压。2003;41:757–62.[公共医学][谷歌学者] (33)Brierley SM、Page AJ、Hughes PA、Adam B、Liebregts T、Cooper NJ、Holtmann G、Liedtke W、Blackshaw LA。TRPV4离子通道在内脏感觉通路中的选择性作用。胃肠病学。2008;134(7):2059–69. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] (34)Watson RE、Supowit SC、Zhao H、Katki KA、Dipette DJ。感觉神经系统血管活性肽在高血压中的作用。Braz医学生物研究杂志。2002;35(9):1033–45.[公共医学][谷歌学者] (35)Ma W，Eisenach JC。足底注射环氧合酶抑制剂酮咯酸可降低神经损伤或炎症大鼠背角P物质、降钙素基因相关肽和强啡肽的免疫反应。神经科学。2003;121(3):681–90.[公共医学][谷歌学者] (36)Vriens J、Owsianik G、Fisslthaler B、Suzuki M、Janssens A、Voets T、Morisseau C、Hammock BD、Fleming I、Busse R、Nilius B。钙的调制2+血管内皮细胞色素P450环氧酶的可渗透阳离子通道TRPV4。圆形Res。2005;97:908–15.[公共医学][谷歌学者] (37)Poblete IM、Orliac ML、Briones R、Adler-Graschinsky E、Huidobro-Toro JP。阿难达胺通过大鼠肠系膜动脉床中内皮TRPV1受体的激活诱导一氧化氮的急性释放。生理学杂志。2005;568:539–51. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] (38)de Wit C，Wölfle SE。EDHF和缝隙连接：微循环内血管张力的重要调节器。当前药物生物技术。2007;8:11–25.[公共医学][谷歌学者] (39)Köhler R，Hoyer J.内皮衍生超极化因子：来自遗传动物模型的见解。肾脏国际。2007;72:145–150.[公共医学][谷歌学者] (40)Félétou M，Vanhoutte PM。内皮衍生超极化因子：我们现在在哪里？动脉硬化血栓血管生物学。2006;26:1215–25.[公共医学][谷歌学者] (41)Earley S、Heppner TJ、Nelson MT、Brayden JE。TRPV4形成了一个新的Ca2+与ryanodine受体和BKCa通道的信号复合物。圆形Res。2005;97：1270–9。[公共医学][谷歌学者] (42)Saliez J、Bouzin C、Rath G、Ghisdal P、Desjardins F、Rezzani R、Rodella LF、Vriens J、Nilius B、Feron O、Balligand JL、Dessy C。小泡间隔在内皮衍生超极化因子介导的松弛中的作用：Ca2+内皮细胞中的小窝蛋白调节信号和缝隙连接功能。循环。2008;117:1065–74.[公共医学][谷歌学者] （43）密歇根州科特利科夫。EDHF redux:EET、TRPV4和Ca2+火花。圆形Res。2005;97:1209–10.[公共医学][谷歌学者] 
