p53调节miR-34a型和miR-145型促进人胚胎干细胞分化。（A和B）miRNA-TaqMan分析。利用人胚胎干细胞总RNA和人类特异探针分析miRNAsmiR-34a型和miR-145型并归一化为RNU6B作为内部控制（*，第页<0.01). （B） 分析转染siRNA的人胚胎干细胞制备的总RNA表达miR-34a型和miR-145型数据表示为平均值±SEM。（C）ChIP。p53结合染色质从人胚胎干细胞免疫沉淀，p53富集于miR-34a型和miR-145型启动子通过qRT-PCR（*，第页<0.05). 代表p53RE位置的方案和用于ChIP-qRT-PCR的引物显示在顶部（星号表示基因的3′端）。数据以平均值±SEM表示。（D和E）抗miRNA分析。用针对非特异性（NS）的抗miRNA寡核苷酸转染的hESCs，miR-34a型，以及miR-145型进行qRT-PCR分析（D）和Western blotting（E）（平均值±SEM）。（F） OCT4+SSEA4染色。转染为（D）的hESCs经RA处理3d后，进行SSEA4和OCT4染色，并进行流式细胞术分析。与未经处理的对照组相比，OCT4阳性细胞分数的减少用红色表示。（G）miR-34a型3′UTR中的目标站点KLF4型和林28a.D，狗；H、 人；M、 小鼠；R、 老鼠。miRNA靶位点中带下划线的核苷酸在突变体3′UTR构建体中发生突变。（H） 荧光素酶分析。将含有野生型（WT）或突变型（Mut）3′UTR的荧光素酶质粒与miRNA前体一起转染HEK293细胞，用于打乱或miR-34a型计算相对荧光素酶水平，Student’st吨测试用于比较数据集（*，第页<0.01). 误差线代表三个独立实验的标准偏差。（另请参见图S7.).
