图1。

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在没有DNA转移的情况下,通过Dot/Icm系统进行细菌间蛋白移位。(A类)细菌间蛋白质转移测定。通过移除位于供体细菌菌株之间的漂浮转录终止子来测量Cre杂交蛋白的易位trc公司发起人和npt II型(看)R(右))受体菌株携带质粒pZL184上的基因。携带完整报告者的细菌无法在含有卡那霉素和蔗糖的培养基上生长。Cre杂交蛋白移位到受体菌株中,通过在液氧磷赋予蔗糖敏感性的DNA片段的位点(sacB公司)和功能的重建loxP-npt II型平移融合。S.D.,Shine–Dalgarno序列;npt II型新霉素磷酸转移酶;红钻石,转录终止子。箭头表示trc公司发起人和液氧磷地点。(B)RSF1010融合产物的细菌间转移mobA公司基因。这个mobA公司基因融合到cre公司和RP4依赖性蛋白移位到受体大肠杆菌应变是用大肠杆菌第17–1节(15)作为供体选择卡那霉素耐药性和庆大霉素敏感性筛选。黑条,S17–1 Trb+捐赠者;点画条,大肠杆菌DH5αTrb捐赠者。(C类). 携带Cre融合的质粒不能转移到受体细胞。表达指定蛋白的质粒存在于大肠杆菌S17–1(Trb+)或嗜肺军团菌Lp02(点/Icm+; 裁判。11),并且通过使用任一受体来测量质粒转移的效率大肠杆菌嗜肺军团菌菌株。作为阳性对照,相同的质粒具有完整的oriT公司暴徒该系统用于证明供体菌株的转移能力。黑条,供体菌株大肠杆菌S17–1(Trb+);灰条,供体菌株嗜肺军团菌Lp02(点/Icm+; 裁判。11). (D类)在细菌细胞之间转移易位的Dot/Icm底物。蛋白质转移按照材料和方法,通过使用Lp02(点/Icm+)或Lp03(dotA公司)表达指定的蛋白质融合作为供体菌株。灰条,供体菌株嗜肺军团菌Lp02(点/Icm+);斑点条,供体菌株嗜肺军团菌Lp03(磅)(dotA公司).