图2

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Atg1以依赖LIR的方式绑定Atg8。(A类)芽殖酵母Atg1的示意图表示及其假定的LIR基序与不同物种的Atg1同源物的序列比对。预测的LIR基序的保留残基用灰色框表示,诱变靶向的残基用星号(*)标记。Atg1激酶结构域下划线,Atg13结合区以黑色阴影显示。带圆圈的“P”标记Atg1上已知的磷酸化位点。N: 氨基末端蛋白;C: 羧基末端。(B类)GST-Atg8或GST-泛素(Ub)从大肠杆菌并绑定到GSH珠子上。从酵母中纯化野生型Atg1-TAP或VE和EYE突变体,与固定化GST蛋白和结合蛋白孵育,并通过western blotting分析。(C类)GST-Atg8和GST-泛素按照(B类),并探索其结合从野生型或第13天Δ单元。(D类)atg1处Δ第13天表达所示野生型Atg1-TAP或VE或EYE突变体的Δ细胞,以及野生型Atg 13或Atg13-FV突变体的细胞生长到中对数期。Atg1被免疫沉淀,并通过western blotting检测其与Atg13的关联。(电子)GST、GST-LC3B、GST-GATE16和GST-GABARAP从大肠杆菌并绑在珠子上。将表达野生型(wt)HA-ULK1或DFP突变体的细胞制备的HEK293细胞裂解物与珠培养,并通过western blotting分析结合蛋白。(F类)将GFP或GFP-GABARAP与野生型HA-ULK1或DFP突变体共同转染HEK293细胞。将GFP和GFP-GABARAP固定在GFP-Trap树脂上,通过western blotting分析HA-ULK1结合。图:可以使用补充数据.