血管内皮生长因子（VEGF）或胎盘生长因子（肿瘤血管生成的关键调节因子）等分子也被认为能动员骨髓源细胞（BMDC）进入血液循环1，随后可能被用于肿瘤并促进肿瘤生长和转移2,三.一项研究4研究表明，骨髓间充质干细胞在癌细胞到达之前在肺部形成“转移壁龛”，并表明，对血管内皮生长因子受体1（VEGFR1，也称为Flt1）的药理抑制（VEGF和胎盘生长因子的同源受体）可预防骨髓间充质干细胞在肺部的浸润和“转移壁橱”的形成。在此，我们报告在临床相关和广泛使用的临床前模型中，阻断VEGFR1活性并不影响自发转移形成的速率5–8因此，替代途径可能介导组织转移的启动。
我们评估了VEGFR1活性在药物（使用MF1阻断抗体）抑制VEGFR1后自发形成宏观转移中的作用。我们用Actb-GFP/C57BL小鼠（BMT-Actb--GFP/C57BL小鼠）的细胞进行致死照射和恢复性骨髓移植（BMT），生成嵌合体C57BL-小鼠，其中BMDCs表达绿色荧光蛋白（GFP）。骨髓重建后，我们皮下植入Lewis肺癌（LLC1/LL2，一种富含骨髓间充质干细胞的肿瘤）或B16黑色素瘤（一种BMDCs明显较少的肿瘤）。与非特异性IgG相比，MF1的持续治疗并没有延迟原发性肿瘤的生长。此外，MF1治疗并没有减少LLC1或B16肿瘤的BMDC浸润(). 当肿瘤直径增长到1厘米时（15至17天后），肺部已经形成转移灶，我们就切除了这些肿瘤5,6由于在原发性肿瘤切除时未发现肉眼可见的转移，我们测量了BMT-Actb-GFP/C57BL小鼠肉眼可见转移形成前后肺部的BMDC数量。切除时（第0天）和第10天的BMDC浸润相对较小，但容易检测到，并且在两种肿瘤模型中，与无瘤BMT-Actb-GFP/C57BL小鼠的BMDC总累积量相当().
阻断VEGFR1活性对肿瘤和转移性肺组织BMDC积聚的影响BMDC的数量按GFP表面积与DAPI表面积之比（±s.e.m.）计算。DAPI染色所有细胞的细胞核(n个=每组6-8只小鼠）*P（P）< 0.05.
这表明激活的肺泡巨噬细胞（BMDC）在无瘤非BMT C57BL小鼠的正常肺中具有关键作用，BMDC的数量与从头开始的自发转移前BMDC募集。当大多数小鼠自发发生宏观转移（第14天）时，我们检测到从头开始的骨髓间充质干细胞在LLC1转移性结节和癌旁肺组织中积聚，但在B16转移性肿瘤中没有，类似于这些模型中原发性肿瘤中的骨髓间充质干细胞掺入(). 用MF1阻断VEGFR1可显著减少LLC1转移瘤的BMDC积聚。令人惊讶的是，与对照组小鼠相比，VEGFR1阻断并没有减少LLC1或B16切除后第14天自发肺转移的发生率、数量、大小或总负担().
表1
| 肿瘤/模型 | BMT-Actb-GFP/C57BL
| C57BL | flt1（飞行时间1）TK−/−/C57毫升 |
|---|
| MF1型 | 免疫球蛋白G |
|---|
| 有限责任公司1 | 小鼠数量 | 9/9 (100%) | 8/8 (100%) | 6/8 (75%) | 12/13 (92%) |
| 有限责任公司1 | 结节数量 | 13 ± 4 | 15 ± 6 | 10 ± 4 | 12 ± 4 |
| P（P）价值 | | 0.41 | 0.32 |
| 第16页 | 小鼠数量 | 9/12 (75%) | 9/13 (69%) | 6/8 (75%) | 7/14 (50%) |
| B16类 | 结节数量 | 9 ± 4 | 6 ± 2 | 2±1 | 3 ± 2 |
| P（P）价值 | | 0.21 | 0.32 |
VEGFR1-酪氨酸激酶结构域基因缺陷小鼠的先前研究(flt1（飞行时间1）TK−/−小鼠）已经表明，MMP-9是由肺基质细胞中VEGFR1信号传导诱导的，这有助于实验性转移模型中转移瘤的生长（即静脉输注癌细胞后）9.在中测试时飞行时间1TK−/−/C57BL小鼠，LLC1生长相似，B16生长略迟于C57BL-小鼠。然而，在第14天评估时，自发宏观肺转移的小鼠数量或转移结节的数量没有显著差异(). CD11b（Mac1）在这些小鼠的正常肺和转移肺中的免疫染色显示，在flt1（飞行时间1）TK−/−/C57BL和C57BL-小鼠。最后，由于VEGFR1的胞外结构域存在于flt1（飞行时间1）TK−/−/C57BL小鼠，我们用流式细胞术测定VEGFR1的数量+循环血液和肿瘤组织中的细胞。我们检测到循环中的VEGFR1没有显著差异+LLC1-或B16-burded小鼠或组织内VEGFR1中的细胞+正常肺或LLC1肿瘤中的细胞，而B16肿瘤中只有边际差异10。
总之，VEGFR1在一些模型中调节BMDC浸润和原发性/转移性肿瘤生长，与以前的报道一致11然而，在这些模型中，细胞内VEGFR1-TK结构域的药物阻断或基因缺陷既没有根除也没有显著改变转移前BMDC浸润或早期肺部自发转移形成。
方法
飞行高度1TK−/−/C57BL（重新衍生自flt1（飞行时间1）TK−/−老鼠10,12由东京大学的M.Shibuya和Actb-GFP/C57BL小鼠（Jackson Labs）、C57BL-小鼠-同基因LLC1肺癌（CRL-1642）和B16黑色素瘤细胞系（CRL-6323）（均为ATCC）善意提供，BMT和自发转移形成模型，共聚焦显微镜和流式细胞术分析已在之前进行过描述5,10,12我们使用Matlab软件进行量化。腹膜内给予大鼠抗VEGFR1单克隆抗体（MF1，来自ImClone Systems的礼物）或IgG（Jackson Labs）（20或40 mg/kg−1)每周给荷瘤小鼠三次13我们使用Alexa-Fluro-647（分子探针）标记的MF1进行流式细胞术。所有其他抗体均购自BD-Pharmingen。
