美国生理学杂志心脏循环生理学。2011年8月；301（2）：H373–H381。
代谢性谷氨酸受体激活诱发的环氧二十碳三烯酸依赖性脑血管舒张
,1 ,1 ,2 ,三 ,三 ,4 ,5 ,2和
1 刘晓光
1马里兰州巴尔的摩约翰霍普金斯大学麻醉学和危重病护理医学系；
李春元
1马里兰州巴尔的摩约翰霍普金斯大学麻醉学和危重病护理医学系；
黛比·盖布雷梅丁
2威斯康星州密尔沃基市威斯康星医学院心血管研究中心和生理学系；
宋熙黄
三加利福尼亚大学昆虫与癌症中心系，加利福尼亚州戴维斯；
布鲁斯·D·哈莫克
三加利福尼亚大学戴维斯分校昆虫学和癌症中心系；
约翰·R·福尔克
4德克萨斯大学西南医学中心生物化学系，德克萨斯州达拉斯；和
理查德·罗曼
5密西西比州杰克逊市密西西比大学医学中心药理学系
大卫·R·哈德
2威斯康星州密尔沃基市威斯康星医学院心血管研究中心和生理学系；
雷蒙德·科勒
1马里兰州巴尔的摩约翰霍普金斯大学麻醉学和危重病护理医学系；
1马里兰州巴尔的摩约翰霍普金斯大学麻醉学和危重病护理医学系；
2威斯康星州密尔沃基市威斯康星医学院心血管研究中心和生理学系；
三加利福尼亚大学昆虫与癌症中心系，加利福尼亚州戴维斯；
4德克萨斯大学西南医学中心生物化学系，德克萨斯州达拉斯；和
5密西西比州杰克逊市密西西比大学医学中心药理学系
通讯作者。 转载请求和其他通信地址：R.C.Koehler，Johns Hopkins Medical Institutes麻醉学和危重症护理医学部，地址：马里兰州巴尔的摩市北沃尔夫街/布拉洛克1404号600号，邮编：21287-4961（电子邮件：ude.imhj@relheokr). 收到日期：2010年7月28日；2011年5月13日接受。
摘要
星形胶质细胞上的I组代谢型谷氨酸受体（mGluR）已被证明参与脑片中神经激活的脑血管舒张。药物刺激脑片中的mGluR可产生小动脉收缩或扩张，具体取决于血管张力的初始程度。在这里，我们检查了体内药物刺激mGluR是否会增加脑血流量。I组mGluR激动剂（S）-3,5-二羟基苯甘氨酸（DHPG）的1-mM溶液以5μl/min的速度在麻醉大鼠的皮层表面上过度注射，15–20分钟后，激光多普勒血流测量法测量的血流增加了30±2%（±SE）。过量注射I组mGluR拮抗剂可完全阻断反应，过量注射环氧乙酸三烯酸（EET）拮抗剂（5±4%）、EET合成抑制剂（11±3%）和环氧合酶-2抑制剂（15±3%）可减弱反应。服用环氧合酶-1抑制剂、神经元一氧化氮合酶抑制剂、血红素氧化酶、腺苷A对峰值血流反应没有显著影响2B型受体或20-羟基二十碳四烯酸（20-HETE）合成抑制剂。在30–60分钟的DHPG灌注后，血流反应逐渐减弱。20-HETE合成抑制剂减弱了这种流动响应的损失，并通过过量注入一种水解EET的环氧水解酶抑制剂来防止。这些结果表明，体内药物刺激mGluR可增加脑血流量，并且这种反应取决于EET和环氧合酶-2代谢产物的释放。环氧水解酶活性和20-HETE合成限制了对延长mGluR激活的反应持续时间。
关键词：星形胶质细胞、脑血流量、环氧水解酶、环氧酶、神经血管偶联
星形胶质细胞起着关键作用将脑血流量（CBF）的增加与神经元活动相结合(19). 研究(47)脑切片显示星形胶质细胞Ca增加2+在神经元刺激过程中，很大程度上取决于I组代谢型谷氨酸受体（mGluR）的刺激，以及附近已有张力的小动脉经常扩张。星形胶质细胞Ca增加的偶联2+血管舒张被归因于星形细胞释放环氧合酶（COX）产物(5,16,41,47,48)，环氧碳三烯酸（EET）(1,2,5)、和K+通过Ca的通量2+-敏感K+（K）钙)通道(11). 生理神经元激活的体内结果证实星形胶质细胞Ca快速增加2+(45)mGluR拮抗剂部分抑制的CBF增加(38,47)COX-2抑制剂，COX-2基因敲除(29,39)以及EET抑制剂和拮抗剂的使用(32,33,38). 此外，脑切片中基线张力较低的小动脉也有星形胶质细胞引起的血管收缩。收缩取决于强力血管收缩剂20-羟基二十碳四烯酸（20-HETE；参考文献。5,26). 谷氨酸刺激星形胶质细胞释放花生四烯酸(1)作为星形胶质细胞中环氧合酶合成EET的底物(1,2,28,33)星形胶质细胞中COX-1的前列腺素E2(48)以及脑血管平滑肌中CYP4A酶合成20-HETE(9). EET促进星形胶质细胞K的开放钙通道(14,46)，这被认为释放了足够的K+向内打开整流器K+血管平滑肌中的通道，从而引发超极化(11,15). EET也可以从星形胶质细胞扩散到邻近的平滑肌细胞，并促进血管K的开放钙通道(13). COX-2被认为是组成性表达于神经元而非星形胶质细胞(41,43). 几乎所有关于mGluR激活的血管舒张反应的研究都是在体外完成的。一项研究(15)已证明血管K活化的作用钙体内调节CBF对mGluR激动剂反应的通道。
本研究验证了以下假设：mGluR激活后CBF的增加是由COX产物和EET的形成和释放介导的，受限于可溶性环氧水解酶（sEH）对EET的分解，并受血管收缩剂20-HETE的形成调节。通过测量I组mGluR激动剂（S）-3,5-二羟基苯甘氨酸（DHPG；Ref。37)在大鼠大脑皮层表面，然后测定EET拮抗剂14,15-环氧衣藻酸-5（Z）-烯酸（14,15-EEZE）（EET合成抑制剂）联合用药的效果N个-甲基磺酰基-6-（2-丙炔氧基苯基）己酰胺（MS-PPOH），COX-1抑制剂5-（4-氯苯基）-1-（4-甲氧基苯）-3-（三氟甲基）-1H（H）-吡唑（SC-560），COX-2抑制剂N个-[2-（环己基氧基）-4-硝基苯基]-甲烷磺酰胺（NS-398），sEH抑制剂反式-4-[4-（3-金刚烷-1-基-乌里多）-环己基氧基]-苯甲酸(t吨-AUCB）和20-HETE合成抑制剂N个-羟基-N′-（4-正丁基-2-甲基苯基）甲脒（HET0016）。因为腺苷A2B型受体(38)和神经元一氧化氮（NO）合成酶（nNOS；参考文献。22)已知在神经元激活引起的血管舒张中起作用，因为星形胶质细胞中的血红素加氧酶在小猪软脑膜动脉中谷氨酸引起的血管扩张中起作用(20,21)，我们还评估了A的影响2B型受体拮抗剂alloxazine、nNOS抑制剂7-硝基吲哚唑（7-NI）和血红素加氧酶抑制剂铬中间卟啉IX（CrMPIX）对CBF对DHPG的反应。
材料和方法
所有动物程序均严格按照美国国立卫生研究院实验动物护理和使用指南并获得约翰霍普金斯大学动物护理和使用委员会的批准。
手术准备。
数据来自于76只成年雄性Wistar大鼠（250–350克；印第安纳波利斯州哈兰市）的体内实验，这些大鼠在气候控制的房间里进行12小时的光暗循环，可以随意提供食物和水。在手术过程中，用1.5%异氟醚麻醉大鼠。对股动脉和股静脉进行插管，并监测平均动脉血压。气管造口术用于机械通气，氧气浓度为30–40%2和～1.5%异氟醚。使用加热毯将直肠温度维持在37°C。动脉pH，P有限公司2、和Po个2使用血气分析仪（Chiron Diagnostics，Halstead，Essex，UK）进行测量，使用血氧饱和度计（OSM3；辐射计，哥本哈根，丹麦）测量血红蛋白浓度。
将大鼠置于俯卧位，头部用立体定向支架固定。通过仔细钻孔，将颅骨左侧的3×3mm区域变薄为半透明，以放置激光多普勒血流（LDF）探头，该探头位于前角后方2–3mm和外侧7mm处。一些抑制剂以5μl/min的恒定速率通过蛛网膜下腔超流在皮层表面给药(38). 在LDF探头位置上方钻一个小钻孔，以暴露硬脑膜。小心地将PE-10导管插入皮下，导管尖端逐渐变细至～120μm。另一个孔位于流量探针部位下方，并切开硬脑膜被动引流多余的液体。在5μl/min的灌注速率下，药物流出浓度可在10-15 min内达到准静态(38).
实验方案。
记录大鼠在使用或不使用各种抑制剂治疗动物的情况下，对1mM DHPG灌流1小时后的LDF反应。手术完成后1 h开始，以5μl/min的恒定速率在皮质表面上涂抹人工脑脊液（CSF）。人工CSF成分如下（单位：mM）：156 Na+，3千+，1.25卡2+，0.66毫克2+，133氯负极，25 HCO三负极6.7尿素和3.7葡萄糖。将脑脊液加热至37°C。在CSF超流15分钟后，将各种抑制剂或载体添加到超流物中长达1小时。然后，将1mM DHPG与特定抑制剂或载体一起添加到超流物中1小时。在先前的工作中，在超过1h的时间内，没有观察到血管对神经激活的反应受到额外的抑制(23,32,38).
11组（每组6只大鼠）用各种抑制剂进行治疗。为了测试DHPG的特异性，将I组mGluR亚型1拮抗剂（S）-（+）-α-氨基-4-羧基-2-甲基苯乙酸（LY-367385；300μM）和5亚型拮抗剂2-甲基-6-（苯乙炔基）吡啶（MPEP；100μM）在DHPG添加到超滤液之前一起超滤过。联合应用LY-367385和MPEP已显示可降低星形胶质细胞Ca2+以及脑片中对神经元激活的血管扩张反应，以及在触须刺激后降低体内LDF反应(47). 其他组用30μM 14,15-EEZE、20μM MS-PPOH或100μM NS-398对皮层表面进行灌注。这些浓度已被证明在体内最大限度地抑制LDF对触须刺激的反应(29,32,38). 对于SC-560，浓度为25μM，可最大限度地抑制LDF对缓激肽和高碳酸血症的反应(30)以及500μM的浓度，可抑制星形胶质细胞激活引起的小动脉扩张(41)，在另外两组中进行测试。在其他实验中，根据之前的工作，分别全身（1 mg/kg iv）和脑脊液灌流（1μM）给药alloxazine(38)显示LDF对触须刺激的反应受到抑制。由于7-NI在水溶液中相对不溶，因此在DHPG灌流前1小时以40 mg/kg的剂量腹腔注射7-NI。该剂量使LDF对触须刺激的反应稳定降低至少2小时(23). CrMPIX在15μM的浓度下过量使用，这表明它可以抑制小猪软脑膜小动脉扩张和CO生成，以应对谷氨酸(36)大鼠软脑膜小动脉扩张对AMPA的反应(31). HET0016在1μM的浓度下过量使用，发现其在nNOS抑制后增加LDF对触须刺激的反应(23)并阻断输注无细胞聚合血红蛋白后的脑血管收缩(35). sEH抑制剂t吨-AUCB的选择基于其相对较高的效力、溶解度和生物利用度(18,42)并在0.5μM的浓度下过量使用。缺血后隔离心脏灌流液中的这种浓度能够最大限度地恢复已形成的压力(7).
由10只大鼠组成的对照组在人工CSF中用三种载体中的一种进行1小时的超灌注，然后进行1小时的DHPG超灌注。载体为0.1%乙醇（14,15-EEZE、MS-PPOH、HET0016和t吨-AUCB）、0.1%二甲基亚砜（NS-398载体）和1 mM NaOH（LY-367385、alloxazine和CrMPIX载体）。由于与仅在人工脑脊液中过量使用DHPG的初步组相比，没有任何载体对LDF对DHPG反应产生显著影响，因此将所有载体治疗组的反应汇总。
独立大脑动脉研究。
为了评估DHPG对脑动脉张力的潜在直接影响，将大鼠大脑中动脉段（内径45-120μm；长度0.5-1mm）的孤立小分支放置在灌注室中，用玻璃微移液管插管，并用8-O聚乙烯缝合线固定到位。使用体视显微镜，用10-O聚乙烯缝合线捆扎侧支。将插管动脉段浸泡在与95%O平衡的生理盐水中2-5%一氧化碳237°C下的气体混合物。浸泡动脉段的生理盐水由以下成分组成（单位：mM）：130 NaCl，2.5 CaCl2，15氯化钠三，1.2硫酸镁4，1.2 NaH2人事军官4、4.7 KCl、5.5葡萄糖、10 HEPES和0.026 EDTA，pH 7.4。流入套管与容积储存器和压力传感器串联，以便控制和监测腔内压力。使用千分尺将大脑小动脉段拉伸至其体内长度，夹紧流出套管，并将壁内压力调节至40mmHg。在30分钟的平衡期后，动脉段被加压至80 mmHg。在应用1mM DHPG之前和之后，用视频测微计系统（Living Systems Instrumentation，Burlington，VT）测量内径10分钟。在反复冲洗DHPG后，将80 mM KCl加入浴中，以检查大脑动脉段的最大收缩反应。
在单独的研究中，EET异构体11,12-EET和14,15-EET的脑血管舒张作用在用17-十八烯酸（10μM）孵育空心加压（40 mmHg）脑动脉段30分钟后进行了检测，以抑制20-HETE和EET的内源性形成。此外，用sEH抑制剂对脑动脉段进行预处理t吨-AUCB（0.5μM），以防止外源添加的EET水解。在这些有条件的治疗后，将插管的脑动脉段加压至80 mmHg，并在浴缸中应用50μM血清素使其收缩。测量血管直径的百分比变化，以响应11,12-EET和14,15-EET的1、10、100和300 nM浓度的逐步增加。
统计分析。
在60分钟的灌注期内，LDF对DHPG的反应平均为5分钟。LDF反应以基线值的百分比计算，作为DHPG灌流开始前20分钟内的平均值。对于每个治疗组，通过双向方差分析（ANOVA）将LDF反应与联合药物对照组进行重复测量，然后进行Newman-Keuls多范围测试。A类对<0.05被认为是显著的。数据以平均值±SE表示。
结果
蛛网膜下腔注射1 mM DHPG后，LDF逐渐增加，在开始注射后5-10分钟达到25±3%，在注射后15-20分钟达到30±2%的峰值(). LDF增加开始的相对较慢的时间进程可能与清除内源性CSF所需的时间以及DHPG扩散到LDF探针取样的组织所需时间有关。在以前的工作中(38)放射性标记腺苷a的脑脊液流出浓度2年当以5μl/min的相同速率过量使用时，拮抗剂需要10-15分钟才能达到80%的流入浓度。因此，可能需要相似的时间来平衡DHPG的流入和流出浓度。DHPG灌流30至60分钟后，LDF反应逐渐减弱至12±4%。星形胶质细胞表达I型mGluR1和mGluR5(14). mGluR1拮抗剂LY-367385（300μM）与mGluR5拮抗剂MPEP（100μM）的超融合阻断了DHPG超融合过程中LDF的增加()从而证实DHPG是通过mGluR起作用的。
在有载体存在的情况下，蛛网膜下腔灌注二羟苯甘氨酸（DHPG）60分钟期间皮质激光多普勒流量的百分比变化（±SE）(n个=10）或代谢型谷氨酸受体拮抗剂LY-367385和2-甲基-6-（苯乙炔基）吡啶（MPEP；n个= 6). *对<0.05，来自车辆治疗。
EET拮抗剂14,15-EEZE（30μM；). 此外，COX-2抑制剂NS-398（100μM）在DHPG灌注的前30分钟内部分减弱了反应(). 然而，浓度为25μM的COX-1抑制剂SC-560对反应没有显著影响(). 将浓度增加到500μM会产生一种可变的反应，这种反应仅在5–10分钟的灌流期间与对照反应有显著差异。
载体存在下蛛网膜下腔灌注DHPG 60分钟期间皮质激光多普勒流量的百分比变化（±SE）(n个=10）或环氧乙酸三烯酸拮抗剂14,15-环氧乙酸-5（Z）-烯酸（14,15-EEZE；n个= 6). *对<0.05，来自车辆处理。
在存在载体的情况下蛛网膜下腔灌注DHPG 60分钟期间皮质激光多普勒流量的百分比变化（±SE）(n个=10）或环氧合酶-2抑制剂NS-398(n个= 6). *对<0.05，来自车辆治疗。
载体存在下蛛网膜下腔灌注DHPG 60分钟期间皮质激光多普勒流量的百分比变化（±SE）(n个=10）或浓度为25μM的环氧合酶-1抑制剂SC-560(n个=6）或500μM(n个= 6). *对<0.05，来自车辆治疗。
不同治疗对LDF在15–20分钟灌流时对DHPG反应的影响总结如下除了14,15-EEZE和NS-398外，EET合成抑制剂MS-PPOH（20μM）显著降低了对DHPG的反应。相反，在15-20分钟对DHPG的反应不受A的影响2B型受体拮抗剂alloxazine、nNOS抑制剂7-NI、血红素加氧酶抑制剂CrMPIX或20-HETE合成抑制剂HET0016().
有载体存在时蛛网膜下腔灌注DHPG后15-20分钟皮质激光多普勒血流百分比变化的比较(n个=10），LY-367385+MPEP(n个=6），EET拮抗剂14,15-EEZE(n个=6），EET合成抑制剂N个-甲基磺酰基-6-（2-丙炔氧基苯基）己酰胺（MS-PPOH；n个=6），环氧合酶-2抑制剂NS-398(n个=6），浓度为25μM的环氧合酶-1抑制剂SC-560(n个=6）或500μM(n个=6），A2B型受体拮抗剂异恶嗪(n个=6），神经元一氧化氮合成抑制剂7-硝基吲哚唑（7-NI；n个=6），血红素加氧酶抑制剂铬中间卟啉IX（CrMPIX；n个=6），或20-羟基二十碳四烯酸（20-HETE）合成抑制剂N个-羟基-N′-（4-正丁基-2-甲基苯基）甲脒（HET0016；n个= 6). *对<0.05，来自车辆治疗。
尽管alloxazine、7-NI和CrMPIX对服用DHPG后15-20出现的峰值血管舒张反应没有影响，但这些抑制剂在较早的时间点有显著的作用。在DHPG灌流开始后5–15分钟，Alloxazine和CrMPIX显著降低了LDF的增加，而7-NI在5–10分钟时显著减轻了LDF反应(). 然而，在DHPG灌注15分钟后，alloxazine、7-NI和CrMPIX并没有显著减弱LDF反应。HET0016在DHPG灌流0–5分钟时减弱了LDF反应(). HET0016还防止了DHPG给药35至60分钟期间DHPG反应下降。
在有载体存在的情况下，蛛网膜下腔注射DHPG 5–10、10–15和15–20分钟期间皮质激光多普勒流量（±SE）的百分比变化(n个=10），异恶嗪(n个=6），7-NI(n个=6），或CrMPIX(n个= 6). 尽管与溶媒相比，这些抑制剂对峰值反应没有显著影响，但它们在特定时间减弱了早期增加*对<0.05，来自车辆治疗。
载体存在下蛛网膜下腔灌注DHPG 60分钟期间皮质激光多普勒流量的百分比变化（±SE）(n个=10）或20-HETE合成抑制剂HET0016(n个= 6). *对<0.05，来自车辆治疗。
为了确定对DHPG的反应是否受到sEH（sEH抑制剂）降解EET的限制t吨-AUCB过量。sEH抑制剂在DHPG灌流的前25分钟内对LDF反应没有影响。然而，LDF反应增强了25–30分钟，并且通过以下措施阻止了在30到60分钟之间出现的LDF降低t吨-AUCB输液().
载体存在下蛛网膜下腔灌注DHPG 60分钟期间皮质激光多普勒流量的百分比变化（±SE）(n个=10）或可溶性环氧化物水解酶抑制剂反式-4-[4-（3-金刚烷-1-基脲基）-环己基氧基]-苯甲酸(t吨-AUCB；n个= 6). *对<0.05，来自车辆治疗。
在DHPG灌注期间，所有组的动脉pH值、血气和血红蛋白浓度均保持在正常生理范围内(). 服用各种抑制剂和过量注射DHPG均未显著改变动脉血压(). 此外，服用LY-367385+MPEP、14,15-EEZE、MS-PPOH、NS-398、alloxazine、CrMPIX或t吨-AUCB公司(). 然而，服用25μM和500μM SC-560以及服用7-NI后，基线LDF显著降低。服用HET0016后基线LDF略有增加。
表1。
| 治疗 | 酸碱度 | 帕合作2，托尔 | 帕O（运行）2，托尔 | 血红蛋白，g/dl |
|---|
| 车辆 | 7.40 ± 0.01 | 39 ± 0.4 | 113±4 | 11.8 ± 0.2 |
| MPEP/LY-367385型 | 7.43 ± 0.01 | 36 ± 0.7 | 113 ± 3 | 12.7 ± 0.3 |
| 14,15-EEZE公司 | 7.41 ± 0.01 | 38 ± 0.7 | 120 ± 3 | 12.3 ± 0.4 |
| MS-PPOH公司 | 7.39 ± 0.01 | 38 ± 0.9 | 118 ± 4 | 12.0 ± 0.2 |
| NS-398系列 | 7.41 ± 0.01 | 38 ± 0.4 | 115 ± 6 | 11.5 ± 0.4 |
| SC-560（25微米） | 7.40±0.01 | 38 ± 0.7 | 102 ± 3 | 11.8 ± 0.3 |
| SC-560（500微米） | 7.40 ± 0.01 | 37 ± 0.8 | 112 ± 5 | 11.6 ± 0.4 |
| 异恶嗪 | 7.39 ± 0.01 | 38 ± 0.7 | 125 ± 6 | 11.6 ± 0.2 |
| 7-硝基咪唑 | 7.39±0.01 | 37 ± 0.8 | 129±4 | 12.4 ± 0.2 |
| CrMPIX公司 | 7.40 ± 0.01 | 38 ± 0.7 | 119 ± 2 | 12.0 ± 0.2 |
| HET0016型 | 7.41 ± 0.01 | 38 ± 0.5 | 116 ± 4 | 12.5 ± 0.2 |
| t吨-AUCB公司 | 7.39 ± 0.01 | 38 ± 0.6 | 116±5 | 11.3 ± 0.3 |
表2。
大鼠DHPG灌流前药物治疗后MABP和LDF百分比的变化
| MABP，毫米汞柱
| |
|---|
| 治疗 | 基线 | 药物治疗 | 15-20分钟DHPG | 药物治疗后LDF，基线百分比 |
|---|
| 车辆 | 96 ± 3 | 96 ± 3 | 98 ± 3 | 100 ± 1 |
| MPEP/LY-367385 | 100 ± 2 | 98±1 | 97 ± 2 | 102±2 |
| 14,15-EEZE公司 | 91 ± 2 | 90 ± 2 | 90 ± 2 | 101 ± 2 |
| MS-PPOH公司 | 93 ± 3 | 90 ± 3 | 92 ± 4 | 98 ± 1 |
| NS-398系列 | 94 ± 3 | 93 ± 2 | 93 ± 3 | 100 ± 1 |
| SC-560（25微米） | 97 ± 3 | 98 ± 2 | 98 ± 2 | 91 ± 2* |
| SC-560（500微米） | 96 ± 2 | 96 ± 1 | 99 ± 2 | 77 ± 9* |
| 异恶嗪 | 88 ± 2 | 90 ± 3 | 90 ± 2 | 101 ± 1 |
| 7-硝基咪唑 | 106 ± 2 | 104 ± 1 | 104 ± 1 | 92 ± 2* |
| 铬镍铁合金 | 96 ± 3 | 95±3 | 96 ± 3 | 101 ± 2 |
| het016 | 100 ± 2 | 99 ± 2 | 98 ± 2 | 104 ± 1* |
| t吨-AUCB公司 | 91 ± 2 | 92 ± 3 | 91 ± 2 | 101 ± 1 |
为了确定DHPG是否对大脑动脉有直接影响，分离大脑中动脉的分支并加压至80 mmHg。动脉直径不受1 mM DHPG照射10分钟的影响(). 洗脱DHPG后，添加80 mM KCl产生71±3%的收缩，从而表明动脉段功能正常。
大鼠大脑中动脉孤立加压分支的内径（±SE；n个=6）在10分钟的时间控制期内，在向外部沐浴液中添加1 mM DHPG后。双向重复测量方差分析表明，治疗或治疗与时间的交互作用没有显著影响。
用5-羟色胺预构大脑中动脉后，在大脑中动脉的隔离加压分支中测量11,12-EET和14,15-EET对动脉直径的直接影响。任何一种区域异构体的应用都会导致大脑动脉段直径的类似浓度依赖性增加(). 在对每个区域异构体进行测试的1-300-nM浓度范围内，扩张显著(对< 0.01).
大鼠大脑中动脉离体加压支内径变化百分比（±SE；n个=6）预先用50μM 5-羟色胺限制，然后暴露于浓度增加1–300 nM的11,12-EET(A类)或14,15-EET(B类). *对与基线相比，<0.01。
讨论
本研究表明，I组mGluR激动剂DHPG在体内灌注皮层表面后增加了大鼠大脑皮层的CBF，但对体外分离的大脑动脉的张力没有直接影响。CBF的增加在很大程度上取决于EET的合成和释放，因为使用选择性环氧酶抑制剂MS-PPOH和假定的EET受体拮抗剂14,15-EEZE后，反应大大减弱。此外，CBF反应的充分表达需要COX-2代谢物，而COX-1代谢物对体内反应不太重要。相反，阻断腺苷A2B型受体、nNOS活性和血红素加氧酶活性对峰值血流量反应没有影响，尽管最初的反应减弱了。随着mGluR激活时间的延长，CBF反应逐渐减弱，这种减弱似乎与sEH破坏EET和血管收缩剂20-HETE的逐渐积累有关。
随着神经元的激活，mGluR拮抗剂减弱但不能完全阻断体内CBF反应(47). 施用EET拮抗剂或EET合成抑制剂也会减弱CBF对神经元激活的反应，并且将这些药物与mGluR拮抗剂结合不会产生额外的显著降低反应(38). 这些发现表明，CBF对神经元激活反应的mGluR依赖性成分与EET的形成和作用有关。目前的研究结果表明，CBF对选择性mGluR激活的反应在很大程度上受到14,15-EEZE和MS-PPOH的抑制，这也符合血管舒张的mGluR-激活成分高度依赖EET的概念。星形胶质细胞衍生EET可能发挥自分泌作用，促进星形胶质细胞Ca的增加2+和星形细胞K的开放钙通道(5,11,14,46). EET也可能从星形胶质细胞中释放出来，以旁分泌的方式打开K钙通道与血管平滑肌细胞超极化(1). 在这里，我们表明，11,12-EET和14,15-EET是纳米摩尔浓度范围内孤立脑动脉的直接有效扩张器，因此能够以旁分泌方式发挥作用。
体内使用的14,15-EEZE（30μM）浓度被选择为略高于先前显示的10-μM浓度，以对抗体外EET的血管扩张反应(12,38). 体内过量使用的MS-PPOH（20μM）浓度略高于达到50%抑制（IC）所需的13μM浓度50)EET体外合成(44)与之前研究表明的抑制体内CBF对神经元激活的反应相同(32). 此外，此浓度的MS-PPOH不会显著抑制20-HETE合成或COX活性(44). 因此，在本实验中，这些结构不同的药物可能通过抑制EET的合成和/或作用发挥作用。
COX可以代谢5,6-EET，但不能代谢其他EET区域异构体(24). 然而，14,15-EET及其代谢物是星形胶质细胞中最丰富的环氧酶代谢物(三,28). 此外，经消炎痛抑制COX后，MS-PPOH仍能有效抑制血管舒张对触须刺激的影响。因此，5,6-EET的COX代谢产物不太可能介导对DHPG的血管舒张反应。
已知过量使用浓度为100μM的NS-398抑制COX-2可以减弱但不能消除CBF对神经元激活的反应(29,39). 这种浓度被认为对COX-2具有选择性，因为它对COX-1或no-依赖性血管对缓激肽、乙酰胆碱或高碳酸血症的反应没有影响，对COX-2-null小鼠也没有影响(29). 在皮层神经元亚群中发现COX-2的组成性表达(43)但在皮质星形胶质细胞中未检测到(41). 因此，神经元释放的COX-2代谢物可能直接作用于血管平滑肌，在神经元激活期间直接产生血管舒张作用。然而，我们对100μM NS-398的研究结果表明，COX-2代谢物可能有助于对mGluR激动剂的血管反应。假设mGluR激动剂仅作用于星形胶质细胞，则神经元释放的COX-2代谢物可能与星形胶质细胞内或血管平滑肌内的mGluR-诱发信号相互作用。
据报道，在浓度为25μM时，COX-1抑制剂SC-560可以抑制缓激肽和高碳酸血症诱导的皮层血管舒张，但不能抑制感觉刺激诱发的皮层血管扩张(30). 在本研究中，25μM SC-560的浓度足以降低基线CBF，但对DHPG灌注期间CBF的增加百分比没有影响。因此，COX-1代谢物似乎对调节体内对神经元激活或mGluR刺激的血管舒张反应并不重要。有趣的是，较高剂量的500μM SC-560抑制星形胶质细胞笼状钙的光解引起的小动脉扩张2+活体小鼠大脑皮层(41)而MS-PPOH对抑制这种反应无效。在本研究中，这种高浓度SC-560仅在一个早期时间点显著降低LDF对DHPG的反应，在其他时间点的影响是可变的。尽管星形细胞钙增加2+被认为在介导mGluR信号、Ca的时空特性中起关键作用2+星形胶质细胞笼状钙的生理神经元激活、光解所诱发的信号2+，和长期暴露于mGluR激动剂是不同的，因此可能通过不同的机制产生血管舒张。此外，血管反应与钙的关系2+星形胶质细胞的端足是双峰的(15). 此外，据报道，SC-560在某些细胞系统中失去了其COX-1选择性，并在低纳米摩尔浓度范围内抑制COX-2(6). 因此，对500μM SC-560高浓度结果的解释可能存在问题。
腺苷A2B型据报道，包括alloxazine在内的拮抗剂可以减弱CBF对神经元激活的反应，而alloxazines与mGluR拮抗剂联合使用不会进一步降低这种反应(38). 缺乏加性效应表明刺激A2B型受体参与CBF对神经元激活反应的mGluR依赖成分。然而，在本研究中，alloxazine并没有降低LDF对DHPG的峰值反应，尽管当下层皮质组织中DHPG浓度可能仍在增加时，初始反应减弱。A的激活2B型星形胶质细胞上的受体可以增加细胞内钙2+(27,34)并可能促进钙2+生理神经元激活过程中的信号传导。我们的结果表明A2B型当大脑皮层表面和深层组织之间的DHPG浓度对LDF产生次大的影响时，受体可能有助于增加血流量。然而，在峰值响应期间，星形胶质细胞Ca的增加2+DHPG产生的可能足以产生血管舒张作用，而无需A的促进2B型受体刺激。
nNOS的激活也有助于神经元激活引起的部分充血反应(8,22). 此外，mGluR激动剂反式-1-氨基-1,3-环戊烷二羧酸（ACPD）能够增加体内NOS活性(4). 然而，ACPD可以作用于I组和II组mGluR，而DHPG对I组mGlu R更具选择性(37). 在本研究中，DHPG更有可能通过不需要激活nNOS的I组mGluR星形胶质细胞途径直接产生血管舒张作用，从而解释了7-NI对DHPG诱发的LDF峰值反应缺乏影响的原因。然而，7-NI确实在DHPG灌流5-10分钟时减弱了LDF反应，我们不能排除DHPG对神经元组I mGluR的作用。另一种解释是，星形胶质细胞的激活可能会反馈给神经元谷氨酸受体(17)激活nNOS或7-NI给药后NO生物利用度降低可使细胞色素P450合成20-HETE(23,40)然后在这个早期点起到减缓血管舒张的作用。
在成年大鼠中，应用AMPA可产生软脑膜动脉扩张，而血红素氧化酶抑制剂可部分减少软脑膜血管扩张(31). 在小猪皮层，谷氨酸的应用会产生依赖血红素氧化酶活性的软脑膜动脉扩张(20,36). 星形胶质细胞似乎有助于未成熟仔猪对谷氨酸的反应中CO的增加(20,21). 在本研究中，CrMPIX适度减弱了LDF对早期过量DHPG的反应，但不影响峰值反应。因此，当mGluR激活达到亚最大值时，CO可能有助于血管舒张反应，但CO对成熟大鼠大脑的最大流量反应不是必需的。在评估血红素氧化酶在胶质-血管偶联中的作用时，需要考虑发育、种类和小动脉段（软脑膜动脉与实质内小动脉）的差异。
在大脑皮层切片中，应用ACPD在低基调小动脉中产生20-HETE依赖性收缩，在高基调小脑中产生EET依赖性舒张(5). 此外，笼状钙的光解引起的20-HETE依赖性收缩2+被认为是由星形胶质细胞中释放花生四烯酸的星形胶质细胞磷脂酶活性引起的，花生四烯醇酸是血管平滑肌中合成20-HETE的底物(26). 在本实验中，以1μM的浓度过量添加20-HETE合成抑制剂HET0016，该浓度远高于IC5035 nM，用于抑制大鼠肾微粒体中20-HETE的合成，但远低于IC502.8μM用于抑制大鼠肾微粒体中EET合成和COX活性(25)特别是考虑到HET0016与蛋白质的紧密结合。发现HET0016可使基线CBF小幅增加，但不会影响DHPG产生的CBF的最大增加。这一结果表明，20-HETE合成最初并不反对mGluR刺激引起的EET依赖性舒张。然而，HET0016在DHPG灌流的前5分钟内确实显著减弱了CBF反应。这一观察表明，当皮质组织中DHPG的浓度开始增加时，20-HETE可能起到血管扩张剂的作用。在这方面，20-HETE被COX大量代谢(24)至20-羟基-PGE1据报道，20-HETE通过COX依赖机制产生基底动脉血管舒张(10). 因此，DHPG灌流前5分钟对HET0016的初始反应的一种解释是，20-HETE的COX代谢产物有助于血管扩张反应。相反，当mGluR激活时间延长到30分钟以上时，CBF反应减弱，HET0016阻止了这种衰减。这一结果表明，20-HETE依赖性收缩作用于对抗mGluR长时间激活后的血管舒张。
sEH抑制剂的使用t吨-AUCB在DHPG过量输注的前20分钟内未影响CBF反应。然而，CBF反应在20-30分钟内持续增加，30分钟后增加的CBF反应没有减弱。这表明sEH对EET的代谢并不限制CBF对mGluR初始激活的反应，但当mGluR激活延长时，EET的破坏显然成为一个限制因素。EET代谢是否随着生理激活时间的延长而成为限制因素尚待确定。
另一个考虑是，mGluR长期刺激引起的血管扩张反应减弱可能是由于星形胶质细胞Ca的非线性血管反应所致2+.而星形胶质细胞Ca中度增加2+与小鼠皮质切片中的血管舒张、星形胶质细胞Ca的大量增加有关2+与血管收缩有关，血管收缩与钾的释放增加有关+来自星形胶质细胞K钙通道(15). 因此，对超过30分钟DHPG灌注后CBF反应减弱的一种解释是，长时间mGluR刺激产生大量星形胶质细胞Ca2+反应并导致细胞外钾+血管周围空间的浓度超过K+平滑肌内受体K介导的最大血管舒张反应所需的浓度+频道。为了支持这种可能性，研究人员发现，当细胞外K+浓度从3 mM提高到15 mM，CBF对ACPD反应的相应增加和减少均被星形胶质细胞K抑制剂减弱钙通道(15).
EET和COX-2抑制剂影响CBF对mGluR激动剂的反应，而不是基线流量，而COX-1和nNOS抑制剂减少了基线流量，但并未实质性影响对mGlu R激动剂反应。因此，EET和COX-2代谢物对薄壁细胞激活的动态血管反应更为重要，而COX-1代谢物和NO对血管张力的稳态抑制更为重要。这就提出了一个问题，即当存在基线电活动时，为什么EET和COX-2代谢物在基线条件下不抑制血管舒缩张力。可能存在星形胶质细胞信号传递所需的激活阈值，麻醉会将自发活动降低到该阈值以下。此外，EET和20-HETE的合成受底物限制，花生四烯酸迅速重新结合在膜磷脂中。因此，可能需要刺激，在本例中为mGluR激动剂，以释放花生四烯酸并刺激这些血管舒缩调节剂的产生。
总之，在大鼠大脑皮层激活I组mGluR可增加体内CBF，这主要取决于EET的合成和释放，部分取决于COX-2代谢物的形成和释放。随着mGluR的长时间激活，由于sEH和血管收缩剂20-HETE的积累导致EET的破坏，血管舒张反应明显减弱。
赠款
所述项目由国家心脏、肺和血液研究所拨款HL-59996（致D.R.Harder、R.J.Roman和R.C.Koehler）支持；由国家心脏、肺和血液研究所拨款HL-033833和HL-092105（给D.R.Harder）；由国家环境健康科学研究所拨款R37 ES-02710和国家心脏、肺和血液研究所拨款HL-059699（发给B.D.Hammock）；以及美国国家普通医学科学研究所GM-031278拨款和罗伯特·A·韦尔奇基金会（致J·R·福尔克）。B.D.Hammock是美国哮喘基金会的乔治和朱迪·马库斯高级研究员。本文内容完全由作者负责，不一定代表美国国立卫生研究院的官方观点。
披露
B.D.Hammock和S.H.Hwang是可溶性环氧水解酶抑制剂及其生物学专利的作者；该专利由加利福尼亚大学持有。
参考文献
1Alkayed NJ、Birks EK、Narayanan J、Petrie KA、Kohler-Cabot AE、Harder DR。P-450花生四烯酸氧化酶在大鼠脑血流对谷氨酸反应中的作用.(打、击等的)一下 28: 1066–1072, 1997 [公共医学][谷歌学者] 2Alkayed NJ、Narayanan J、Gebremedhin D、Medhora M、Roman RJ、Harder博士。大鼠脑星形胶质细胞花生四烯酸环氧酶的分子特征.(打、击等的)一下 27: 971–979, 1996 [公共医学][谷歌学者] 三。Amruthesh SC、Boerschel MF、McKinney JS、Willoughby KA、Ellis EF。花生四烯酸在培养的大鼠海马星形胶质细胞中代谢为环氧二十碳三烯酸、羟基二十碳四烯酸和前列腺素.神经化学杂志 61: 150–159, 1993 [公共医学][谷歌学者] 4Bhardwaj A、Northington FJ、Martin LJ、Hanley DF、Traystman RJ、Koehler RC。代谢型谷氨酸受体介导的体内一氧化氮生成的特征.大脑血流代谢杂志 17: 153–160, 1997 [公共医学][谷歌学者] 5Blanco VM、Stern JE、Filosa JA。星形胶质细胞衍生信号的声调依赖性血管反应.美国生理学杂志心脏循环生理学 294：H2855–H28632008年[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 6Brenneis C、Maier TJ、Schmidt R、Hofacker A、Zulauf L、Jakobsson PJ、Scholich K、Geisslinger G。SC-560对前列腺素E2合成的抑制独立于环氧化酶1的抑制.美国财务会计准则委员会J 20: 1352–1360, 2006 [公共医学][谷歌学者] 7Chaudhary KR、Abukhashim M、Hwang SH、Hammock BD、Seubert JM。反式-4-[4-（3-金刚烷-1-基-乌里多）-环己氧基]-苯甲酸抑制可溶性环氧水解酶对缺血再灌注损伤具有保护作用.心血管药理学杂志 55: 67–73, 2010[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 8Cholet N、Bonvento G、Seylaz J。神经元一氧化氮合酶抑制对体感刺激脑血管舒张反应的影响.大脑研究 708: 197–200, 1996 [公共医学][谷歌学者] 9Dunn KM、Renic M、Flasch AK、Harder DR、Falck J、Roman RJ。自发性高血压大鼠脑血管中20-HETE生成增加导致缺血性中风和氧化应激的严重程度.美国生理学杂志心脏循环生理学 295：H2455–H24652008年[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 10Fang X、Faraci FM、Kaduce TL、Harmon S、Modrick ML、Hu S、Moore SA、Falck JR、Weintraub NL、Spector AA。20-羟基花生四烯酸是一种有效的小鼠基底动脉扩张剂：环氧合酶的作用.美国生理学杂志心脏循环生理学 291：H2301–H23072006[公共医学][谷歌学者] 11Filosa JA、Bonev AD、Straub SV、Meredith AL、Wilkerson MK、Aldrich RW、Nelson MT。局部钾信号传导将神经元活动与脑血管舒张联系起来.自然神经科学 9：1397–14032006年[公共医学][谷歌学者] 12Gauthier KM、Deeter C、Krishna UM、Reddy YK、Bondlela M、Falck JR、Campbell WB。14,15-环氧二十碳五（Z）-烯酸：一种选择性环氧二十碳三烯酸拮抗剂，可抑制冠状动脉内皮依赖性超极化和舒张.循环研究 90: 1028–1036, 2002 [公共医学][谷歌学者] 13Gebremedhin D、Ma YH、Falck JR、Roman RJ、VanRollins M、Harder DR。脑环氧脂肪酸对脑动脉平滑肌的作用机制.美国生理学杂志心脏循环生理学 263：H519–H5251992年[公共医学][谷歌学者] 14Gebremedhin D、Yamura K、Zhang C、Bylund J、Koehler RC、Harder DR。代谢性谷氨酸受体激活增强两种钙的活性2+-激活的K+大鼠海马星形胶质细胞的通道.神经科学 23: 1678–1687, 2003[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 15Girouard H、Bonev AD、Hannah RM、Meredith A、Aldrich RW、Nelson MT。星形细胞终足Ca2+和BK通道决定小动脉的扩张和收缩.《美国科学院院刊》 107: 3811–3816, 2010[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 16Gordon GR、Choi HB、Rungta RL、Ellis Davies GC、MacVicar BA。脑代谢决定了星形胶质细胞控制小动脉的极性.性质 456: 745–749, 2008[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 17哈密尔顿NB，阿特维尔D。星形胶质细胞真的分泌神经递质吗？ Nat Rev神经科学 11: 227–238, 2010 [公共医学][谷歌学者] 18Hwang SH、Tsai HJ、Liu JY、Morisseau C、Hammock BD。口服生物有效的可溶性环氧水解酶抑制剂.化学 50：3825–38402007年[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 19Koehler RC、Roman RJ、Harder DR。星形胶质细胞与脑血流调节.神经科学趋势 32: 160–169, 2009 [公共医学][谷歌学者] 20Leffler CW、Parfenova H、Fedinec AL、Basuroy S、Tcheranova D。星形胶质细胞和一氧化碳在新生猪软脑膜小动脉扩张中对谷氨酸的贡献.美国生理学杂志心脏循环生理学 291：H2897–H29042006年[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 21Li A、Xi Q、Umstot ES、Bellner L、Schwartzman ML、Jaggar JH、Leffler CW。星形胶质细胞衍生的CO是一种扩散信使，通过激活平滑肌细胞KCa通道介导谷氨酸诱导的脑小动脉扩张.循环研究 102: 234–241, 2008[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 22Lindauer U、Megow D、Matsuda H、Dirnagl U。一氧化氮：大鼠体感皮层神经血管耦合的调节剂而非调节剂.美国生理学杂志心脏循环生理学 277：H799–H8111999年[公共医学][谷歌学者] 23Liu X、Li C、Falck JR、Roman RJ、Harder DR、Koehler RC。胡须-桶皮层功能性充血时一氧化氮、20-HETE和EET的相互作用.美国生理学杂志心脏循环生理学 295：H619–H6312008年[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 24McGiff JC、Quilley J。20-HETE和肾脏：旧问题的解决和新开端.美国生理学杂志Regul Integr Comp Physiol 277：R607–r6231999年[公共医学][谷歌学者] 25Miyata N、Taniguchi K、Seki T、Ishimoto T、Sato-Watanabe M、Yasuda Y、Doi M、Kametani S、Tomishima Y、Ueki T、Sato M、Kameo K。HET0016，一种20-HETE合成酶的高效选择性抑制剂.杂志 133: 325–329, 2001[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 26Mulligan SJ，MacVicar文学学士。星形胶质细胞终末钙瞬变引起脑血管收缩.性质 431: 195–199, 2004 [公共医学][谷歌学者] 28Nithipatikom K、Grall AJ、Holmes BB、Harder DR、Falck JR、Campbell WB。花生四烯酸细胞色素P450代谢物的液相色谱-电喷雾电离质谱分析.Ana Biochem公司 298: 327–336, 2001 [公共医学][谷歌学者] 29Niwa K、Araki E、Morham SG、Ross ME、Iadecola C。环氧合酶-2导致胡须皮层功能性充血.神经科学 20: 763–770, 2000[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 30Niwa K、Haensel C、Ross ME、Iadecola C。环氧合酶-1参与脑循环的选择性血管扩张反应.循环研究 88: 600–608, 2001 [公共医学][谷歌学者] 31Ohata H、Cao S、Koehler RC。腺苷A的贡献2年和A2B型AMPA诱导大鼠软脑膜小动脉扩张的受体和血红素加氧酶.美国生理学杂志Regul Integr Comp Physiol 291：R728–R7352006年[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 32Peng X、Carhuapoma JR、Bhardwaj A、Alkayed NJ、Falck JR、Harder DR、Traystman RJ、Koehler RC。环氧酶抑制剂对触须刺激大鼠皮层功能性充血的抑制作用.美国生理学杂志心脏循环生理学 283：H2029–H20372002年[公共医学][谷歌学者] 33Peng X、Zhang C、Alkayed NJ、Harder DR、Koehler RC。大鼠皮层功能性充血对前爪刺激对环氧酶和一氧化氮合酶活性的依赖性.大脑血流代谢杂志 24: 509–517, 2004 [公共医学][谷歌学者] 34Pilitsis JG，Kimelberg香港。腺苷受体介导的急性分离星形胶质细胞内钙的刺激.大脑研究 798: 294–303, 1998 [公共医学][谷歌学者] 35Qin X、Kwansa H、Bucci E、Roman RJ、Koehler RC。20-HETE在交换输注无细胞聚合血红蛋白后红细胞压积降低时软脑膜小动脉收缩反应中的作用.应用物理学杂志 100: 336–342, 2006[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 36Robinson JS、Fedinec AL、Leffler CW。一氧化碳在谷氨酸受体诱导新生猪软脑膜小动脉扩张中的作用.美国生理学杂志心脏循环生理学 282：H2371–h23762002年[公共医学][谷歌学者] 37Schoepp DD、Goldsworthy J、Johnson BG、Salhoff CR、Baker SR。3,5-二羟基苯甘氨酸是大鼠海马磷酸肌醇相关代谢型谷氨酸受体的高选择性激动剂.神经化学杂志 63: 769–772, 1994 [公共医学][谷歌学者] 38Shi Y、Liu X、Gebremedhin D、Falck JR、Harder DR、Koehler RC。大鼠胡须-桶皮层神经血管耦合中环氧脂肪酸、腺苷受体和代谢型谷氨酸受体的相互作用机制.大脑血流代谢杂志 28: 111–125, 2008[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 39斯特凡诺维奇B、博塞蒂F、席尔瓦AC。环氧合酶-2在脑血管偶联中的调节作用.神经成像 32: 23–32, 2006 [公共医学][谷歌学者] 40Sun CW、Alonso-Galicia M、Taheri MR、Falck JR、Harder DR、Roman RJ。一氧化氮-20-羟基二十碳四烯酸相互作用在钾调节中的作用+肾小动脉的通道活性和血管张力.循环研究 83: 1069–1079, 1998 [公共医学][谷歌学者] 41Takano T、Tian GF、Peng W、Lou N、Libionka W、Han X、Nedergaard M。星形胶质细胞介导的脑血流控制.自然神经科学 9: 260–267, 2006 [公共医学][谷歌学者] 42蔡HJ、黄SH、莫里索C、杨J、琼斯PD、卡萨加米T、金IH、哈莫克BD。可溶性环氧化物水解酶抑制剂在犬体内的药代动力学筛选.欧洲药学杂志 40: 222–238, 2010[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 43Wang H、Hitron IM、Iadecola C、Pickel VM。大鼠体感皮层含环氧合酶-2和一氧化氮合酶神经元的突触和血管联系.大脑皮层 15: 1250–1260, 2005 [公共医学][谷歌学者] 44Wang MH、Brand-Schieber E、Zand BA、Nguyen X、Falck JR、Balu N、Schwartzman ML。细胞色素P450衍生花生四烯酸在大鼠肾脏中的代谢：选择性抑制剂的特性.药理学实验与治疗杂志 284: 966–973, 1998 [公共医学][谷歌学者] 45Wang X、Lou N、Xu Q、Tian GF、Peng WG、Han X、Kang J、Takano T、Nedergaard M。星形细胞钙2+在体感觉刺激诱发的信号.自然神经科学 9: 816–823, 2006 [公共医学][谷歌学者] 46Yamura K、Gebremedhin D、Zhang C、Narayanan J、Hoefert K、Jacobs ER、Koehler RC、Harder DR。环氧乙酸对低氧诱导培养大鼠海马星形胶质细胞Ca（2+）激活的K（+）通道电流激活的作用.神经科学 143: 703–716, 2006 [公共医学][谷歌学者] 47Zonta M、Angulo MC、Gobbo S、Rosengarten B、Hossmann KA、Pozzan T、Carmignoto G。神经元到星形胶质细胞的信号传导是大脑微循环动态控制的核心.自然神经科学 6：2003年43日至50日[公共医学][谷歌学者] 48Zonta M、Sebelin A、Gobbo S、Fellin T、Pozzan T、Carmignoto G。谷氨酸介导的胞浆钙振荡调节培养的大鼠星形胶质细胞搏动性前列腺素释放.生理学杂志 553: 407–414, 2003[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 
