不同水平的Notch信号调节胰腺内分泌祖细胞的静止、更新和分化

DNA构建和转基因株系

Tg（Tp1bglob:H2Bm樱桃）^S939系列，缩写Tg（Tp1:H2Bm樱桃）、和Tg（TP1bglob：静脉PEST）^S940系列，缩写Tg（TP1：静脉PEST），是使用pT2KXIGΔ在主链中产生的(Urasaki等人，2006年).Tg（hsp:ZdnSu（H）-myc；hsp:GFP）^S941系列通过将ZdnSu（H）-myc放置在含有双向热冲击元件的载体下游而生成(Bajoghli等人，2004年;Row和Kimelman，2009年)在每侧驱动GFP和ZdnSu（H）-myc。使用tol-2系统在AB或TL中产生转基因(Kawakami等人，2004年). 为每个构造建立了多条线；所有实验都使用了一条具有代表性的线。

myc-Notch1a-intra在{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号-和经DAPT处理的幼虫

幼虫来自Tg（hsp:Gal4）；Tg（UAS:myc-Notch1a-intra）半合子和Tg（Tp1:H2Bm樱桃）；Tg（神经元：EGFP）鱼在3.5 dpf下受到热休克，并在DMSO、DAPT或10μM中孵化{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号直到6.5 dpf。在3.5 dpf下myc-Notch1a-intra的过度表达诱导了整个幼虫的Notch激活，这可以通过上调Tg（Tp1：H2BmCherry）表达(图2G)热休克24小时后抗myc染色检测到myc-Notch1a-intra几乎无处不在的表达（数据未显示），与之前的研究一致(Scheer等人，2002年). 幼虫未表现出上调Tg（Tp1：H2Bm樱桃)Myc免疫反应呈阴性表达（数据未显示）。

在单独的窗口中打开

图2。

增加Notch信号下调水平导致NRC内分泌分化增加。(A-D公司'）Tg（Tp1:H2Bm樱桃）；Tg（神经细胞：EGFP）幼虫被用来标记NRC（红色）和内分泌分化（绿色）。幼虫用（A）DMSO、（B）100μM DAPT、（C）10μM｛“type”：“entrez核苷酸”，“attrs”：｛“text”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”｝LY411575号和（D）50μM{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号从3.5到6.5dpf，在7.5dpf下进行分析。2F11染色标记IPD。（A，A′）根据2F11免疫反应性（箭头）评估，在对照幼虫中，胰腺NRC形成IPD。白色箭头表示IPD沿线的内分泌细胞。（B，B′）在DAPT处理的幼虫中，PI后面的一些NRC分化为内分泌谱系，如以下评估所示Tg（神经：EGFP公司)表达式（箭头）。根据2F11免疫反应性（箭头）评估，大多数NRC保留IPD细胞身份，并且没有经历内分泌分化（箭头）。（C，C′）在用10μM{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号根据2F11免疫反应性（箭头）评估，保留IPD细胞身份的NRC数量较少（与B相比）。请注意，大多数Tg（Tp1：H2Bm樱桃)⁺分化为内分泌细胞的细胞Tg（神经：EGFP公司)表达。箭头表示内分泌细胞。（D，D′）在50μM处理的幼虫中{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号，绝大多数NRC转化为内分泌细胞Tg（神经：EGFP公司)表达并聚集成次级胰岛（箭头）。根据2F11免疫反应评估，IPD网络不存在。(E-G公司'）从杂交获得的幼虫Tg（hsp:Gal4）；Tg（UAS:myc-Notch1a-intra）半合子和Tg（Tp1:H2BmCherry）；Tg（神经元：EGFP）将鱼在3.5dpf下热休克以诱导myc-Notch1in-tra表达，并在DMSO或10μM中孵育{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号直到6.5 dpf。（E，E′）二甲基亚砜处理的（myc-Notch1a-intra）^–幼虫。上箭头，PI；下箭头，IPD。（F，F′）A{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号-处理（myc-Notch1a-intra）^–幼虫有异位的次级胰岛（下箭头）。注意PI的增大尺寸（上箭头；与E相比）。[Tg（神经：EGFP公司)大脑中的表达也增加了（黄色箭头）。]（G，G′）A（myc-Notch1a-intra）⁺幼虫用{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号IPD（下箭头）沿线没有次级胰岛，PI的大小也没有增加（上箭头）。请注意Tg（Tp1：H2Bm樱桃)表达。(H-I〃′)Tg（Tp1:H2Bm樱桃）用（H，H′）二甲基亚砜和（I-I〃′）50μM处理的幼虫{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号3.5至6.5dpf，在7.5dpf下进行胰高血糖素和胰岛素染色。在{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号-经过处理的幼虫，NRC在PI后面形成了五个胰岛（箭头所示）。这些胰岛含有NRC衍生的α和β细胞。（I〃，I〃′）两个小岛的几个平面的高放大投影（关于完整堆栈，请参见补充材料电影4）。I〃中的黄色和白色箭头分别指向α和β细胞。所有图像均为侧视图，前面朝向顶部，腹部朝向右侧。2F11层⁺,Tg（Tp1：H2Bm樱桃)⁺和Tg（神经：表皮生长因子)⁺IPD腹侧的细胞是肠细胞。比例尺：A-D′，H-I′中为20μm；E-G中为100μm。

免疫荧光和成像

使用的抗体有：GFP（1:1000，Aves Labs）、c-Myc（1:100，9E10 Santa Cruz）、小鼠单克隆抗体2F11（1:100；Abcam，Cambridge，UK）、Pdx1（1:200，美国田纳西州范德比尔特大学Chris Wright赠送）、胰岛素（1:100）、胰高血糖素（1:300，Sigma）和Alexa二级抗体（1:300；Invitrogen）。幼虫在4°C下放置在4%PFA中过夜。去除皮肤和蛋黄后，幼虫在0.4%PBT（TritonX-100）中渗透，并在4%PBTB（BSA）中封闭。在4℃下过夜进行一级抗体染色，在4℃条件下过夜或在室温下3小时进行二级抗体染色。样品安装在一层1.2%的低熔点琼脂糖中，覆盖Vectashield，并使用蔡司LSM5共焦显微镜成像。除非另有说明，否则图像是堆栈的投影。对于图2E-G和补充材料图S1A-F，使用蔡司-卢玛立体显微镜实时采集图像。对于共焦实时成像，用低剂量三嗪麻醉幼虫，将其置于玻璃底培养皿（MatTek）中，培养皿上涂有1.2%的低熔点琼脂糖，并使用40倍的水浸物镜成像。使用ImageJ和斐济处理电影。电影是堆栈的投影，除了补充材料电影2，经历了由于肠道收缩导致的严重样本运动的时间点。为了纠正z-畸变，投射出跨越内分泌细胞的几个平面。由于过度移动，一些时间点被删除；它们的位置在时间刻度上显示。

在所有图像中，使用LSM软件和ImageJ线性均匀地调整亮度和对比度。Photoshop用于添加标签、箭头、比例尺和绘制单元格轮廓。

量化Tg（TP1：静脉PEST)荧光强度

使用斐济在共焦叠加的各个平面上分析荧光强度。Tg（Tp1：H2Bm樱桃)⁺教育部⁺和EdU^–概述了NRC和平均值Tg（TP1：静脉PEST)每个细胞的强度是通过在包含细胞核的最亮平面上画一个定义区域的圆来计算的。

化学处理

DAPT（565784，EMD Chemicals）和{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号在二甲基亚砜中制备。DAPT用于100μM。DAPT和{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号在PTU蛋水和二甲基亚砜中稀释至最终浓度为1%的二甲基亚磺酸，并通过涡流进行混合。将10只幼虫置于12孔板中的1ml PTU卵水中。

EdU分析

在以4 dpf开始的EdU细胞周期实验中，为了减少实验可变性，只选择了表现出膀胱膨胀的幼虫。教育部({“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“E10187”，“term_id”：“22027019”}}E10187号将DMSO中的Invitrogen）库存溶解在PTU鸡蛋水中。EdU在7 mM下使用，DMSO最终浓度为1.7%，以获得更好的渗透性。如前所述，EdU染色25分钟(Hesselson等人，2009年)抗体染色后。

大多数NRC的内分泌分化需要Notch信号的强烈下调

如上所述，在幼虫发育期间很少有NRC进入内分泌谱系(图1D、F); 这种低水平的内分泌分化可能是因为只有少数NRC有能力成为内分泌细胞，或者是因为Notch信号下调受到如此严格的调控，以至于极少数NRC在一定程度上失去了与内分泌谱系分化相适应的Notch信号。

为了区分这些可能性，我们诱导了Notch信号的强烈下调，并评估了分化为内分泌细胞的NRC的比例。我们治疗了Tg（Tp1:H2Bm樱桃）;Tg（神经元：EGFP）带有DAPT或{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号从3.5到6.5 dpf，并在7.5 dpf下进行检查(图2). 作为对照，DMSO处理的幼虫在7.5 dpf的IPD上几乎没有内分泌细胞(图2A)，由评估Tg（神经：EGFP公司)表达。经DAPT处理的幼虫表现出增大Tg（神经：EGFP公司)⁺IPD沿线的内分泌胰岛(图2B). 这些胰岛是通过分化内分泌细胞聚集而形成的（数据未显示）。重要的是，我们发现275个Tg（神经：EGFP公司)⁺单元格(n个=8只幼虫），99%为Tg（Tp1：H2Bm樱桃)⁺表明在Notch信号下调时，所有内分泌细胞都来自NRC。然而，我们在胰腺尾部平均检测到35个NRC（s.d.=18个细胞，n个＝12只幼虫），即使在DAPT处理后也没有分化为内分泌细胞。这些细胞保持较高的2F11免疫反应性，并表现出导管形态(图2B). 用10μM处理{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号从3.5到6.5 dpf，未经历内分泌分化的胰尾NRC数量显著减少至平均13个细胞（s.d.=8个细胞，n个=11只幼虫）(图2C). 引人注目的是，20只幼虫中有2只用50μM{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号胰腺尾部绝大多数NRC转化为内分泌细胞(图2D). 这些观察强烈表明，大多数NRC能够在有效的Notch信号下调后产生内分泌细胞。

为了进一步测试阻断Notch细胞内结构域（NICD）分裂的GSIs诱导的内分泌分化是否特异于Notch通路，我们使用Tg（hsp:Gal4）；Tg（UAS:myc-Notch1a-intra）该系统采用3.5dpf的热激幼虫，然后用{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号（10μM）和DAPT直到6.5 dpf。{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号-处理（myc-Notch1a-intra）^–幼虫在主胰岛（PI）后面形成50多个内分泌细胞，而（myc-Notch1a-intra）⁺幼虫用{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号PI后面平均有四个内分泌细胞形成（s.d.=3.25细胞，n个=9只幼虫）(图2E-G).

我们还检测了50μM治疗后特定胰腺激素的表达，包括胰岛素和胰高血糖素{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号，并观察到NRC衍生的α和β细胞的大量分化(图2H，I;补充材料电影4）。总之，这些数据表明，在Notch信号下调时，NRC分化为各种内分泌细胞类型。

Notch信号的下调诱导内分泌分化前的细胞周期进入

高水平的Notch信号与静止/慢循环相关，而低水平与祖细胞扩增相关(图1G、H); 此外，内分泌分化需要强大的Notch信号下调(图2). 为了进一步描述从NRC向内分泌细胞过渡期间细胞周期进展和内分泌分化是如何相互关联的，我们分析了Notch信号下调时的细胞周期进展与分化。我们孵化了Tg（Tp1:H2Bm樱桃）；Tg（神经元：EGFP）10μM的幼虫｛“type”：“entrez核苷酸”，“attrs”：｛“text”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”｝LY411575号和EdU治疗52小时（4-6 dpf），这样我们就可以识别出在此期间经过S期的所有细胞(图3A-C). 我们发现65%（s.d.=16%，129个细胞计数，n个=7只幼虫）新形成的内分泌细胞为EdU⁺(图3B，C). 重要的是，在检查未经历内分泌分化的NRC时，我们发现EdU是其两倍⁺在里面{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号-处理过的幼虫（85%EdU⁺细胞，s.d.=16%，计数140个细胞，n个=7只幼虫），而对照组（43%，s.d.=7%，计140个细胞，n个=7只幼虫）(图3C)表明Notch信号的下调导致大多数NRC进入细胞周期。

在单独的窗口中打开

图3。

Notch信号下调诱导NRC的细胞周期进程，而Notch信号上调触发NRC的静止。(A-C公司)用DMSO或10μM处理幼虫{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号在EdU在场的情况下，从4至6 dpf（52小时）。（A） DMSO处理的对照幼虫。黄色箭头表示EdU⁺NRC；白色箭头表示沿着IPD的两个内分泌细胞（几个平面的投影）。（B） {“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号-处理后的幼虫内分泌细胞数量增加。注意，大多数新的内分泌细胞是EdU⁺（箭头），只有两个内分泌细胞是EdU^–（箭头）（几个平面的投影）。然而，当内分泌分化时，NRC退出细胞周期（参见补充材料图S3B、C）。（C） 教育程度平均百分比的量化⁺蓝条：DMSO对照组中平均43%的NRC为EdU⁺（7只幼虫计140个细胞）。红条：平均85%的NRC在{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号-处理过的幼虫为EdU⁺（7只幼虫计140个细胞）(P（P）<0.001). 绿色条：大多数（65%）新内分泌细胞是EdU⁺（7只幼虫计129个细胞）。误差条表示s.d(D类,E类)幼虫在4.5 dpf下热休克，诱导（D）ZdnSu（H）-myc或（E）myc-Notch1a-intra的镶嵌表达，并在EdU中孵育24小时（4.5至5.5 dpf）。在转基因阳性或阴性细胞中对EdU掺入进行评分。（D） （ZdnSu（H）-myc）⁺细胞通过GFP表达鉴定(补充材料图S4A）。黄色箭头表示五个绿色荧光蛋白⁺NRC，均为EdU⁺.邻近GFP^–NRC（白色箭头）随机合并EdU（几个平面的投影）。GFP的81%⁺NRC是EdU⁺（52只幼虫中有104个细胞），而GFP的42%^–NRC是EDU⁺（9只幼虫中有351个细胞）。（E） Myc染色标记Myc-Notch1a-intra过度表达细胞（红色）和Tg（Nkx2.2a：GFP公司)表达标记IPD细胞（绿色）。Myc公司⁺IPD单元为EdU^–（黄色箭头）。EdU公司仅限于邻国Myc^-IPD单元（白色箭头）（几个平面的投影）。所有图像均为侧视图，前面朝向顶部，腹部朝向右侧。比例尺：20μm。

大多数内分泌细胞为EdU⁺可能是因为它们来源于内分泌分化前增殖的NRC，或者是因为它们在分化后增殖。为了区分这些可能性，我们在启动Notch信号下调36小时后分析了细胞周期进展。我们孵化了Tg（Tp1:H2Bm樱桃）；Tg（神经元：EGFP）10μM的幼虫{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY411575”，“term_id”：“1257853995”}}LY411575号持续60小时（4至6.5 dpf），并在延迟36小时（5.5至6.5 dpv）后添加EdU。令人惊讶的是，只有8%（s.d.=3.3%，计182个细胞，n个=4只幼虫）的NRC衍生内分泌细胞为EdU⁺(补充材料图S3B、C）。与内分泌细胞相比，没有经历内分泌分化的NRC中有很大一部分是循环的，通过EdU掺入进行评估（60%EdU⁺细胞，s.d.=7%，计数140个细胞，n个=7只幼虫）。这一比例远远高于EdU的比例⁺DMSO对照中的NRCs（11%，s.d.=6.5%，计数100个细胞，n个=5只幼虫）(补充材料图S3A-C）。这些结果表明：（1）Notch信号的下调导致许多胰腺NRC在内分泌分化之前通过细胞周期进行；（2）内分泌分化后NRC退出细胞周期。

缺口信号水平调节扩散或保持沉默的决定

为了测试Notch信号的下调是否自主诱导NRCs细胞的细胞周期进程，我们产生了在合成的双向热休克启动子下表达显性阴性版本的NICD转录辅助因子无毛抑制因子[ZdnSu（H）-myc]的转基因系(Bajoghli等人，2004年). 这种结构允许GFP和ZdnSu（H）-myc在同一细胞中表达，从而可以追踪它们的行为(补充材料图S4A）。的过度表达Tg（热休克蛋白：ZdnSu（H）-我的; hsp（高速）：GFP公司)胚胎中Notch信号的激活受损Tg（hsp:ZdnSu（H）-我的; hsp（高速）：GFP公司)-在几个器官中表达细胞(补充材料图S4B-D），验证该线路作为一种工具，可以自动下调Notch信号细胞。然后我们触发了Tg（hsp:ZdnSu（H）-我的; hsp（高速）：GFP公司)4.5 dpf热休克幼虫，并分析胰腺NRC的细胞周期进展(图3D). 我们检测到0到8 GFP⁺每只幼虫的NRC(图3D)由于热诱导启动子在该发育阶段具有花叶病活性。104 GFP分析⁺NRC（核管理委员会）(n个=52只幼虫）表明81%是EdU⁺，与GFP相比增加了两倍^–NRC（42%教育⁺在计数的351个细胞中，n个=9只幼虫）。因此，细胞通过通路的典型分支自主下调Notch活性，导致胰腺NRC增殖增加。

这些数据表明，NRC保持静止或增殖的决定受Notch信号水平的调节。为了进一步验证这个假设，我们使用了Tg（hsp:Gal4）； Tg（UAS:myc-Notch1a-intra）幼虫通过热休克过度表达myc-Notch1a-intra（过度激活Notch信号），并在NRC中记录EdU掺入。在4.5dpf下诱导myc-Notch1a-intra的表达，并在1.5小时后加入EdU并维持至5.5dpf。我们观察到，在这种热休克疗法中，在这个发育阶段Tg（无人机：myc-Notch1受体)是镶嵌的，使我们能够直接比较（myc-Notch1a-intra）的细胞周期进展⁺带有（myc-Notch1a-intra）的细胞^–单元格(图3E;补充材料图S3E）。为了标记和计数NRC，我们对Pdx1进行染色，以标记胰腺尾部NRC的细胞核(补充材料图S3D）。我们发现2.5%（118人中有3人，n个=9个幼虫）（myc-Notch1a-intra）⁺NRC是EdU⁺然而，平均而言，49%（235人中有115人，n个=9个幼虫）（myc-Notch1a-intra）^–NRC是EdU⁺。使用Tg（nkx2.2a:GFP）标记IPD细胞(Pauls等人，2007年) (图3E). 总之，Notch信号的下调诱导胰腺NRC中Su（H）依赖的细胞周期进入，而Notch通路的过度激活则诱导其静止。

Notch信号的静态与增殖作用

将高Notch信号与慢循环和静止联系起来的机制仍有待阐明；然而，Hes1的持续表达，一个特征明确的Notch靶点，已被证明下调G1细胞周期蛋白的表达(Shimojo等人，2008年). 此外，高水平的Notch信号可诱导CDK抑制剂p21的表达，这种诱导对于Notch介导的上皮细胞生长停滞是必要的(Niimi等人，2007年)而下调Notch信号可以阻止斑马鱼成体神经干细胞中细胞周期抑制剂Ink4b的积累(Chapouton等人，2010年). 此外，在果蝇属鬃毛谱系，Notch信号抵消细胞周期蛋白E并维持细胞周期阻滞(Simon等人，2009年)在发展中的眼睛中，删除槽口该位点抑制G2抑制剂Myt1和Wee1过度表达诱导的表型(普莱斯等人，2002年).

然而，在许多其他情况下，Notch信号传导与细胞周期进展有关，并发挥有丝分裂功能，通常将祖细胞维持在增殖状态（有关综述，请参阅Kageyama等人，2008年;Pierfelice等人，2011年). 如何解释这种两分函数？一个有趣的见解来自对Notch信号对乳腺上皮细胞增殖的影响的分析。在这个系统中，NICD的过度表达引发了二元反应——过度增殖或细胞周期停滞。有趣的是，过度增殖反应与低水平NICD表达有关，而高水平过度表达会触发细胞周期阻滞，并刺激细胞周期抑制剂p21的表达。此外，在较低的活性水平下，Notch信号与JAK/STAT3和EGF相互作用，这两种信号通路是Notch作为有丝分裂原发挥作用所必需的(Mazzone等人，2010年). 因此，比较不同组织中的Notch信号水平非常重要，因为Notch已被证明可以调节静止和增殖，以便评估这些差异是否与Notch信号的不同内源性水平有关。

Notch信号作为有丝分裂原和细胞周期抑制剂的二价作用在胰腺中尤其有趣。例如，在早期哺乳动物胰腺中，Notch信号的整体下调导致胰腺发育不良，这表明Notch信号起着促有丝分裂的作用(Ahnfelt-Ronne等人，2012年). 此外，删除卢比Hes1阳性的着丝粒细胞并不增加其复制(Kopinke等人，2012年)然而，通过GSI的短暂治疗或早老蛋白1和2的缺失下调Notch信号导致细胞周期进展增加(Crash-Meneur等人，2009年). 这些不同的表型可能是由于Notch信号的不同作用取决于其活性水平，或者是由于相互作用途径的活动发生变化（有关综述，请参阅Andersson等人，2011年). 因此，重要的是要确定高Notch信号水平在限制斑马鱼胰腺NRC增殖中的作用是否仅仅是抵消促进胰腺增殖的途径的结果。

斑马鱼胰腺NRC Notch信号下调的最终结果；然而，是细胞周期退出，这种退出与向内分泌谱系的转变有关，我们和其他人已经证明的细胞群体具有不同的细胞周期动力学特征，即缓慢增殖(Desgraz和Herrera，2009年;Hesselson等人，2009年). 指导这种转变的一个可能候选者是NeuroD，其表达是在抑制Notch信号传导时诱导的，并且能够增加CDK抑制剂的表达(Mutoh等人，1998年;Farah等人，2000年;Ochocinska和Hitchcock，2009年)以及作为泛-肾上腺素分化因子(Naya等人，1997年). 然而，NeuroD的活性随后必须进行调节，以允许成年胰腺内分泌细胞的扩张。

我们感谢Ana Ayala和Milagritos Alva提供的专业鱼类援助；Daniel Hesselson、David Staudt和Alethia Villasenor对手稿进行批判性阅读；和Stainier小组的所有成员进行有益的讨论。LY411575是Abdul H.Fauq（美国佛罗里达州杰克逊维尔佛罗里达州梅奥诊所）慷慨赠送的礼物。编码hsp:ZdnSu（H）-myc的cDNA是Tim Simmons和Bruce Appel（美国科罗拉多州丹佛市科罗拉多大学）慷慨捐赠的。特别感谢刘建东心灵炸弹以及Anne-Sophie de Preux Charles和David Staudt（USCF）Tg（hsp70l:Gal4）和Tg（UAS:myc-Notch1a-intra）鱼。