Atg1/ULK1定位于酵母和哺乳动物的自噬体。(一个)呈指数级增长密码7Δ细胞在SD-N培养基中饥饿4h，裂解并将提取物分离为细胞质（S）和5000克膜颗粒分数。用（+）或不使用（−）TX-100处理颗粒，离心，并用抗Atg1、抗Pep12和抗Pgk1抗体进行免疫印迹分析上清液（S）和颗粒（P）组分。(B类)呈指数级增长密码7Δatg1处表达野生型Atg1或Atg1-VE突变蛋白的Δ细胞在SD-N中饥饿4h，裂解并将提取物分离为细胞质（S）和膜（P）部分。用抗Atg1、抗Pgk1和抗Ape1抗体对组分进行western blotting分析，并量化颗粒组分中Atg1与Ape1的比率，并将其表示为与野生型细胞的比率。(C类)用GFP-GABARAP和HA-ULK1共同转染HEK293细胞，饥饿2h，然后免疫染色HA（红色）和WIPI2（白色）。箭头标记假定的自噬体，这三种标记均为阳性。巴=10μm。(D类)用野生型HA-ULK1或DFP突变体转染稳定表达GFP-LC3的HEK293细胞，饥饿2h后进行HA和WIPI2免疫染色。使用Imaris软件对70多个细胞（两个实验中的一个）的HA-ULK1和WIPI2斑点数进行计数，并绘制为ULK1与WIPI2点状细胞的比率***表示具有统计显著性P（P）-值<0.0001。展示了两个独立实验中的一个。(E类)表达野生型HA-ULK1或DFP突变体的HEK293细胞中HA-ULK1和WIPI2斑点数的量化。细胞按上述方法处理，并使用Imaris软件计算斑点数。典型的免疫荧光图像如所示补充图S3F.***和*表示P（P）-值分别小于0.0001或0.0158。图：可以使用补充数据.
