DETANONOate抑制蜗牛的表达和活动。（A） DETANONOate抑制蜗牛表达。分别通过实时PCR和western blot分析评估1000μM DETANONOate处理细胞后蜗牛转录物（上部）和蛋白质水平（下部）的时间动力学分析。蜗牛转录水平的抑制表现为扩增产物的标准化周期阈值（Ct）随时间的增加。在相同样本中评估的GAPDH的Ct值用作正常化对照。数据表示为一次实验的平均标准化Ct值±STDEV，分三次进行*p<0.05：处理细胞与未处理细胞。（B） DETANONOate对蜗牛DNA结合活性的抑制作用。在不含DETANONOate的无血清培养基中培养DU145细胞30分钟或4小时。使用生物素标记的寡核苷酸蜗牛探针，通过EMSA评估蜗牛的DNA结合活性。（C） DETANONOate诱导蜗牛蛋白S-亚硝基化。DETANONOate治疗后S-亚硝基化蜗牛的免疫沉淀（1000μM，4 h）。总细胞裂解物用于免疫沉淀分析，使用材料和方法中描述的蛋白A珠。用抗S-亚硝基半胱氨酸（SNO-Cys）抗体沉淀S-亚硝酸盐化蛋白，用蜗牛多克隆抗体免疫印迹膜。兔IgG作为阴性对照。（D） 蜗牛抑制在eMt抑制中的直接作用。使用蜗牛siRNA抑制蜗牛72小时后，从DU 145细胞中获取总细胞裂解物，并进行western blot分析，以测定所示基因产物的蛋白表达。在转染试验中使用随机核苷酸序列（CNTR siRNA）作为对照。Actin被用作内部控制。
