跳到主要内容
访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
基因发育。2001年9月1日；15(17): 2203–2208.
数字对象标识：10.1101/gad.913901
预防性维修识别码：PMC312770型
PMID：11544177

纯合子断裂小鼠的生长迟缓和凋亡增加akt1（akt1）基因

威廉·S·陈,1,6 徐培章,1 凯瑟琳·戈特洛布,1 陈美玲,2 卡伦·索科尔,三 坦尼亚·希亚诺娃,1 伊戈尔·罗宁森,1 魏翁,4 铃木良,5 Kazuyuki Tobe公司,5 Takashi Kadowaki公司,5和尼西姆·海伊1,6
作者信息 文章注释 版权和许可信息 PMC免责声明

摘要

丝氨酸/苏氨酸激酶Akt与细胞存活和代谢的控制有关。这里我们报告了最普遍表达的阿克特基因家族，akt1（akt1），在鼠标中。Akt1公司−/−小白鼠是可以存活的，但与野生型同窝小白鼠相比要小一些。此外，Akt1的寿命−/−暴露在基因毒性应激下的小鼠会变矮。然而，Akt1−/−小鼠没有表现出糖尿病表型。在Akt1中观察到睾丸自发凋亡增加，精子发生减弱−/−雄性小鼠。Akt1胸腺中也观察到自发凋亡增加−/−小鼠和Akt1−/−胸腺细胞对γ射线和地塞米松诱导的凋亡更敏感。最后，Akt1−/−小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）更容易受到TNF、抗Fas、紫外线照射和血清撤除诱导的凋亡。

关键词：γ射线照射、糖耐量、生精小管萎缩、胸腺细胞、小鼠胚胎成纤维细胞

丝氨酸/苏氨酸激酶Akt或蛋白激酶B（PKB）是磷脂酰肌醇3（PI 3）激酶的下游效应器。研究表明，它是多种细胞类型中生长因子依赖性细胞存活的调节剂（有关综述，请参阅Datta等人，1999年;坎德尔和海伊1999). 它还参与执行胰岛素和生长因子的许多代谢功能，如蛋白质和脂质合成、碳水化合物代谢和转录（有关综述，请参阅坎德尔和海伊1999). 由于肿瘤抑制因子PTEN（一种负性调节Akt活化的磷脂磷酸酶）的突变/缺失，Akt的激酶活性在人类癌症中被组成性激活（有关综述，请参阅辛普森和帕森斯2001)，PI3-激酶催化亚基的扩增(Shayesteh等人，1999年)，放大阿克特基因(斯塔尔1987;Cheng等人，1996年;Miwa等人，1996年)，通过激活生长因子受体(Porter和Vaillancourt 1998年;Liu等人，1999年)和激活Ras(向下1998年b).

在哺乳动物细胞中发现了Akt/PKB的三种主要亚型，称为Akt1或PKBα、Akt2/PKBβ和Akt3/PKBγ，它们由三个序列同源性>85%的独立基因编码。假设所有Akt/PKB亚型具有相同或类似的底物特异性（有关综述，请参阅Alessi和Cohen 1998;Coffer等人，1998年;向下1998年a;坎德尔和海伊1999). 在三种Akt亚型中，Akt1是大多数组织中主要表达的亚型。

尽管大量研究表明Akt与哺乳动物细胞生存和代谢相关，但关于Akt在这些过程中的需求，特别是在哺乳动物生物体中的需求的直接遗传证据（除了使用显性-阴性形式的Akt）尚未被记录在案。

结果

akt1基因的靶向性破坏

为了评估Akt1在小鼠中的功能，通过同源重组，通过删除Akt1基因第8外显子至第13外显子，产生Akt1无效突变akt1（akt1）基因（图。​（图1A）。1A） ●●●●。来自三种基因型小鼠的Southern blot分析证实了正确的重组（图。​（图1B）。1B） ●●●●。使用来自三种基因型小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）的蛋白裂解物和Akt1蛋白的两种不同特异性抗体进行的Western blot分析表明，Akt1中未检测到Akt1蛋白质水平−/−MEF（图。​（图1C）。1C） ●●●●。因此，Akt1蛋白的表达被完全阻断。Akt1−/−小鼠（遗传背景50%129 R1和50%C57BL/6+/+)，杂合（Akt1+/−)和纯合子（Akt1−/−)老鼠。然而，与野生型和杂合同窝出生的小鼠相比，Akt1纯合敲除小鼠更小（图。​（图1D）。1D） ●●●●。1个月大的小鼠的体重显示Akt1−/−小鼠比同窝同性野生型和杂合子小鼠小15%–20%(P（P） < 0.01）（图。​（图1E）。1E） ●●●●。Akt1的较小尺寸−/−在不同的遗传背景下也观察到小鼠（50%129 R1和50%CD1；数据未显示）。这种较小的体重似乎在小鼠成年期一直保持不变。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为38423-13f1a_C1TT.jpg
保存图片、插图等的外部文件。对象名为38423-13f1d_C4TT_rev1.jpg
保存图片、插图等的外部文件。对象名为38423-13f1e_L1TT.jpg

Akt1的产生−/−老鼠。(A类)有针对性的中断策略，以删除akt1（akt1）基因。从上到下显示，野生型akt1（akt1）具有指示外显子的等位基因、靶向载体和中断的等位蛋白。用于筛选同源重组的PCR引物的位置用小箭头表示。一条横跨外显子4和5之间区域的短条描述了用作Southern blots DNA探针的DNA片段。(B类)通过Southern blot分析进行小鼠基因分型。从小鼠尾部提取的基因组DNA被消化Nco公司I与跨越外显子4和5之间区域的DNA片段杂交。野生型片段为～10 kb，而删除的片段akt1（akt1）等位基因为～8.5kb。(C类)对从野生型胚胎（+/+）、杂合型（+/-）和纯合突变胚胎（−/-）分离的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）提取的蛋白质进行Western blot分析。(顶部面板）使用Akt1特异性抗体（UBI）对两倍浓度的提取物进行Western blot分析。(底部面板）用Akt1蛋白同源性（PH）域特异性抗体（UBI）进行蛋白质印迹分析。以抗β-肌动蛋白为对照，对斑点进行检测。(D类)来自同一窝友的5周龄小鼠侧视图。显示野生型Akt1（+/+）和Akt1纯合缺失（−/−）小鼠。(E类)野生型（+/+）、杂合型（+/-）和纯合型（−/−）Akt1突变小鼠出生后30天的相对体重。每只老鼠的体重是相对于七窝不同鼠中每一窝性别匹配的野生型鼠友的平均体重来表示的。

缩短Akt1的使用寿命−/−γ射线照射小鼠

分析Akt1的响应−/−在基因毒性应激条件下，对15只不同年龄（1-8月龄）的同窝小鼠（至少包括两种不同基因型）进行γ射线照射（10Gy）。如图所示​图2A，2A、 阿克特1−/−与野生型对照相比，小鼠对γ辐射更敏感，并且Akt1的寿命−/−γ射线照射后小鼠明显变矮。在接受测试的15只同窝熊中，12只Akt1−/−老鼠是第一个死亡的，也是25只Akt1中唯一一只−/−照射后小鼠存活21d。相比之下，30只野生型小鼠中有5只在γ射线照射后存活至少8周（数据未显示）。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为38423-13f2_L1TT_rev1.jpg

(A类)Akt1公司−/−小鼠对基因毒性应激敏感。Akt1的生存+/+和Akt1−/−小鼠在暴露于10Gyγ射线照射后21天进行评分。(B类)口服葡萄糖耐量试验（OGTT）。3个月大的Akt1的血糖水平−/−在口服葡萄糖负荷后15、30、60和120min对雄性小鼠及其野生型同窝小鼠进行测量。数值表示为平均值±SE(n个 = 每个基因型4-6个）。在三个独立的实验中也得到了类似的结果。

Akt1公司−/−小鼠没有表现出糖尿病表型

Akt是胰岛素许多代谢功能的下游效应器。它介导胰岛素诱导的蛋白质合成和糖酵解（有关综述，请参阅坎德尔和海伊1999). 已经证明可以诱导葡萄糖转运蛋白GLUT-1和GLUT-3的表达(Hajduch等人，1998年;Barthel等人，1999年)并诱导GLUT-4转位到质膜(Kohn等人，1996年;Cong等人，1997年;Tanti等人，1997年). Akt还可以通过糖原合成酶激酶3（GSK-3）的磷酸化和失活来调节糖原合成(Cross等人，1995年). 当检测Akt1基因敲除小鼠及其野生型同窝小鼠的血葡萄糖和胰岛素水平时，野生型和Akt1蛋白敲除小鼠的血血糖和胰岛素水平似乎相似（数据未显示）。3个月龄小鼠的糖耐量试验显示野生型和Akt1之间没有任何显著差异−/−鼠标（图。​（图2B）。2B） ●●●●。此外，我们还无法发现野生型和Akt1之间的显著差异−/−小鼠进行胰岛素耐受性试验（数据未显示）。因此，Akt1可能−/−由于三种Akt亚型的冗余功能或Akt2的特殊功能，小鼠没有表现出糖尿病表型，而Akt2在胰岛素应答组织中表达相对较高(Altomare等人，1995年,1998). 事实上，最近已经表明，Akt2−/−小鼠表现出胰岛素抵抗（数据未显示；Cho等人，2001年)并表现出糖尿病表型(Cho等人，2001年).

Akt1睾丸生精功能减退和自发凋亡−/− 老鼠

组织病理学检查显示，野生型Akt1与野生型Akt1在脾脏、骨髓、唾液腺、胰腺、心脏、肺、肾、肾上腺、膀胱、肝、舌、淋巴结、胃、小肠、盲肠、结肠、大脑、脱脂股骨、皮肤、乳房、卵巢和子宫方面无显著差异+/−和Akt1−/−老鼠。然而，定性组织病理学评估显示Akt1的睾丸异常−/−雄性小鼠。在Akt1，早在4周龄时就观察到睾丸小管萎缩和生精小管直径减小−/−男性。在5周大的雄性中，分化生殖细胞的正常层的排列受到干扰，小管中生殖细胞的厚度不均匀（图。​（图3A）。三A） ●●●●。在Akt1的小管中可以识别精原细胞A和B、精原前体精母细胞、粗线期精母细胞和精子细胞−/−睾丸。然而，在Akt1中只发现少数成熟精子−/−小管与野生型和杂合型小管相比。从5周龄开始，在半肾小管的腔室内发现了许多增大的精子细胞，并且在腔中发现了几个多核巨细胞（图。​（图3A，三A、 上部面板）。在野生型和Akt1中很少观察到这些巨细胞+/−6个月龄前的雄性(Takano和Abe 1987; 数据未显示）。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为38423-13f3a_T4TT_rev1.jpg
保存图片、插图等的外部文件。对象名为38423-13f3c_L1TT_rev2.jpg
保存图片、插图等的外部文件。对象名为38423-13f3d_C4TT_rev1.jpg
保存图片、插图等的外部文件。对象名为38423-13f3e_L1TT_rev3.jpg

Akt1小鼠睾丸和胸腺的自发凋亡−/−老鼠。(A类)Akt1睾丸的形态学和组织学+/+和Akt1−/−用4%多聚甲醛固定睾丸，石蜡处理，切片，苏木精/伊红染色。(顶部面板）Akt null的生精小管（−/−）；(底部（200倍放大）野生型（+/+）胎鼠的生精小管。箭头表示多核巨细胞。(B类)来自Akt1的小管自发凋亡−/−老鼠。Akt1肾小管中TUNEL阳性细胞的比较−/−小鼠(顶部面板）和来自野生型同窝交配(底部面板）。细胞核染色较暗的细胞是凋亡细胞（放大200倍）。(C类)Akt1精子计数+/+雄性小鼠(n个 = 8，±SE）和Akt1−/−雄性小鼠(n个 = 10，±SE；P（P） < 0.001）。(D类)在Akt1的整个胸腺中观察到自发凋亡−/−老鼠。对Akt1胸腺切片进行TUNEL分析−/−(顶部面板）和野生型(底部面板）鼠标。细胞核深色的细胞是凋亡细胞。放大倍数，400倍。(E类)年龄匹配（1-2个月龄）、野生型和Akt1胸腺切片中TUNEL阳性细胞测定的凋亡细胞百分比−/−通过计算每个部分的10个字段来测量小鼠(P（P） < 0.001).

为了确定凋亡是否导致睾丸异常，在睾丸切片上进行TUNEL分析。TUNEL阳性细胞核定义的凋亡细胞位于靠近半肾小管基底的外围区域（图。​（图3B）。三B） ●●●●。这些凋亡细胞局限于精原细胞。TUNEL阳性细胞在肾小管中的频率是可变的，但总的来说，Akt1的输精管中凋亡细胞明显增多−/−雄性与野生型和Akt1相比+/−室友。凋亡的定量总结见表​表11是每个基因型至少三只小鼠睾丸切片分析的代表。然而，多核巨细胞不是TUNEL阳性，表明这些细胞没有发生凋亡。如上所述，野生型和Akt1中没有出现巨细胞+/−6个月龄前的小鼠，表明除了细胞凋亡增加外，Akt1的睾丸−/−男性表现出过早衰老的迹象。或者，Akt1的睾丸减数分裂受损−/−在p53水平降低的小鼠中观察到的小鼠(Rotter等人，1993年).

表1

睾丸切片TUNEL阳性细胞的定量

基因型
阳性试管
阳性细胞
负电子管
阳性细胞/试管
阿克特尔+/+16361350.24
阿克特尔−/−2365 520.86

显示细胞凋亡主要局限于生殖细胞的表型与在PI3-激酶调节亚基对接位点突变的干细胞因子/试剂盒受体“敲除”小鼠中观察到的表型相似，尽管不那么严重(Blume Jensen等人，2000年). 研究表明，突变的Kit受体不能激活Akt并促进细胞存活，从而导致生殖细胞死亡(Blume-Jensen等人，2000年). 本文的结果为这一假设提供了直接证据。与Kit受体突变表型不同，Akt1−/−尽管在Akt1中成熟精子细胞的数量减少了两到三倍，但小鼠仍能生育−/−将小鼠与野生型同窝小鼠进行比较（图。​（图3C）。三C） ●●●●。Akt1缺失小鼠的表型不如Kit受体突变表型严重，这可能是因为其他Akt亚型在睾丸中的表达。

Akt1胸腺的自发凋亡−/− 老鼠

对包括脾、胰腺、胸腺、心脏和大脑在内的其他组织切片进行TUNEL分析，以确定自发凋亡。4~8周龄Akt1的胸腺中发现自发凋亡显著增加−/−老鼠。在Akt1的整个胸腺中观察到自发凋亡−/−将小鼠与同窝野生型小鼠的胸腺进行比较（图。​（图3D）。三D） ●●●●。凋亡定量显示Akt1胸腺中的凋亡细胞大约增加了两到三倍−/−鼠标（图。​（图3E）。三E） ●●●●。相反，当在同窝婴儿的脾脏切片中进行TUNEL分析时，在Akt1之间未观察到可检测到的差异−/−和野生型脾脏（数据未显示）。在所有其他检查组织中未观察到明显的凋亡增加。

Akt1公司−/−胸腺细胞和MEF更容易发生凋亡

来自Akt1的胸腺细胞−/−进一步检查小鼠对γ射线照射和地塞米松的反应。暴露于γ射线和地塞米松后，野生型胸腺细胞发生凋亡。这两种细胞凋亡刺激通过两种不同的机制起作用，p53缺失可保护γ射线照射而非地塞米松诱导的细胞凋亡(Clarke等人，1993年;Lowe等人，1993年). 当来自野生型和Akt1的胸腺细胞−/−培养小鼠后，它们的存活率没有显著差异（图。​（图4A）。4A） ●●●●。然而，来自Akt1的胸腺细胞−/−与野生型胸腺细胞相比，小鼠对γ射线和地塞米松治疗更敏感（图。​（图4B、C）。4B、 C）。这与最近的一项观察结果一致，该观察结果表明，靶向转基因小鼠胸腺细胞的活化Akt在暴露于γ射线和地塞米松后具有生存优势(Jones等人，2000年).

保存图片、插图等的外部文件。对象名为38423-13f4_F1TT.jpg

Akt1公司−/−胸腺细胞和MEF更容易发生凋亡。(A类)未经治疗的胸腺细胞存活率。(B类)γ射线照射（500 rad）后胸腺细胞存活率。(C类)胸腺细胞在用1μM地塞米松治疗后的存活率。数值代表来自每种基因型的三只小鼠的胸腺细胞的四个独立实验的平均值（±SE）。（）野生型胸腺细胞的存活率；（□）Akt1存活率−/−用台盼蓝排斥法测定胸腺细胞。(D类)Akt1公司−/−MEF通过各种凋亡刺激对凋亡敏感。来自Akt1的MEF+/+、Akt1+/−和Akt1−/−用1μg/mL抗Fas抗体（Pharmingen）、10 ng/mL TNFα（Life Technologies）、5μg/mL环己酰亚胺CHX（Sigma）、紫外线照射（60或120 J/m）处理胚胎2)在培养基中存在（20%FCS）或不存在（0%FCS）胎牛血清的情况下，在治疗24小时后定量细胞凋亡。仅通过血清剥夺（0%FCS）诱导的细胞凋亡在血清剥夺后48小时进行定量。细胞死亡检测ELISA法（Boehringer-Mannheim）通过DNA片段定量测定细胞凋亡。显示了3个独立实验的平均值（±SE）（*，P（P） < 0.01; **,P（P） < 0.05).

由于Akt1是MEF中主要表达的Akt亚型（数据未显示），MEF来源于Akt1−/−小鼠受到各种凋亡刺激。如图所示​图4D，4D、 Akt1公司−/−MEF明显更容易受到抗Fas、肿瘤坏死因子（TNF）、紫外线（UV）照射和血清撤药诱导的凋亡。根据凋亡刺激，Akt1−/−与野生型MEF相比，MEF显示DNA片段增加了两到三倍，表明Akt1基因敲除使细胞对凋亡敏感。因此，Akt对死亡受体和非死亡受体介导的凋亡提供保护。这与PTEN的观察结果一致−/−MEF对死亡受体和非死亡受体介导的凋亡都有更强的抵抗力(Stambolic等人，1998年).

讨论

Akt1相对微妙的表型−/−小鼠表明，Akt2和Akt3可能在一定程度上替代Akt1，正如在秀丽隐杆线虫(Paradis和Ruvkun 1998). 由于Akt2和Akt3在睾丸和胸腺中均表达，因此尚不清楚为什么只有这些特定器官受到Akt1消融的影响。一种可能性是生殖细胞和胸腺细胞完全依赖Akt生存，因此即使Akt活性阈值降低也足以影响其生存。或者，尽管这些器官中其他Akt亚型的表达水平相似，但Akt1在这些器官的细胞中被更深刻地激活，并且/或者在这些细胞中可能有专属的蛋白底物。进一步研究，包括删除akt2型和akt3号机组需要基因来验证这些可能性。

在果蝇属，PTEN/PI3-激酶/Akt信号通路与细胞存活、生物体大小、代谢和Akt基因的破坏有关果蝇属胚胎发生过程中受损的正常细胞存活，并导致细胞大小减小(Goberdhan等人，1999年;Huang等人，1999年;Verdu等人，1999年;Gao等人，2000年;Scanga等人，2000年). The disruption of theakt-1型虽然小鼠中的基因本身并不影响胚胎发生，但在成年小鼠中，该基因会影响细胞存活、有机体大小和生长迟缓。必须看到三者的联合破坏阿克特由于胚胎发生期间细胞存活受损，小鼠体内的基因将导致胚胎死亡。

令人惊讶的是，尽管Akt有多个下游效应物和Akt1的普遍表达，但Akt1的消融本身并没有产生明显的表型影响。该观察结果表明，Akt活性的阈值水平降低是可以耐受的，因此，旨在降低Akt活动的小分子可能是治疗PI 3-激酶/Akt通路组成性激活的癌症的极好的治疗方案。

材料和方法

基因打靶与纯合突变小鼠的产生

靶向载体包含来自pPNT的新基因盒(Tybulewicz等人，1991年)作为阳性选择标记，白喉毒素基因盒作为阴性选择标记进入不是1矢量位置。小鼠第13外显子3′非翻译区的一个片段akt1（akt1）该基因用于从Stratagene中筛选129个基因组文库。一个隔离的8-kb千磅来自3′端非编码区的I片段akt1（akt1）然后基因被用作长臂并被插入千磅I目标载体的位置。用5′-GTAGAGGTTGCCACACGCTTAC-3′和5′-CTCGCCCCGTTGGCATACTC-3′寡核苷酸分离出一个1.0kb的片段，该片段包含akt1（akt1）作为短手臂。该片段被插入Hin公司dIII型/不是I靶向载体的位点。通过消化使靶向载体线性化克拉I、 并电穿孔到R1胚胎干细胞（ES）中。通过PCR初步筛选G418抗性克隆。基因组DNA经酶切后，扩增两个阳性克隆进行Southern blot分析Nco公司I.使用外部探针（使用寡聚引物5′-CACCGCCCATTCAGACTGTG-3′和5′-CAGGTACTCAACTCGTTCATGG-3′分离的外显子4和5之间的DNA片段）和内部探针验证正确的靶向性。所有PCR片段均经测序证实。将两个阳性ES-cell克隆注射到C57BL/6J囊胚中。来自这些克隆的嵌合体通过生殖系传播。将杂合小鼠进行杂交，获得纯合小鼠。通过Southern blot分析确认小鼠的基因型。

γ-辐射与小鼠存活

15个室友，包括30 Akt1+/+小鼠和25 Akt1−/−1–8个月大的小鼠在137Cs辐照器。对小鼠存活8周进行评分。

MEF、胸腺细胞和脾T细胞的分离

从杂合Akt1小鼠交配的14.5天龄胚胎中分离出MEF，并在检测前扩增两代。将胸腺或脾脏轻轻压在两个无菌载玻片之间，制备胸腺细胞和脾脏T细胞，然后用PBS在冷Hank’s平衡盐溶液（HBSS）中洗涤，并将其重新悬浮在含有15%胎牛血清（FCS）和50μMβ-巯基乙醇的Iscove改良Dulbecco培养基（IMDM）中，温度为106细胞/mL。

蛋白质分析

如前所述进行Western blot分析(Kennedy等人，1997年). 来自野生型Akt1 MEF的蛋白质提取物+/−和Akt1−/−使用Upstate Biotechnology的抗Akt1抗体（目录号06-558）和抗Akt1PH域抗体（目录编号06-608）进行Western blot分析。

TUNEL和凋亡分析

组织被解剖并固定在4%多聚甲醛中过夜，脱水，并包埋在石蜡中，然后进行TUNEL分析。如前所述，根据Boehringer Mannheim的原位细胞死亡检测说明进行TUNEL分析(Chen等人，1994年). 为了定量睾丸细胞凋亡，对来自不同基因型小鼠和同一窝小鼠的睾丸切片进行TUNEL分析。测定TUNEL阳性和TUNEL阴性小管的数量，并计算每个小管中TUNEL的阳性细胞数。为了定量胸腺的凋亡，胸腺切片取自不同基因型和同一窝友的小鼠。TUNEL阳性细胞的百分比通过从每个部分的10个随机字段中计数阳性和阴性细胞来确定。使用了10个字段的平均值，标准偏差（SD）也来自于这10个字段。为了确定培养的胸腺细胞的存活率，胸腺细胞用500 radγ射线照射或用1μM地塞米松处理，然后在106细胞/mL，放在96 well板上，IMDM中含有15%FCS和50μMβ-巯基乙醇。在不同时间点通过锥虫蓝排除法测定细胞活力。用不同的凋亡刺激物（1 mg/mL抗Fas抗体、10 ng/mL TNFα、5μg/mL环己酰亚胺、60或120 J/mL2紫外线照射，DME中0%FCS）。每3厘米板允许约100000个细胞附着36小时。在诱导细胞凋亡后，在处理后24小时收获漂浮和附着的细胞，但在血清剥夺后48小时收获的血清剥夺细胞除外。将细胞在室温下裂解30分钟，并将这些提取物的稀释液用于根据制造商的方案（Boehringer Mannheim）进行的细胞死亡ELISA。P（P）通过配对确定值吨-测试。

精子计数

从动物身上解剖睾丸并保存在PBS中。使用小型解剖剪刀打开并释放睾丸中的精子。精子在显微镜下计数（仅包括14-16期）。

口服葡萄糖耐量试验

如前所述进行口服葡萄糖耐量试验(Tamemoto等人，1994年).

致谢

这项工作得到了美国陆军医学研究与装备司令部DAMD17-96-1-6051向W.C.提供的资助，以及NIH向N.H.提供的AG 16927和CA 90764资助。

这篇文章的出版费用部分由页面费支付。因此，根据《美国法典》第18卷第1734节，本篇文章必须标记为“广告”，以表明这一事实。

脚注

电子邮件乌德·丘@亚恩; 传真（312）355-2032。

电子邮件moc.liamtoh@nehcsyllib公司。

文章和出版物见www.genesdev.org/cgi/doi/10.1101/gad.913901。

工具书类

  • Alessi DR，Cohen P.蛋白激酶B的激活机制和功能。当前操作基因开发。1998;8:55–62.[公共医学][谷歌学者]
  • Altomare DA，Guo K，Cheng JQ，Sonoda G，Walsh K，Testa JR。小鼠Akt2癌基因的克隆、染色体定位和表达分析。致癌物。1995;11:1055–1060.[公共医学][谷歌学者]
  • Altomare DA、Lyons GE、Mitsuuchi Y、Cheng JQ、Testa JR。Akt2 mRNA在胚胎棕色脂肪中高度表达，Akt2激酶被胰岛素激活。致癌物。1998;116:2407–2411.[公共医学][谷歌学者]
  • Barthel A、Okino ST、Liao J、Nakatani K、Li J、Whitlock J，Jr、Roth RA。丝氨酸/苏氨酸激酶Akt1对GLUT1基因转录的调节。生物化学杂志。1999;274:20281–20286.[公共医学][谷歌学者]
  • Blume-Jensen P，Jiang G，Hyman R，Lee KF，O'Gorman S，Hunter T.Kit/干细胞因子受体诱导的磷脂酰肌醇3′-激酶活化对男性生育至关重要。自然遗传学。2000;24:157–162.[公共医学][谷歌学者]
  • Chen WS，Manova K，Weinstein DC，Duncan SA，Plump AS，Prezioso VR，Bachvarova RF，Darnell JE.，Jr内脏内胚层表达的HNF-4基因被破坏，导致胚胎外胚层细胞死亡和小鼠胚胎原肠形成受损。基因与发育。1994;8:2466–2477.[公共医学][谷歌学者]
  • Cheng JQ，Ruggeri B，Klein WM，Sonoda G，Altomare DA，Watson DK，Testa JR。人胰腺细胞中AKT2的扩增以及反义RNA对AKT2表达和致瘤性的抑制。国家科学院院刊。1996;93:3636–3641. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Cho H、Mu J、Kim JK、Thorvaldsen JL、Chu Q、Crenshaw EB、III、Kaestner KH、Bartolomei MS、Shulman GI、Birnbaum MJ。缺乏蛋白激酶Akt2（PKBβ）小鼠的胰岛素抵抗和糖尿病-蜂窝织炎样综合征科学。2001;292:1728–1731.[公共医学][谷歌学者]
  • Clarke AR、Purdie CA、Harrison DJ、Morris RG、Bird CC、Hooper ML、Wyllie AH。p53依赖和独立途径诱导胸腺细胞凋亡。自然。1993;362:849–852.[公共医学][谷歌学者]
  • Coffer PJ，Jin J，Woodgett JR。蛋白激酶B（c-Akt）：磷脂酰肌醇3-激酶激活的多功能介质。生物化学杂志。1998;335:1–13. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 丛林、陈浩、李毅、周立、麦吉本·马萨诸塞、泰勒·SI、Quon MJ。Akt在转染的大鼠脂肪细胞中胰岛素刺激的GLUT4易位中的生理作用。摩尔内分泌学。1997;11：1881年至1890年。[公共医学][谷歌学者]
  • Cross DA，Aless DR，Cohen P，Andjelkovich M，Hemmings BA。通过蛋白激酶B介导的胰岛素抑制糖原合成酶激酶-3。自然。1995;378:785–789.[公共医学][谷歌学者]
  • Datta SR、Brunet A、Greenberg ME，《细胞生存：三个Akts中的游戏》。基因与发育。1999;13:2905–2927.[公共医学][谷歌学者]
  • 向下J.蛋白激酶B/Akt激活的机制和后果。当前操作细胞生物学。1998年a；10:262–267.[公共医学][谷歌学者]
  • -----Ras信号与凋亡。当前操作基因开发。1998年b；8:49–54.[公共医学][谷歌学者]
  • Gao X、Neufeld TP、Pan D。果蝇属PTEN通过PI3K依赖和非依赖途径调节细胞生长和增殖。开发生物。2000;221:404–418.[公共医学][谷歌学者]
  • Goberdhan DC、Paricio N、Goodman EC、Mlodzik M、Wilson C。果蝇属肿瘤抑制因子PTEN通过拮抗Chico/PI3-激酶信号通路控制细胞大小和数量。基因与发育。1999;13:3244–3258. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Hajduch E、Alessi DR、Hemmings BA、Hundal HS。通过膜靶向对蛋白激酶Bα的组成性激活促进L6肌肉细胞中葡萄糖和系统A氨基酸的转运、蛋白质合成和糖原合成酶激酶3的失活。糖尿病。1998;47:1006–1013.[公共医学][谷歌学者]
  • Huang H，Potter CJ，Tao W，Li DM，Brogiolo W，Hafen E，Sun H，Xu T.PTEN影响细胞大小、细胞增殖和凋亡果蝇属眼睛发育。发展。1999;126:5365–5372.[公共医学][谷歌学者]
  • Jones RG、Parsons M、Bonnard M、Chan VS、Yeh WC、Woodgett JR、Ohashi PS。蛋白激酶B调节体内T淋巴细胞存活、核因子κB活化和Bcl-X（L）水平。《实验医学杂志》。2000;191:1721–1734. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Kandel ES，Hay N.多功能丝氨酸/苏氨酸激酶Akt/PKB的调节和活性。实验细胞研究。1999;253:210–229.[公共医学][谷歌学者]
  • Kennedy SG、Wagner AJ、Conzen SD、Jordan J、Bellacosa A、Tsichlis PN、Hay N。PI 3-激酶/Akt信号通路传递抗凋亡信号。基因与发育。1997;11:701–713.[公共医学][谷歌学者]
  • Kohn AD、Summers SA、Birnbaum MJ、Roth RA。组成活性Akt-Ser/Thr激酶在3T3-L1脂肪细胞中的表达刺激葡萄糖摄取和葡萄糖转运蛋白4移位。生物化学杂志。1996;271:31372–31378.[公共医学][谷歌学者]
  • Liu W、Li J、Roth RA。乳腺癌细胞中Akt/蛋白激酶B的Heregulin调节。生物化学与生物物理研究委员会。1999;261:897–903.[公共医学][谷歌学者]
  • Lowe SW、Schmitt EM、Smith SW，Osborne BA、Jacks T.小鼠胸腺细胞的辐射诱导凋亡需要p53。自然。1993;362:847–849.[公共医学][谷歌学者]
  • Miwa W、Yasuda J、Murakami Y、Yashima K、Sugano K、Sekine T、Kono A、Egawa S、Yamaguchi K、Hayashizaki Y等。人类胰腺癌19q13.1–q13.2染色体扩增DNA序列的分离，包括AKT2基因座。生物化学与生物物理研究委员会。1996;225：968–974。[公共医学][谷歌学者]
  • Paradis S、Ruvkun G。秀丽隐杆线虫Akt/PKB将胰岛素受体样信号从AGE-1 PI3激酶转导到DAF-16转录因子。基因与发育。1998;12:2488–2498. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Porter AC，Vaillancourt RR。酪氨酸激酶受体激活导致肿瘤发生的信号转导途径。致癌物。1998;17:1343–1352.[公共医学][谷歌学者]
  • Rotter V、Schwartz D、Almon E、Goldfinger N、Kapon A、Meshorer A、Donehower LA、Levine AJ。p53蛋白水平降低的小鼠表现出睾丸巨细胞变性综合征。国家科学院院刊。1993;90:9075–9079. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Scanga SE、Ruel L、Binari RC、Snow B、Stambolic V、Bouchard D、Peters M、Calvieri B、Mak TW、Woodgett JR等。保守的PI3′K/PTEN/Akt信号通路调节细胞大小和存活果蝇。 致癌物。2000;19:3971–3977.[公共医学][谷歌学者]
  • Shayesteh L、Lu Y、Kuo WL、Baldocchi R、Godfrey T、Collins C、Pinkel D、Powell B、Mills GB、Gray JW。PIK3CA被认为是卵巢癌的癌基因。自然遗传学。1999;21:99–102.[公共医学][谷歌学者]
  • Simpson L，Parsons R.PTEN：作为肿瘤抑制剂的生活。实验细胞研究。2001;264:29–41.[公共医学][谷歌学者]
  • Staal SP.的分子克隆阿克特癌基因及其人类同源物AKT1和AKT2：原发性人类胃腺癌中AKT1的扩增。国家科学院院刊。1987;84:5034–5037. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Stambolic V、Suzuki A、de la Pompa JL、Brothers GM、Mirtsos C、Sasaki T、Ruland J、Penninger JM、Siderovski DP、Mak TW。肿瘤抑制剂PTEN对PKB/Akt依赖细胞存活的负调控。单元格。1998;95:29–39.[公共医学][谷歌学者]
  • Takano H，Abe K。成年小鼠睾丸中与年龄相关的组织学变化。Arch Histor Jpn.建筑史。1987;50:533–544.[公共医学][谷歌学者]
  • Tamemoto H、Kadowaki T、Tobe K、Yagi T、Sakura H、Hayakawa T、Terauchi Y、Ueki K、Kaburagi Y、Satoh S等。缺乏胰岛素受体底物-1小鼠的胰岛素抵抗和生长迟缓。自然。1994;372:182–186.[公共医学][谷歌学者]
  • Tanti JF、Grillo S、Gremeaux T、Coffer PJ、Van Obberghen E、Le Marchand-Brustel Y。蛋白激酶B在脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4移位中的潜在作用。内分泌学。1997;138:2005–2010.[公共医学][谷歌学者]
  • Tybulewicz VL、Crawford CE、Jackson PK、Bronson RT、Mulligan RC。c-abl原癌基因纯合性破坏小鼠的新生儿死亡率和淋巴细胞减少。单元格。1991;65:1153–1163.[公共医学][谷歌学者]
  • Verdu J、Buratovich MA、Wilder EL、Birnbaum MJ。细胞和器官生长的细胞自主调节果蝇属由Akt/PKB提供。自然细胞生物学。1999;1:500–506.[公共医学][谷歌学者]
文章来自基因与发育由以下人员提供冷泉港实验室出版社