报告人试验中Ezh2 3'-UTR的miR-101和miR-26a分析及内源性Ezh2表达.答：。在野生型（wt）报告子中，在PGK启动子驱动的GLuc下游亚克隆了一个493 bp的片段，该片段包含Ezh2编码区的最后50 bps和Ezh2 3'-UTR的前443 bps，包含预测的miR-101和miR-26a靶位点。四个报告结构包含miR-101靶位点Ezh2 3'-UTR的突变：m（45-66）、m（101-121）和m（45-6和101-121；miR-26a靶点：m（236-257）。B。增加miR-101和miR-26a（0、50和100 nM，如有必要，用miR-cont补偿到100 nM）与wt报告子共转染“A”将SEAP表达质粒导入PC-3细胞（三倍体）。GLuc活性由SEAP活性测定并归一化（详见材料和方法）。C、。将100 nM的miR-cont或miR-101与50 ng所示报告构建物和SEAP表达质粒共同转染。如上所述测量并归一化GLuc活性。D。实验的执行方式为“C”使用标记的miR-26a和报告质粒。E.公司。用miR-cont、miR-101或miR-26a（120 nM）转染PC-3细胞。通过蛋白质印迹法测定Ezh2和β-肌动蛋白的表达。用β-肌动蛋白归一化的相对Ezh2水平被指出。F、。实时RT-PCR分析微RNA转染细胞中Ezh2 mRNA水平（归一化为GAPDH）。星号：p≤0.05。G公司和H（H）GLuc活性测定（三倍）和Western blotC、 D类和E类DU-145中(G公司)和LNCaP(H（H）)单元格。
