图9。

氧化应激增加GSK-3β活动。 A类，GSK-3β激酶活性。从PC12-D细胞提取物中免疫沉淀GSK-3β₂用H处理的R细胞₂O（运行）₂(200 μ米; 1小时），用罗哌尼罗（1μ米; 30分钟）或GSK-3β抑制剂VIII（1μ米; 1 h），然后与h孵育₂O（运行）₂(200 μ米; 1小时）。免疫复合物与GST-β-catenin孵育，并使用Western blotting分析“实验程序”中所述的GST-？-catenin-磷酸化。为了确定反应中使用相对等量的GST--β-catentin和免疫沉淀的GSK-3β蛋白，用β-catenin和GSK-3β抗体分别剥离和重制磷酸化β-catentin印迹。GSK-3β激酶活性计算为磷酸化GST-β-catenin和总GST-α-cateniin的比值。图表显示了两个实验的平均值±S.D。B类，H₂O（运行）₂治疗影响β-catenin-GSK-3β复合物的丰度。PC12-D蛋白裂解物₂未经处理的R细胞(车道1)或200μ米H（H）₂O（运行）₂(车道2)免疫沉淀1h(IP（IP）)带有GSK-3β抗体(车道3，车辆；车道4，H₂O（运行）₂). 蛋白质斑点(IB公司)用抗β-catenin抗体或GSK-3β抗体进行检测。为了证实免疫沉淀的GSK-3β蛋白和总裂解物的相对等量被印迹，将GSK-3蛋白印迹剥离并用β-肌动蛋白抗体重制。注意H₂O（运行）₂增加GSK-3β和β-catenin之间的结合以及GST-β-catenin的磷酸化，并且罗匹尼罗和GSK-3β抑制剂VIII预处理都减少了GST-β-catenin的磷酸化。