腺苷与钾的相互作用⁺体感激活与软脑膜小动脉扩张耦合中的通道相关通路

摘要

神经血管耦合通常被定义为与局部神经元（突触）激活相关的脑血流动力学变化。在大脑中，突触活动增强导致激活神经元附近的实质小动脉扩张，并传递涉及星形胶质细胞的血管扩张信号(12,13,29). 在大脑皮层，星形细胞的影响似乎还包括软脑膜小动脉的上游扩张，从而使更多的血液到达位于激活神经元附近的扩张的下游薄壁小动脉段(34,35). 作为这种现象的一个主要例子，躯体感觉激活范式坐骨神经刺激（SNS）导致覆盖躯体感觉皮层后肢区域的软脑膜小动脉迅速扩张(18,30,35). 尽管从底层神经元到软脑膜小动脉通常没有直接接触，但仍会发生这种情况。上游扩张过程也发生在外周血管床中，涉及血管肌内皮通路的信号传导(8). 相反，内皮似乎不参与SNS诱发的软脑膜小动脉扩张(35).

我们实验室的最新发现表明，星形胶质细胞和胶质细胞界限蛋白在发出SNS后软脑膜小动脉扩张的信号中起着重要作用(35). 此外，初步研究结果揭示了大电导率钙的重要作用²⁺-操作K⁺（黑色_钙)通道和向内整流器K⁺（K）_红外)SNS相关软脑膜小动脉扩张过程中的通道(25,37). 基于脑切片和最近在体内的研究结果(5,6)，据认为，神经元活动增加会导致细胞内钙的增加²⁺在附近的星形胶质细胞中可能扩散到其他星形胶质细胞，最终促进BK的开放_钙星形细胞端足上的通道(27)与小动脉接触。K系列⁺通过这些BK释放到细胞外空间_钙通道可以与K交互_红外小动脉平滑肌上的通道，通向平滑肌细胞K⁺流出、超极化和松弛。也有人推测，细胞间钙²⁺“波”可能与ATP释放到细胞外空间有关。细胞外ATP可以与邻近星形胶质细胞上的代谢性嘌呤能受体相互作用，产生Ca²⁺储存释放（和钙的传播²⁺wave）或通过外核苷酸酶水解为腺苷（Ado）(36). 据Meno等人报道，在这一过程中形成的Ado似乎在SNS诱导的软脑膜小动脉扩张中起主要作用(18)他发现，在选择性Ado a存在的情况下，血管舒张反应被显著抑制₂受体阻滞剂，ZM-241385。

然而，Ado-和K中存在大量重叠⁺上述研究表明，SNS引起的软脑膜小动脉反应与通道相关。这让我们怀疑Ado和K之间的互动⁺通道参与SNS诱导的软脑膜小动脉舒张。腺苷诱导的软脑膜小动脉扩张归因于G的激活_秒-连接平滑肌Ado A₂受体（参见参考。12). 已知这些受体与腺苷酸环化酶（AC）激活和cAMP生成增加有关。此外，通过激活PKA增加cAMP与增强BK功能有关_钙和K_红外血管平滑肌细胞上的通道（有关综述，请参阅参考文献。11).

基于上述考虑，我们最初假设并随后证实，暴露于选择性阻滞剂A₂受体（ZM-241385），K_红外通道（BaCl₂)、和BK_钙在SNS诱导的软脑膜小动脉扩张中，通道（帕西林）与非加性（重叠）衰减相关。两个K的贡献可能重叠⁺这些通道至少在一定程度上与最近的发现有关，这些发现表明星形细胞终足BK具有耦合作用_钙经络与平滑肌K_红外通道(5,6)在脑小动脉的神经诱发扩张中。因此，在本研究的背景下，BK的开放_钙胶质细胞界限内的通道释放K⁺到细胞外空间。那个K⁺然后增加K的电导率_红外软脑膜小动脉平滑肌上的经脉，促进血管舒张。该模型有利于K的分离_红外和BK_钙分别通向软脑膜血管平滑肌和神经胶质界区的通道。因此，基于这种模型，设计了实验来解决以下假设：1)巴²⁺-K的相关封锁_红外通道不仅会衰减K⁺-诱导的软脑膜小动脉扩张和SNS诱导的扩张，以及（在静息状态下）BK_钙激动剂诱导的扩张；2)相反，BK_钙在没有SNS的情况下，封锁可能对K的影响很小或没有影响⁺-诱导（K_红外通道介导）软脑膜小动脉松弛；和三)使用已建立的技术选择性消融胶质细胞界限(34,35)根据上述K，我们预计_红外/BK公司_钙通道“分离模型”，即BK_钙通道开放诱导的舒张功能会受损，而K⁺反应不会受到影响。本次调查中提出的最后一个假设是A之间的重叠₂受体，BK_钙通道和K_红外SNS的通道阻断效应也是a的函数₂受体相关的AC激活和随后的PKA介导的BK磷酸化_钙和/或K_红外从而增强这些通道的血管舒张功能。为此，我们研究了PKA和AC阻断对SNS-、Ado-、K的影响⁺-、和BK_钙开放性软脑膜小动脉扩张。

方法

动物程序由伊利诺伊大学（伊利诺伊州芝加哥）动物护理和使用委员会批准。本研究使用雌性Sprague-Dawley大鼠（250–300 g）。

结果

在所有实验中，生理变量都在正常范围内。因此，动脉Po个₂所有受试大鼠的血压值均保持在100 mmHg以上，而动脉压有限公司₂在实验过程中，pH值和平均动脉压分别为32–40 mmHg、7.35–7.45和100–130 mmHg。比较各组的初始值和最终值时，未观察到显著差异。

Ado、BK的参与_钙通道和K_红外SNS诱导的软脑膜小动脉扩张。

SNS伴有软脑膜小动脉快速扩张，峰值增加（无药aCSF存在时直径比基线值增加31.9±1.8%；图1)发生在SNS发病后约30秒。这种反应是可逆的和可重复的，因为重复接触SNS（时间控制）会引起几乎相同的血管舒张。局部应用ZM-241385、AOPCP、BaCl后，观察到小动脉对SNS的反应显著降低₂和paxilline(图1). 抑制因子对SNS相关软脑膜小动脉反应的影响程度相似，在单独测试四种药物的情况下检测SNS反应时，对照反应的降低幅度为55%至64%(图1). 这些结果表明，Ado，K_红外通道和BK_钙在SNS期间，这些通道对软脑膜小动脉扩张无额外作用。在联合应用抑制剂的情况下，SNS诱发的软脑膜小动脉扩张的损失有限或没有进一步的损失，这一结论得到了进一步的证实(图1). 在SNS期间，在没有上述阻滞剂的情况下和在有上述阻滞物的情况下记录的N1P1振幅差异在幅度上几乎相同（数据未显示）。其他(16,18)至少在ZM-241385和BaCl方面报告了类似的发现₂.

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图1。

坐骨神经刺激（SNS）诱导软脑膜小动脉扩张₂受体阻滞剂ZM-241385（10μM）、外-5′-核苷酸酶抑制剂α、β-亚甲基腺苷二磷酸（AOPCP；300μM）和内向整流因子K⁺（K）_红外)通道阻滞剂BaCl₂（100μM）和大电导率Ca²⁺-操作K⁺（黑色_钙)通道阻滞剂帕罗西林（10μM）。ZM-241385、帕西林和/或BaCl的成对渗出作用₂也进行了评估。软脑膜小动脉反应表示为基线直径值的百分比变化。对于每种测试药物（或组合），测量软脑膜小动脉对SNS的初始反应。然后，在灌流阻滞剂45分钟后获得第二次反应。发现每个亚组的初始值在统计学上没有差异，因此将其分组在一起（初始n个=40）。数值为平均值±SE；n个药物治疗组的数值如下：ZM-241386，n个= 6; AOPCP、，n个= 5; 氯化钡₂,n个= 6; 帕罗西林，n个= 9; ZM-241385+帕罗西林，n个= 6; ZM-241385+氯化钡₂,n个= 5; 和paxilline+BaCl₂,n个= 4. *P（P）与初始值相比<0.05。

K的影响_红外通道，黑色_钙通道或A₂K受体阻断⁺-、NS-1619-和Ado诱导的扩张。

Ado（10和100μM）、NS-1619（10和50μM）和KCl（6和12 mM₂(图2). 另一方面，10μM帕西林的充盈减弱了选择性BK诱导的扩张_钙通道开启器NS-1619。然而，Ado和KCl反应性没有改变(图3). 同样，在A在场的情况下₂拮抗剂ZM-241385（10μM），如人们所料，Ado诱导的舒张功能几乎消失，而KCl和NS-1619诱发的舒张功能没有显著改变(图4). 这些发现表明K_红外通道激活是软脑膜小动脉扩张的重要组成部分，在Ado增加和BK激活时发生_钙频道。随后的研究结果（见下文）表明，Ado的增强作用可能来自PKA相关的磷酸化，可能以K为靶点_红外（可能还有BK_钙)频道。另一方面，Ado的损失（A₂)例如，在SNS期间，受体功能仅影响与Ado增加相关的扩张（参见图1)和Ado的局部应用(图4).

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图2。

选择性钾的影响_红外通道阻滞剂BaCl₂（100μM）对选择性钾诱导的软脑膜小动脉扩张_红外通道开放剂KCl（6和12 mM）、腺苷（Ado；10和100μM）和选择性BK_钙通道开启器NS-1619（10，50μM）。开放条形和实心条形表示在不存在和存在BaCl的情况下的小动脉反应₂分别为。数值为平均值±SE；n个=6只大鼠/组*P（P）与初始值相比<0.05。

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图3。

BK的影响_钙NS-1619（10和50μM）诱导、Ado（10和100μM）和KCl（6和12 mM）诱导的软脑膜小动脉扩张上的通道阻滞剂帕西林（10μM）。开条和实心条分别表示在没有和存在帕罗西林的情况下的小动脉反应。数值为平均值±SE；n个=6只大鼠/组*P（P）与初始值相比<0.05。

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图4。

选择性A的影响₂受体拮抗剂ZM-241385（10μM）对Ado（10和100μM）诱导的软脑膜小动脉扩张的影响_红外通道开启器KCl（6和12 mM）和选择性BK_钙通道开启器NS-1619（10和50μM）。开放条和实心条分别代表在没有和存在ZM-241385时的小动脉反应。数值为平均值±SE；n个=6只大鼠/组*P（P）与初始值相比<0.05。

PKA依赖性磷酸化在SNS诱导的软脑膜小动脉扩张中的作用。

选择性PKA阻断剂8-CPT和KT-5720的应用分别使SNS相关的软脑膜小动脉扩张减弱58%和65%(图5,左边). Ado引起的扩张也观察到类似的结果，尽管减少的程度稍小（30-50%；图5,正确的). 这些发现表明，SNS诱发的软脑膜小动脉舒张至少部分是通过Ado受体依赖性PKA激活介导的。接下来我们研究了血管舒张是否与钾有关_红外和BK_钙通道开放受到PKA介导的磷酸化的影响。如所示图6,左边在8-CPT的作用下，对KCl（6和12 mM）的软脑膜小动脉扩张反应减少了42–50%。在存在其他PKA阻断剂KT-5720的情况下，KCl引起的软脑膜小动脉扩张减少了58-69%(图6,左边). 当检测这两种PKA阻断剂对NS-1619诱导的反应的影响时，观察到对软脑膜小动脉扩张的类似抑制作用。因此，8-CPT灌注伴随着对NS-1619（10和50μM；图6,正确的)而在KT-5720存在的情况下，NS-1619引起的软脑膜小动脉扩张减少了57-71%(图6,正确的). 由于这些数据是在没有SNS的情况下获得的，因此结果似乎反映了基线PKA相关磷酸化对与K直接激活相关的软脑膜小动脉扩张的重要性_红外和BK_钙频道。有趣的是，K⁺-和NS-1619诱导的扩张不受Ado A的影响₂基线条件下的受体阻断(图4). 这似乎表明基线PKA与K相关_红外和BK_钙通道磷酸化与PKA激活途径有关，而不是A₂受体相关cAMP生成。

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图5。

选择性PKA抑制剂[10μM Rp-8-CPT-cAMP（8-CPT）和1μM KT-5720]对SNS诱导的作用(左边)和Ado-induced(正确的)软脑膜小动脉扩张。数值为平均值±SE；n个=8-CPT治疗组6只大鼠和KT-5720治疗组4只大鼠*P（P）与初始反应相比，<0.05。

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图6。

PKA依赖性磷酸化在局部应用K开放剂引起的软脑膜小动脉扩张中的作用_红外通道[KCl（6和12 mM）；左边面板]和BK_钙通道[NS-1619（10和50μM）；正确的]。在没有（初始）和存在PKA阻断剂8-CPT（10μM）和KT-5720（1μM）的情况下进行这些评估。数值为平均值±SE；n个=8-CPT治疗组6只大鼠和KT-5720治疗组4只大鼠*P（P）与初始反应相比，<0.05。

AC在调节软脑膜小动脉反应中的作用。

PKA活性增加主要来自AC激活和细胞内cAMP积累。给定Ado A₂SNS诱发的软脑膜小动脉扩张的受体依赖性，并考虑到A₂接收器-G_秒我们检测了局部应用的选择性AC抑制剂MDL-12330A（5μM）对SNS-、Ado-、KCl-和NS-1619诱导的软脑膜小动脉扩张的影响。结合这些评估，我们通过监测软脑膜小动脉对选择性AC激活剂forskolin（1和10μM）的反应，测试了5μM MDL-12330A在没有和存在MDL-12330 A的情况下的AC阻断效果。因此，福斯克林引起的扩张减少了65–66%(图7,左边). 与PKA抑制剂的作用类似，软脑膜小动脉对SNS的反应显著减少（85%；图7,左边)阿多（53-55%；图7,正确的)KCl（增加40-65%；图8)和NS-1619（增长44-83%；图8)在AC阻滞剂存在的情况下观察到。

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图7。

腺苷酸环化酶抑制剂MDL-12330A（5μM）对福斯克林和SNS诱导的影响(左边)和Ado-induced(正确的)软脑膜小动脉扩张。在（开口钢筋）之前和（实心钢筋）MDL-12330A之后进行测量。数值为平均值±SE；n个=5只大鼠/组*P（P）与初始反应相比<0.05。

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图8。

局部应用K诱发的软脑膜小动脉扩张_红外通道开启器KCl和BK_钙通道开放剂NS-1619在腺苷酸环化酶阻断剂MDL-12330A（5μM）不存在（开条）和存在（填充条）的情况下。数值为平均值±SE；n个=5只大鼠/组*P（P）与初始反应相比，<0.05。

PKG参与SNS和Ado诱导的软脑膜小动脉扩张。

测试除了PKA外，PKG是否也被细胞内cAMP水平的增加激活(24)，我们增加了一个单独的实验组，其中使用选择性PKG抑制剂8-PET来检测PKG激活在SNS和Ado诱导的软脑膜小动脉扩张中的作用。还引入了PKG激活剂8-pCPT-cGMP，以证实8-PET对PKG的PKG阻断效果。在8-PET存在下，8-pCPT-cGMP诱导的扩张显著减弱（67-90%；图9,左边). 然而，未观察到SNS或Ado诱导的扩张变化(图9,左边和正确的).

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图9。

PKG抑制[通过10μM Rp-8-Br-PET-cGMP（PET）]对PKG激活剂8-pCPT-cGMP（10和50μM）引起的软脑膜小动脉反应和SNS诱导的软膜小动脉扩张的影响(左边)以及Ado引起的扩张（10和100μM；正确的). 在（开杆）和（实心杆）PET之前进行测量。数值为平均值±SE；n个=6只大鼠/组*P（P）与初始反应相比<0.05。

BK的星形细胞终足（胶质界限）定位_钙通道：在NS-1619引起的血管舒张中的作用。

在这些实验中，我们检测了选择性BK灌流的剂量相关反应_钙局部应用胶质毒素的大鼠的通道开放剂NS-1619我-AAA或aCSF车辆在研究前24小时。为了进行比较，还监测了对KCl（6和12 mM）和Ado（10和100μM）的反应。如所示图10与对照组动物相比，消融浅层胶质细胞界限，同时软脑膜小动脉对NS-1619的反应性显著降低60-80%。K无显著差异⁺在以下情况下观察到Ado反应我-比较AAA和车用治疗大鼠(图10). 因此，与K相比_红外通道和Ado受体的贡献，这些发现表明，BK的很大一部分_钙SNS诱发的软脑膜小动脉扩张的通道依赖性涉及BK_钙位于胶质细胞界限内的通道。这一观察结果与Nelson及其同事提出的模型一致(29)，其中BK_钙-K的联动释放⁺来自星形细胞末端足（在本例中为胶质细胞限制蛋白）与K相互作用_红外邻近小动脉平滑肌细胞上的通道，导致平滑肌松弛。

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图10。

局部应用Ado（10和100μM）、KCl（6和12 mM）和BK引起的软脑膜小动脉扩张_钙局部应用选择性胶质毒素24小时后大鼠的通道开放剂NS-1619（10和50μM）我-α-氨基己二酸(我-AAA）或人工脑脊液（aCSF）载体。应注意，数据比较我-使用两种不同的实验方案收集AAA和车辆治疗大鼠。在一个案例中，只监测了NS-1619的响应。在另一种情况下，依次测量对Ado、KCl和NS-1619的反应。自NS-1619响应以来我-两种方案都对AAA进行了类似的抑制（相对于载体），NS-1619结果被汇总。因此，利用Ado和KCl数据，n个=车辆和我-AAA处理；对于NS1619数据，n个=车辆和我-AAA治疗。数值为平均值±SE*P（P）与载体治疗组的软脑膜小动脉扩张相比，<0.05。

讨论

这项研究有几个关键发现。首先，有证据表明，多种因素以非相加的方式导致软脑膜小动脉扩张，同时躯体感觉皮层的突触活动增加。这些因素包括Ado（通过与A的互动₂受体），BK_钙通道和K_红外频道。第二，K的药理阻断_红外通道不仅限制了SNS诱发的软脑膜小动脉扩张，而且还显著减弱了Ado和BK诱发的扩张_钙通道开启器NS-1619。另一方面，而BK_钙通道阻断确实抑制了SNS诱导的扩张，但对与Ado和K相关的小动脉反应没有影响_红外通道打开。这表明Ado诱导的扩张和BK的开放_钙渠道需要K的参与_红外通道，而与Ado相关的扩张增加，K_红外通道打开不需要BK_钙渠道贡献。第三，胶质毒素治疗大鼠的研究结果我-AAA透露，BK_钙本研究中的依赖性主要来源于BK_钙浅表胶质细胞界限内的通道。最后，A₂与SNS诱发的软脑膜小动脉扩张相关的受体依赖性联系似乎是AC激活、cAMP增加和PKA介导的BK磷酸化的功能_钙和/或K_红外频道。

在解决指导本研究的假设时，严重依赖药理学方法，这是一个潜在的局限性。在试图从获得的数据中得出结论时，必须考虑到所用药剂的选择性和功效。事实上，由于各种阻滞剂的重叠（非加性）血管效应，必须采取额外措施确保这些重叠效应不是由于非靶向作用。关于PKA的影响，我们使用了一些方法。首先，我们使用了两种不同的PKA阻滞剂，它们的化学性质不同，其抑制作用涉及PKA上不同位点的相互作用。也就是说，KT-5720在ATP结合位点起竞争性抑制剂的作用(10)8-CPT占据PKA调节亚单位的cAMP结合位点(2). 其次，本研究中使用的两种PKA阻滞剂的剂量（KT-5720和8-CPT分别为1和10μM）已被证明在防止过氧化性钾升高方面同样有效_红外家兔冠状动脉平滑肌细胞的电流(28). 第三，使用选择性AC阻滞剂，剂量足以消除对假定AC激活剂forskolin的大部分软脑膜小动脉反应。然而，无论使用何种阻滞剂，无论是针对PKA还是AC，对SNS、Ado和K⁺观察到通道开放剂。因此，这些确凿的发现为与cAMP/PKA相关的药理干预提供了一些验证。

对于其他药理学抑制剂，我们使用了从文献中获得的剂量值（例如，参考文献。4、9、17、20和31）。随后在先导性研究中测试了这些抑制剂的剂量反应作用，以确认其在减弱软脑膜小动脉对适当激活剂/激动剂的反应方面的有效性。在大多数情况下（例如，K考试_红外通道，黑色_钙通道、Ado受体和PKG功能），我们将激活剂/激动剂剂量-反应测量作为实验序列的一部分，以确认抑制剂的疗效。在其他情况下（例如，300μM AOPCP），我们依赖于文献(1)和试验数据(36). 在选择本研究中应用的抑制剂剂量时，我们通常采取更谨慎的方法，即偏向选择性而非反应抑制程度。因此，在大多数情况下，激活剂/激动剂反应的抑制百分比<100%，范围为60-100%。因此，由于我们没有在所有情况下完全抑制软脑膜小动脉扩张，我们推测观察到的效果实际上可能低估了给定靶点的作用。

然而，对于本研究中的三个主要目标（K_红外通道，黑色_钙渠道和Ado受体），一些警告和附加评论是有保证的。首先，尽管Ba²⁺（≤100μM）被认为对K具有高度选择性_红外通道，与其他K通道相比⁺通道（即BK_钙，ATP敏感性K⁺和电压门控K⁺通道）在血管平滑肌细胞中发现，在各种K中不一定具有选择性_红外通道子类型。在大脑中，至少有两种主要的亚型可以考虑。因此，K_红外2.1和K_红外4.1分别集中在血管平滑肌和星形胶质细胞中(19,39). 尽管阻断这两个通道可能会对神经血管单元的血管和星形细胞元件内的信号传递产生负面影响，但这种分布如何影响目前的研究结果尚不清楚。其次，帕西林被认为是最有效的BK拮抗剂_钙开启器NS-1619(7). 本研究中使用的10μM剂量的帕西林的选择性和有效性得到了支持，因为它能够显著减弱NS-1619反应，而不影响Ado或K引起的血管舒张_红外通道激活(图3). 此外，NS-1619反应的显著和选择性缺失与胶质细胞界限蛋白消融相关，是支持胶质细胞界限肽BK关键作用的有力证据_钙频道。第三，本研究中使用的10μM剂量的ZM-241385虽然与Ado反应的几乎完全丧失有关，但超过了a的可接受剂量_2安培A的选择性_2B型受体(22). 然而，由于这两种受体都与AC激活有关，我们关于Ado作用的结论不需要改变。

尽管有其局限性，但这些选择性药理学工具确实使我们能够对相互作用和串话的位置获得一些见解。因此，K_红外通道阻断不仅与K的预期抑制有关⁺-诱导扩张，但也伴随着由Ado和BK引起的软脑膜小动脉扩张的显著减弱_钙通道开启器NS-1619(图2). NS-1619发现最可能的解释来自Nelson和同事发表的工作（例如，参见参考文献。三和29)，其中K⁺通过星形细胞末梢BK释放_钙通道(27)激活的K_红外2.1邻近小动脉平滑肌的通道。尽管Nelson等人的发现来自实质组织，在那里小动脉主要被星形细胞终末突起包裹，但这些结果仍适用于目前的情况，因为软脑膜小动脉覆盖在胶质终末床上，胶质界限(35). BK的分离_钙和K_红外2.1分别通向浅表胶质细胞界限和软脑膜血管平滑肌部位的通道可以解释目前的发现，Ba²⁺-诱导K_红外通道阻断对NS-1619相关的扩张有显著影响，而帕西林介导的BK阻断_钙通道对K无影响_红外6–12 mM KCl引起的通道相关扩张(图3). 支持胶质极限蛋白BK重要性的其他证据_钙BK引起的软脑膜小动脉扩张中的通道_钙通道开启器如所示图10因此，局部暴露于高度星形胶质细胞选择性胶质毒素我-AAA能够在不损伤软脑膜小动脉或神经元的情况下清除胶质细胞界限的表面（参见参考文献。34和35)伴随着对NS-1619的软脑膜小动脉反应显著减弱。这表明NS-1619诱导的扩张主要来自与BK的相互作用_钙与血管平滑肌相比，胶质细胞界限内的通道。BK的证据_钙神经血管耦合的通道依赖性（和paxilline敏感性）与脑血管平滑肌上的星形胶质细胞有关，Girouard等人最近的一份报告发现了这一点(6).

本调查中解决的另一个关键问题与Ado A的明显相互依赖性有关₂受体，K_红外通道和BK_钙SNS诱导的软脑膜小动脉扩张。因此，我们检查了导致这种相互依赖的过程是否源自Ado A₂受体相关的AC激活，引起PKA介导的BK磷酸化_钙通道(32)和K_红外渠道，增强其功能(11). 为了支持上述观点，我们发现PKA和AC阻断都与软脑膜小动脉对SNS和Ado充盈反应的实质性减弱有关。在其他评估中，我们没有观察到PKG的作用，这表明cAMP效应仅通过PKA激活发生(图9)而不是通过PKG的交叉激活（参见参考文献。14和33). 此外，缺乏PKG抑制剂对SNS诱导的软脑膜小动脉扩张的影响表明NO/cGMP/PKG通路对这种反应没有贡献。这与之前的发现一致，即no合酶阻断对SNS诱发的大鼠软脑膜小动脉扩张没有影响(21). 令人惊讶的是，对K的血管舒张反应显著减少_红外和BK_钙在PKA和AC阻断的情况下也观察到了通道激活剂(图6和​和8）。8). 这似乎表明PKA对K的影响是基础的，可能是允许的_红外和BK_钙即使在没有通过Ado-AC-PKA通路增加活性的情况下，对AC/PKA阻断敏感的通道功能（和软脑膜小动脉张力）。因此，钾可能需要一些基础水平的磷酸化_红外和BK_钙通道打开以响应其激活器。当SNS-和Ado诱导的扩张（高cAMP/PKA活性）与伴随K-⁺比较了低cAMP/PKA活性条件下的通道激活剂。

总之，目前的研究结果表明，体感皮层中突触活动的增强通过多种相互依赖的机制导致上覆软脑膜小动脉的扩张。这些机制涉及胶质细胞界限内的位点(35)和软脑膜小动脉本身。因此，神经膜内神经元活性的增加被认为会引起细胞间钙²⁺其传播至少部分取决于Ca的波²⁺-ATP释放与代谢性嘌呤能P2Y受体的相互作用以及随后的钙²⁺从细胞内储存位点释放。那个Ca²⁺不仅可以促进进一步的ATP释放，还可以激活向外的K⁺通过BK的电流_钙胶质细胞界限上的通道（有关评论，请参阅参考文献。23和26). 此外，释放的ATP可以通过丰富的外核苷酸酶转化为Ado(36). 增加的细胞外Ado可以与A相互作用₂胶质细胞界限内和软脑膜小动脉平滑肌上的受体，导致PKA活化和BK磷酸化_钙和K_红外通道。我们推测，通道磷酸化可能对钾具有许可作用⁺频道。换句话说，可能需要存在一个基本水平的磷酸化，以允许通道对其激活物作出反应。

赠款

这项工作得到了国家心脏、肺和血液研究所拨款HL-088259（给D.A.Pelligrino）和美国心脏协会拨款0635337N（给H.Xu）的支持。

披露

作者未声明任何利益冲突，无论是财务上的还是其他方面的。

参考文献