内吞小泡断裂对吞噬细胞形成的影响答:。收集转染两轮对照、氯氰菊酯重链或AP2 siRNA的Hela细胞4d,用抗Atg16L1抗体(IP)进行免疫沉淀。使用抗Atg16L1和抗网格蛋白抗体对总裂解物(底部)和IP(顶部)进行Western blot。注意Atg16L1-Clathrin与AP2击倒的相互作用减少。图中显示了Atg16L1-板球蛋白或Atg16L2-AP2的定量,以及两个独立实验中的对照、氯氰菊酯重链或AP2敲除。B。用Flag标记的野生型Atg16L1、GFP-PLC(PH)以及空载体(对照)或显性阴性动力蛋白II突变体(K44A dynamin;DN Dyn)转染24小时的HeLa细胞被固定并通过共聚焦显微镜进行分析。注意Atg16L1与PLC(PH)在质膜上的共定位,这在图中进行了量化。*-p<0.01。比例尺–5μm。n=20个电池。C、。收集单独用HBSS或用80μM dynasol处理5小时的HBSS的Hela细胞,用抗Atg16L1抗体(IP)进行免疫沉淀。使用抗Atg16L1和抗网格蛋白抗体对总裂解物(TL)和IP进行Western blot分析。注意Atg16L1-Clathrin与dynasore治疗的强相互作用。图表显示了两个独立实验的定量结果。图中的所有误差条都表示SEM。D。质膜对自噬体前体形成的贡献。霍乱毒素通过依赖于氯氰菊酯和非依赖于氯溴菊酯的内吞作用被内化。氯菊酯击倒显著降低霍乱毒素摄入15,26.从质膜(EEA1-阴性)立即萌芽的氯菊酯包被囊泡(CCV)是早期内体(EE)的前体27(EEA1-阳性)。以前的研究表明,将完全形成的自噬体输送到溶酶体需要将这种自噬小体与早期或晚期内体/多泡小体(LE/MVB)融合形成两性体,它们是Atg16L1-阴性、LC3-阳性和内体标记阳性11,12(红色箭头)。我们在此表明,抑制网格蛋白依赖性内化抑制早期Atg16L1阳性前体的形成,这些前体成熟后形成吞噬细胞和后期的自噬体(蓝色箭头)。这些Atg16L1-vesicles对其他早期自噬标记物(Atg5和Atg12)呈阳性,但对早期内吞标记物(EEA1)无阳性反应。AP2是质膜上的网格蛋白适配器,而AP1定位于TGN和内体。