铁蛋白H链和L链的siRNA敲低对LECs转铁蛋白受体和铁摄取的影响。(A类)TfR蛋白质印迹。用非靶向对照FHsiRNA或FLsiRNA转染细胞后24小时,冲洗细胞并在无血清MEM中培养24小时。在RIPA缓冲液中溶解并离心后,上清液浓缩在离心过滤柱上。将每个样品中的25微克蛋白质加载到8%变性Tris-tricine凝胶上,并将6微克纯化人胎盘TfR作为阳性对照。用单克隆鼠抗人TfR、二级HRP抗体和ECL检测转铁蛋白受体。用1:500稀释的HRP-山羊抗人β-肌动蛋白(用作负荷控制)重制印迹。所示斑点代表了三个实验,数据表示为平均值±SEM。*与对照组显著不同(P(P)< 0.01); 方差分析和Tukey检验。(B类)铁吸收。用240μg/mL培养转染细胞59Fe-Tf在无血清DMEM中放置20小时,制备裂解物,并使用γ计数器计算胞浆部分的放射性。将每个样品中的放射性归一化为蛋白质,数据表示为用非靶向siRNA转染的对照细胞的百分比。数据显示为八个样品的平均值±SEM*与控制显著不同(P(P)< 0.05); 方差分析和Tukey检验。