坎地沙坦通过恢复乙醛酶-I功能减轻糖尿病视网膜血管病变

摘要

慢性高血糖是糖尿病视网膜病变发病的主要原因(1)并可能通过多种途径损伤视网膜血管细胞，包括增强晚期糖基化终产物（AGEs）的产生(2,三)和肾素-血管紧张素系统（RAS）的激活(4). 在糖尿病中，糖酵解途径中的葡萄糖处理受损，葡萄糖流量增加，导致AGE前体甲基乙二醛（MGO）的积累，而甲基乙二醇是细胞内和血浆AGE的来源(5). MGO可以修饰关键细胞蛋白质上的胺基（如赖氨酸和精氨酸残基），生成AGE修饰的细胞蛋白质，对蛋白质功能和基因调节产生负面影响(6,7)导致细胞功能受损。在糖尿病视网膜病变中，MGO衍生的AGEs在视网膜和血清中升高，被认为是视网膜损伤的病因(8,9). 乙二醛酶（GLO）系统由GLO-I和GLO-II组成，对控制体内MGO水平以及最终控制MGO AGEs至关重要。然而，在糖尿病患者中，一些组织中GLO-I活性降低，因此与组织MGO和AGEs的积累以及随后的病理学有关(10,11). 与糖尿病视网膜病变相关，我们报道，在高血糖条件下生长的视网膜周细胞中，当GLO-I功能受损时，MGO积聚，周细胞凋亡发生(12).

RAS是血压的主要调节器，通过刺激细胞死亡、炎症和血管生成，也有助于视网膜病理(4)]. RAS由原肾素启动，其活性形式肾素从血管紧张素原中释放血管紧张素I。血管紧张素转换酶然后将血管紧张素I转换为血管紧张素II（Ang II）。实验和临床证据均表明，血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂可改善糖尿病视网膜病变血管和神经胶质损伤的各个方面(13–17). 事实上，DIRECT项目（糖尿病视网膜病变-坎地沙坦试验）的最新研究结果表明，使用坎地沙丹阻断血管紧张素1型受体（AT1-RB）可降低1型糖尿病患者糖尿病视网膜病变的发病率，并改善2型糖尿病患者视网膜疾病的消退(18,19).

尽管DIRECT的阳性结果，AT1-RB并没有使视网膜病理正常化。这可能是由于Ang II与其他途径（如AGEs）的相互作用导致器官病理学(20–23). 就糖尿病视网膜病变而言，少数评估这种关系的研究集中于Ang II增加AGEs的细胞外事件和AGEs受体（RAGE）诱导的视网膜周细胞凋亡(24). 然而，对于糖尿病视网膜病变中RAS是如何影响细胞内AGEs（如MGO通过GLO-I失活产生的AGEs）的，人们知之甚少。在本研究中，我们假设Ang II刺激视网膜GLO-I的下调，随后MGO形成增加，导致糖尿病视网膜病变中MGO-AGEs增加和血管损伤。我们还评估了坎地沙坦对糖尿病视网膜病变的保护作用是否涉及视网膜GLO-I的恢复。在转基因（mRen-2）27（Ren-2，与使用链脲佐菌素制造糖尿病的Sprague-Dawley大鼠相比，它们患有高血压并加速视网膜病变(13,15,25). 为了更直接地评估视网膜血管细胞中Ang II和GLO-I之间的关系，对培养的牛视网膜内皮细胞（BREC）和牛视网膜周细胞（BRP）进行了研究。此外，鉴于我们已经确定一氧化氮（NO^•)是视网膜周细胞GLO-I活性的调节器(12)，我们确定Ang II对视网膜GLO-I的调节是否与视网膜NO的变化有关^•.

研究设计和方法

结果

Ang II刺激BREC和BRP中的细胞凋亡并降低GLO-I。

为了确定Ang II是否诱导视网膜血管细胞凋亡，将BREC和BRP与100 nmol/l Ang II孵育24小时。与对照组相比，在BREC和BRP中，Ang II治疗分别导致TUNEL或Annexin阳性细胞增加500和30%(图1). 鉴于这一发现，我们接下来评估了BREC和BRP中的GLO-I，发现在这两种细胞类型中，与对照组相比，Ang II使GLO-I活性和mRNA降低了20%(图2). 为了证实Ang II参与GLO-I的下调，我们接下来在用AT1-RB，坎地沙坦治疗后测量GLO-I。在BREC和BRP中，坎地沙坦恢复了GLO-I活性和mRNA，以控制Ang II处理细胞的水平(图2)在BREC的情况下，GLO-I mRNA升高到对照水平以上(图2). 总的来说，BREC在恢复GLO-I功能方面对坎地沙坦的行动反应更为迅速。在几乎所有情况下，在不存在Ang II的情况下，坎地沙坦不会影响GLO-I水平（见补充图1，在线附录中提供）。

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图1。

经Ang II治疗后，TUNEL染色和流式细胞术分别检测BREC和BRP凋亡。在BREC中，用100 nmol/l Ang II处理24小时后，TUNEL染色增强(A类)与对照组相比(C类). AngⅡ处理后的DAPI核染色(B类)和控制(D类)布雷克。箭头表示TUNEL阳性的BREC，箭头表示细胞起泡，这是细胞凋亡的常见特征。放大倍数×200。Annexin V-FITC的代表性示例(x个-轴）和碘化丙啶（PI）染色(年-axis）检测100 nmol/l Ang II治疗BRP后的凋亡细胞(E类)或控制(F类)24小时后，在Annexin V阳性或早期凋亡期（右下象限）、AnnexinV阳性/PI阳性（右上象限）或晚期凋亡期观察到增加(E类). 左下象限，活细胞；左上象限，坏死细胞（仅PI染色）。G公司：TUNEL染色检测BREC凋亡的图示*P（P）与对照组相比<0.01。N个=3个样本，是三个独立实验的代表性数据集。H（H）：Annexin/PI染色检测BRP凋亡的图示*P（P）<0.03与对照组。所有数据均通过未配对进行分析t吨测验。N个=3个独立实验。数值为平均值±SEM。（该图的高质量彩色表示可在网上找到。）

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图2。

用Ang II和坎地沙坦（Cand）治疗后，BREC和BRP中GLO-I mRNA和活性水平。在BREC中(A类和B类)和BRP(C类和D类)，GLO-I mRNA(A类和C类)和活动(B类和D类)与对照组相比，用Ang II（100 nmol/l）治疗24小时后降低。Cand（1μmol/l）恢复与Ang II共同孵育的BREC和BRP中GLO-I活性和mRNA。A类,B类: *P（P）<0.05与对照组，†P（P）与Ang II相比<0.05。C类和D类: *P（P）<0.03与对照组。所有数据均通过Kruskal-Wallis检验进行分析，然后进行Mann-Whitney检验U型测验。值是N个=3-4个独立实验，每个实验中有三份样品。

血管紧张素II降低GLO-I和BRP的同时伴有NO的增加^•.

确定Ang II对GLO-I的下调是否涉及NO^•，我们测量到NO^•在存在或不存在坎地沙坦的情况下，经Ang II治疗后，BREC和BRP中的产量。在BREC中，Ang II对no没有影响^•而在BRP中，Ang II增加NO^•产量为1.2倍。在这两种细胞类型中，坎地沙坦都能减少NO^•与仅接受Ang II治疗的细胞相比，Ang II处理的细胞中的水平(图3).

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图3。

不^•BREC中的级别(A类)和BRP(B类)用Ang II和Cand治疗24小时后。A类：用100 nmol/l Ang II治疗BREC对no无影响^•水平。在用Ang II+Cand（1μmol/l）处理的BREC中，NO^•水平降低到对照组和Ang II处理的细胞以下*P（P）<0.01与对照组，†P（P）<0.03与Ang II。B类：100 nmol/l Ang II治疗BRP显著增加NO^•水平。在用Ang II+Cand治疗的BRP中，NO^•水平降低到控制水平*P（P）<0.05与对照组，†P（P）与Ang II相比<0.05。BRP通过单向方差分析进行分析，然后进行Bonferroni事后检验。BREC通过Kruskal-Wallis试验进行分析，然后进行Mann-Whitney试验U型测验。数值是3个和7个独立实验（分别为BRP和BREC）的平均值，每个实验中有三个重复样本。

糖尿病Ren-2大鼠出现脱细胞毛细血管，视网膜白细胞增生增加，而坎地沙坦可以减轻这种情况。

体内BREC和BRP凋亡的对应物是无细胞毛细血管的形成。为了确定糖尿病大鼠视网膜中GLO-I的表达是否降低，以及是否与脱细胞毛细血管形成相关，我们首先评估了糖尿病20周后Ren-2大鼠视网膜的脱细胞毛细血管数量。与非糖尿病对照组相比，糖尿病Ren-2大鼠的视网膜中部和外周无细胞毛细血管形成增加，而坎地沙坦则减少(图4). 由于视网膜血管中的白细胞粘附可能先于无细胞毛细血管的形成，因此对4周和20周的时间点进行了检查。在糖尿病Ren-2大鼠中，与非糖尿病对照组相比，糖尿病4周和20周后粘附白细胞增加(图5)白细胞粘附在4周糖尿病组最为明显。在糖尿病Ren-2大鼠中，坎地沙坦将视网膜血管中白细胞粘附性的增加降低至控制水平或以下(图5).

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图4。

糖尿病20周后Ren-2大鼠视网膜胰蛋白酶消化物中的无细胞毛细血管的代表性显微照片。视网膜用高碘酸希夫试剂染色。比例尺=20μm。非糖尿病患者(A类)，糖尿病(B类)和糖尿病+C（5 mg/kg/天）(C类). 与非糖尿病大鼠相比，糖尿病大鼠视网膜中部和周边的去细胞毛细血管增多。在糖尿病Ren-2大鼠中，Cand将视网膜中部和周边的去细胞毛细血管减少至非糖尿病对照水平。箭头表示无细胞毛细血管，箭头尖端有周细胞影。显示中央每个视网膜场无细胞毛细血管数量的图表（平均值±SEM）(D类)，中(E类)、和外围设备(F类)视网膜*P（P）与非糖尿病、糖尿病+Cand相比，<0.05。N个=8只动物/组。数据通过单向方差分析进行分析，然后进行Bonferroni事后检验。（该图的高质量彩色表示可在在线期刊上找到。）

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图5：。

Ren-2大鼠糖尿病4周和20周后，在灌流罗丹明与伴刀豆球蛋白A偶联物后的代表性显微照片中，视网膜血管中的白细胞粘附。比例尺=80μm。箭头表示粘附的白细胞。对所有视网膜血管中的白细胞进行计数。四周研究：非糖尿病(A类)，糖尿病(B类)和糖尿病+C(C类). 二十周研究：非糖尿病(D类)，糖尿病(E类)和糖尿病+C(F类). 与年龄匹配的非糖尿病对照组相比，4周和20周糖尿病患者的视网膜血管中白细胞粘附增加。在糖尿病Ren-2大鼠中，Cand将视网膜血管中的白细胞粘附降低到非糖尿病对照水平。G公司：视网膜血管中白细胞粘附的图示（平均值±SEM）。N个=6–10只动物/组*P（P）<0.03，与年龄匹配的非糖尿病对照组和糖尿病+Cand组相比；†P（P）<0.02与第4周糖尿病患者相比P（P）<0.005与年龄匹配的非糖尿病对照组相比。BREC通过Kruskal-Wallis试验进行分析，然后进行Mann-Whitney试验U型测验。（该图的高质量彩色表示可在在线期刊上找到。）

糖尿病Ren-2大鼠视网膜中VEGF、炎症因子和iNOS的基因表达。

与非糖尿病对照组相比，糖尿病大鼠视网膜ICAM-1和TNF-αmRNA水平增加了一倍，VEGF mRNA增加了0.5倍。在糖尿病Ren-2大鼠中，坎地沙坦使视网膜中ICAM-1和VEGF mRNA水平降低至非糖尿病对照组水平(图6)TNF-αmRNA降低至非糖尿病对照水平以下。(图6). 在糖尿病Ren-2大鼠中，与非糖尿病对照组相比，视网膜iNOS mRNA水平增加了0.3倍，坎地沙坦将视网膜iNOS mRNA水平降低到非糖尿病对照的水平以下(图6).

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图6。

ICAM-1公司(A类)、血管内皮生长因子(B类)，肿瘤坏死因子-α(C类)和iNOS(D类)糖尿病4周后Ren-2大鼠视网膜中的mRNA水平。与非糖尿病对照组相比，糖尿病大鼠视网膜ICAM-1、VEGF、TNF-α和iNOS mRNA水平升高。在糖尿病Ren-2大鼠中，Cand降低了视网膜ICAM-1(A类)和VEGF mRNA(B类)与非糖尿病对照组相比，TNF-α(C类)和iNOS mRNA(D类)降低到控制水平以下。对于面板A类,B类、和D类，数据通过单向方差分析进行分析，然后进行Bonferroni事后检验*P（P）<0.05与非糖尿病对照组†P（P）与糖尿病对照组相比，<0.05。对于面板C类，数据通过Kruskal-Wallis测试和Mann-Whitney测试进行分析U型测试*P（P）<0.02与非糖尿病对照组†P（P）<0.0001与糖尿病对照组相比。N个=8–13只动物/组。数值为平均值±SEM。

糖尿病Ren-2大鼠的视网膜病理学与视网膜GLO-I降低相关。

在Ren-2大鼠中，糖尿病4周和20周时发生的视网膜病理学伴随着GLO-I功能的调节。糖尿病4周时，视网膜GLO-I活性下降，但未检测到mRNA水平的变化(图7和补充图2，分别在在线附录中提供）。然而，糖尿病20周后，视网膜GLO-I mRNA下降(图7). 坎地沙坦增加了糖尿病Ren-2大鼠视网膜中GLO-I的表达，这与我们在BREC和BRP中的发现一致。为了确定糖尿病Ren-1大鼠视网膜GLO-I减少是否与这些动物中RAS的过度表达有关，对RAS抑制的非糖尿病和糖尿病Sprague-Dawley大鼠进行比较(图7). 非糖尿病Sprague-Dawley大鼠视网膜中GLO-I的表达与糖尿病无关。然后我们研究了RAS的GLO-I失调是否增加了MGO-衍生AGEs。在Ren-2大鼠糖尿病4周后，视网膜中MGO-AGE水平升高。在糖尿病Ren-2大鼠中，坎地沙坦倾向于减少视网膜MGO-AGE的增加，但这并不显著(图7). 视网膜中也检测到特定的MGO-AGE，即argpyrimidine，并且在Ren-2大鼠的糖尿病中没有变化；然而，与对照组相比，坎地沙坦确实降低了视网膜精嘧啶的水平(图7). 糖尿病20周后，糖尿病患者的血浆MGO-AGEs和总AGEs均升高，而坎地沙坦显著降低(图7). 视网膜NO^•与糖尿病和非糖尿病对照组相比，经坎地沙坦治疗的糖尿病Ren-2大鼠的血糖水平显著降低(图7).

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图7。

糖尿病Ren-2大鼠的GLO-I活性、mRNA和MGO-AGE水平。在糖尿病4周后的Ren-2大鼠中，视网膜GLO-I活性(A类)与非糖尿病对照组相比有所减少，并且倾向于用Cand恢复，尽管这并不显著(*P（P）<0.03，与非糖尿病Ren-2对照组相比）。糖尿病20周后，Ren-2大鼠的视网膜GLO-I mRNA(B类)与非糖尿病对照组相比明显降低，并恢复到与Cand的对照水平(*P（P）<0.005与非糖尿病Ren-2对照组，†P（P）与糖尿病Ren-2对照组相比<0.05）。相比之下，在Sprague-Dawley（SD）大鼠中(B类)糖尿病20周时，视网膜GLO-I mRNA无变化。糖尿病4周后，Ren-2大鼠视网膜GLO-I活性降低(A类)伴随着视网膜MGO-AGE水平的增加(C类), (*P（P）与非糖尿病Ren-2对照组相比，<0.01）。在糖尿病Ren-2大鼠中，Cand倾向于降低视网膜MGO-AGE水平，但这并不显著。在4周龄糖尿病Ren-2大鼠的视网膜中，特异性MGO-AGE、精嘧啶的水平(D类)和否^•水平(E类)与非糖尿病对照组相比无变化；然而，Cand降低了视网膜精氨嘧啶(*P（P）<0.05与非糖尿病Ren-2对照组，†P（P）<0.01 vs.糖尿病Ren-2对照组）和NO^•水平(*P（P）<0.05与非糖尿病Ren-2对照组†P（P）与糖尿病Ren-2对照组相比<0.01）。F类：与非糖尿病对照组相比，患有糖尿病20周后，Ren-2大鼠的血浆MGO-AGEs（黑条）增加，并且随着C降低至非糖尿病水平(*P（P）<0.05与非糖尿病Ren-2对照组相比；†P（P）与糖尿病Ren-2对照组相比<0.05）。糖尿病20周后，Ren-2大鼠的其他AGE（非MGO AGE，白色条）和总AGE（MGO-AGE+其他AGE，黑色条+白色条）增加，而C降低至非糖尿病对照水平（P（P）<0.005与“其他年龄”非糖尿病Ren-2对照；§P（P）<0.04，与“其他年龄段”糖尿病Ren-2对照组相比#P（P）<0.02与“总年龄”非糖尿病Ren-2对照**P（P）<0.02与“总年龄”糖尿病Ren-2对照）。N个=5-8只动物/组。数值为平均值±SEM。面板中的数据C类和D类采用单因素方差分析，然后进行Bonferroni事后检验。该图中的所有其他数据集均通过Kruskal-Wallis检验进行分析，然后进行Mann-Whitney检验U型测验。

讨论

本研究提供了新的证据，证明GLO-I是视网膜血管细胞存活的关键酶(12)，被视网膜中的Ang II下调。我们的研究结果得到了以下证据的支持：AT1-RB，坎地沙坦，改善了糖尿病视网膜病变中无细胞毛细血管的形成和炎症，伴随着视网膜GLO-I表达的恢复和MGO-AGEs的减少，尤其是特定的MGO-AGE精嘧啶。这些发现拓宽了Ang II在AGE途径中的已知作用，不仅包括细胞外AGE相关事件，如RAGE介导的细胞凋亡(24,29,30)也包括MGO-AGEs的细胞内形成。就视网膜GLO-I的调节机制而言，我们之前对视网膜周细胞的研究表明NO的作用^•(12). 我们现在将这一发现扩展到报道，在视网膜血管细胞中，坎地沙坦可以减少NO^•总的来说，本研究提供了有关Ang II如何与AGE途径相互作用以及坎地沙坦在糖尿病视网膜病变中发挥有效保护作用的细胞机制的新信息(图8).

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图8。

Ang II下调视网膜血管细胞中GLO-I的机制，导致AGEs的产生和血管损伤。AT1-RB，Cand，能够通过减少一氧化氮和恢复GLO-I水平来预防糖尿病视网膜血管损伤。

在糖尿病20周时，我们观察到Ren-2大鼠的中段和外周视网膜中无细胞毛细血管形成增加，这与我们之前对Ren-2鼠的研究一致(13)并在糖尿病患者中观察到(31). 脱细胞毛细血管形成是内皮细胞和周细胞凋亡后视网膜微血管发生的一种病理现象(32). 这些事件可能导致视网膜区域无灌注，这被视为导致血管生成生长因子（如VEGF）的上调，进而导致病理性血管生成。视网膜血管细胞凋亡的机制尚未完全确定；然而，我们小组以前的研究表明，GLO-I对人类视网膜周细胞的生存是必要的(12). 本研究以这一信息为基础，通过在视网膜血管细胞中鉴定Ang II是一种新型的GLO-I活性负调控因子和细胞凋亡诱导剂。我们的发现支持了Ang II和GLO-I之间的相互作用，即在包括眼睛在内的组织中肾外RAS增强的糖尿病Ren-2大鼠中(15)，视网膜GLO-I表达降低，同时无细胞毛细血管增加。值得注意的是，在年龄匹配的糖尿病Sprague-Dawley大鼠中，视网膜GLO-I没有减少，这些动物也没有形成脱细胞毛细血管(13). 我们承认，当无细胞毛细血管出现时，长期糖尿病患者未检测到GLO-I活性；然而，在糖尿病视网膜病变的早期，当炎症达到最大时，GLO-I活性降低。坎地沙坦恢复视网膜GLO-I和减轻视网膜血管病变（包括炎症）的能力，这被认为是糖尿病视网膜病变的原因(33)在考虑Ang II阻滞剂（如坎地沙坦）提供视网膜保护的潜在机制时，这一点可能很重要。

虽然乙醛酸酶系统是AGE途径的关键调节器，但MGO-AGEs的形成与细胞损伤有关。迄今为止，该领域的大多数研究都集中于通过RAGE的AGEs对AGE介导的病理学，包括糖尿病视网膜病变的作用(34). 然而，AGEs可能不是体内主要的RAGE配体，因为蛋白质在与RAGE结合之前必须被严重糖基化，而这种广泛糖基化可能不会在体内发生(35). 虽然有越来越多的证据支持这种可能性，但关于细胞内AGEs对病理学的作用的详细报道有限(36,37). RAGE范式的另一个维度是最近发现GLO-I可以通过调节MGO水平来控制RAGE及其配体的表达(38)，与细胞内糖基化可以控制RAGE表达的观点一致。在糖尿病肾病中，RAS对AGE形成的影响已被证实(20–23)，通常侧重于RAGE介导的信号。这也适用于糖尿病视网膜病变的有限研究，其中Ang II介导RAGE和AGE诱导的视网膜周细胞凋亡增加(24,29,30). 在本研究中，通过ELISA检测细胞内MGO-AGE形成的评估（使用针对MGO-AGEs异质混合物的抗体）显示糖尿病Ren-2大鼠的视网膜增加。考虑到精氨酸对赖氨酸的优先修饰，还研究了MGO与精氨酸残基反应形成的一种特殊MGO-AGE，即精氨酸嘧啶(39)以及之前在糖尿病肾脏中检测到的这种特殊成分(39,40). 然而，尽管糖尿病Ren-2大鼠视网膜MGO-AGEs升高，但精嘧啶并未增加，这一发现可能是因为精嘧啶的含量低于其他MGO-AGEs(41). 进一步证明Ang II影响视网膜MGO-AGEs的证据来自我们的发现，坎地沙坦能够恢复糖尿病视网膜Ren-2中的GLO-I，也可以降低视网膜MGO-AGEs和精氨嘧啶水平。这些结果与之前的一项研究一致，该研究报告称坎地沙坦降低了糖尿病大鼠视网膜中AGE戊糖苷的免疫标记，尽管在该研究中戊糖苷水平没有明确量化(42). 与坎地沙坦降低视网膜MGO-AGEs一致，坎地沙丹降低血浆MGO-AGE，值得注意的是，使用我们的检测方法在血浆中检测到的大多数AGEs都是MGO-衍生的。总的来说，我们的发现为RAS在糖尿病视网膜病变中观察到的AGEs调节建立了一种机制，这种机制可能确实与其他糖尿病并发症有关(20–23).

Ang II下调视网膜中GLO-I的可能候选机制是NO的增加^•这一假设是基于我们之前对人类视网膜周细胞的研究，该研究表明GLO-I在转录水平上受到NO的调节^•(12). 此外，有大量证据表明Ang II刺激NO^•产生，导致血管病理学(43)包括视网膜炎症和血-视网膜屏障的破坏(44,45). 在本研究中，尽管Ang II降低了培养的视网膜内皮细胞和周细胞中GLO-I的活性和表达，但它只增加NO^•视网膜周细胞水平。Ang II不刺激NO的原因^•视网膜内皮细胞中不清楚；然而，我们的数据表明Ang II通过AT1-R影响NO^•坎地沙坦降低NO时视网膜内皮细胞的生成^•两个细胞群中的水平。同样，在Ren-2视网膜中，NO^•糖尿病患者的血药浓度没有显著升高；然而，坎地沙坦降低了NO^•低于非糖尿病控制水平，支持视网膜中Ang II影响NO的观点^•通过AT1-R产生NO。解释我们的结果时需要考虑的是NO的生理水平^•是正常组织功能所必需的，可以抑制白细胞粘附(46)并调节血管舒张(47). 我们发现坎地沙坦降低了视网膜iNOS和NO^•低于控制水平可能表明需要进一步研究以确定低剂量的AT1-RB能否维持NO^•视网膜内的生理水平，伴随着视网膜病理学的降低和GLO-I的恢复。就NO的病理作用而言^•我们的研究结果与以前的研究一致，iNOS被认为是导致NO增加的主要因素^•糖尿病视网膜病变的水平(48,49)并报道坎地沙坦可以降低组织iNOS(22).

本研究的一个可能局限性是，坎地沙坦对Ren-2大鼠糖尿病视网膜病变的疗效可能是由于该动物的高血压降低，而不是血管紧张素II的生长因子作用受到抑制。然而，在我们之前的研究中，对年龄和血压匹配的糖尿病自发性高血压大鼠与糖尿病Ren-2大鼠的比较表明，前者并没有发展为严重的糖尿病视网膜病变，提示在Ren-2大鼠中RAS的过度表达在该模型中是糖尿病视网膜病变发生的主要原因(15). 此外，在糖尿病Ren-2大鼠中，β-受体阻滞剂阿替洛尔和AT1-RB缬沙坦均能产生类似的收缩压降低；然而，只有缬沙坦减弱了视网膜无细胞毛细血管的形成和视网膜功能的下降(13,14). 然而，据我们所知，高血压本身是否影响糖尿病患者视网膜GLO-I活性和表达尚不清楚，需要在未来的研究中进行调查。

总之，鉴于近期临床试验的积极结果，当前研究的结果是及时的，这些试验表明AT1-RB和血管紧张素转换酶抑制对糖尿病视网膜病变的视网膜血管具有保护作用(18,19,50). 我们的数据表明，GLO-I可能是连接RAS和AGE通路的关键酶，从而促进糖尿病视网膜病变的发展(图8). 这些发现增强了我们对RAS阻滞剂（如坎地沙坦）如何在分子水平发挥作用，在糖尿病等疾病中提供视网膜血管保护的理解。

补充材料

致谢

脚注

参考文献