Akt和GSK-3损失β诱导PC12-D细胞死亡2R电池。Akt的影响(A类)-和GSK-3β(B类)-PC12-D上的特异性shRNA构建2R细胞存活。用Akt转染细胞(A类)-或GSK-3β(B类)-特异性shRNA构建，转染48小时后用CellTiter-Blue荧光法测定细胞活力。对照shRNA构建物XASH3 HP被用作对照。用Western免疫印迹法测定GSK-3β抑制细胞中GSK-3蛋白水平(B类)。数据以未转染对照的百分比表示，这些值代表两个独立实验中每个实验的12个微孔的平均值±S.E。在A类和B、 第页与XASH3 HP3相比，<0.001。C类，用Akt1 HP3 shRNA构建物转染细胞。48小时后，制备总细胞裂解物，并且Akt、GSK-3β、磷酸化(第页)-通过Western免疫印迹法测定GSK-3β、β-catenin、p53和ERK水平。使用shRNA构建体XASH3-HP作为对照。β-肌动蛋白为负荷对照。请注意，Akt的敲除诱导磷酸化（失活）GSK-3β，β-catenin的下调，p-p53水平升高，ERK水平降低。D类，Akt击倒细胞中Akt水平的免疫细胞化学分析。PC12-D（PC12-D）2用XASH3或Akt1 shRNA转染R细胞，44小时后用抗Akt抗体标记(红色)。总之，细胞核用DAPI染色(蓝色)。注意，Akt1 shRNA导致Akt水平降低，并在核浓缩的细胞中共存(箭头).
