DETANONOate上调RKIP表达。（A） 通过实时PCR评估，DETANONOate上调PC-3细胞中的RKIP转录水平。RKIP转录水平的诱导表现为扩增产物的标准化周期阈值（Ct）随时间的降低。在相同样本中评估的GAPDH的Ct值用作正常化对照。数据表示为三次执行的一次实验的平均标准化Ct值±STDEV*p<0.05：处理细胞与未处理细胞。（B） DETANONOate诱导RKIP蛋白表达。在DETANONOate处理后4和12小时，从DU145和PC-3细胞中获取蛋白裂解物，并进行蛋白质印迹分析，以测定RKIP蛋白。（C） 蜗牛对RKIp启动子活性的调节。将蜗牛siRNA或相对对照siRNA与pRKIP-Luc野生型（pRKIP-Luc w/t）或突变了5个E-box中3个的pRKIP-Luc突变体（pRKIP-Luc mut）启动子构建物共同转染DU145细胞*p=0.013：转染与转染，并用蜗牛siRNA细胞处理。（D） RKIP在EMT抑制中的直接作用。在使用CMV-HA-RKIP载体过度表达RKIP 48 h后，从DU145细胞中获取总细胞裂解物，并进行western blot分析，以测定所示基因产物的蛋白表达。使用CMV空载体（CMV-HA-EV）作为阴性转染对照。（E） siRNA沉默RKIP可逆转DETANOOATE介导的对DU145细胞EMT表型的抑制。用RKIP siRNA或对照siRNA预处理细胞70 h，然后再暴露于DETANONOate（1000 uM）中12 h。使用随机核苷酸序列（CNTR siRNA）作为阴性沉默对照。western blot分析检测RKIP、波形蛋白和纤维连接蛋白的表达。肌动蛋白被用作所有蛋白质分析的内部对照。
