《美国病理学杂志》。2010年5月；176(5): 2542–2549.
前列环素合酶酪氨酸硝化增强与2型糖尿病患者动脉粥样硬化颈动脉炎症增加相关
来自俄克拉何马州俄克拉荷马市俄克拉荷玛大学健康科学中心内分泌与糖尿病科医学系
摘要
前列环素合酶（PGIS）在患病动物中被酪氨酸硝化。人类糖尿病动脉粥样硬化动脉中是否发生PGIS硝化尚未见报道。本研究旨在确定PGIS硝化及其与患有或不患有2型糖尿病患者动脉粥样硬化颈动脉炎症反应的关系，并从接受颈动脉内膜切除术的患者中获得颈动脉斑块。采用免疫组织化学和Western blotting检测PGIS硝化、一氧化氮合酶、粘附分子、髓过氧化物酶、骨桥蛋白和基质金属蛋白酶（MMP）。在狭窄程度较低的区域，糖尿病增强了活性氮的生成，3-硝基酪氨酸和PGIS硝化作用的增加证明了这一点。同时，糖尿病显著增加炎症标记物，包括细胞内粘附分子-1、血管粘附分子-1和骨桥蛋白。在糖尿病和非糖尿病患者中，与狭窄程度低的动脉相比，狭窄程度高的动脉中MMP-2和MMP-9蛋白水平显著升高。此外，糖尿病增强了低狭窄区斑块中诱导型一氧化氮合酶的表达，以及高狭窄区和低狭窄区的斑块中髓过氧化物酶的表达上调。这些数据表明，糖尿病优先增加与2型糖尿病患者动脉粥样硬化颈动脉过度血管炎症相关的PGIS硝化，这表明PGIS的酪氨酸硝化可能在糖尿病患者动脉粥样硬化的发展中起作用。
糖尿病增加了大血管和微血管并发症的风险。尤其是2型糖尿病患者，冠状动脉疾病和外周动脉疾病的发病率增加了两到四倍。1这可归因于多种风险因素，包括慢性高血糖、血脂异常和胰岛素抵抗，这些因素会诱发氧化应激并激活一些下游信号，从而介导糖尿病并发症并使动脉易受动脉粥样硬化影响。2
动脉粥样硬化（Atherosclerosis），以前被认为是一种脂质沉积疾病，现在被认为涉及持续的炎症反应，参与疾病的所有阶段，从发病到进展，最终到动脉粥样硬化的血栓并发症。越来越多的证据表明，糖尿病血管并发症的主要机制，如氧化应激和内皮功能障碍，可以加速动脉粥样硬化。2这些发现提供了糖尿病和动脉粥样硬化之间的重要联系。
炎症过程涉及多种物质，包括氧化剂、细胞因子和生长因子。三其中一组介质是由花生四烯酸通过环氧化酶作用产生的前列腺素。在前列腺素中，前列环素（PGI2)和血栓素A2（TXA2)它们在心血管疾病中的重要性引起了特别关注。4血管生成PGI的能力2对内皮完整性至关重要。PGI公司2在内皮细胞中由前列腺素内过氧化物（PGH）产生2)通过前列环素合成酶（PGIS）的作用。5PGIS失活导致PGH积聚2和TXA2激活血栓素A2受体（TP），在血管系统中诱导显著的炎症反应。6，7
氧化应激是糖尿病血管并发症发生和发展的关键介质。8许多基础和临床研究表明，高血糖增强的氧化应激会导致内皮功能障碍，这是糖尿病并发症的早期标志。体外离体动脉暴露于高浓度葡萄糖可减弱内皮依赖性舒张。9一贯地，体内研究还表明，高血糖会导致糖尿病和非糖尿病患者的内皮功能障碍。10，11此外，抗氧化剂可以抵消高血糖的急性影响。12，13，14超氧化物的过度生成，伴随着一氧化氮生成的增加，有利于形成一种高活性物质，过氧化亚氮（ONOO负极).15，16，17奥诺负极可与蛋白质、脂类和DNA引发硝化和氧化反应。ONOO的特征反应负极是蛋白质结合酪氨酸残基的硝化。15，16，17奥诺负极据报道，通过一种依赖PGIS硝化的机制诱导内皮功能障碍。18例如，外源性ONOO负极通过硝化改性使PGIS失活，导致PGI降低2血管收缩剂前列腺素的积累18从糖尿病动物身上采集的血管。19，20，21
虽然发现PGIS在患病动物体内被硝化，22PGIS硝化是否发生在人类糖尿病动脉中，以及它是否与糖尿病患者动脉粥样硬化的发展相关，尚未见报道。因此，我们评估了患有或不患有2型糖尿病患者颈动脉低、高程度狭窄时，PGIS硝化与炎症之间的关系。
材料和方法
所有调查都得到了医院机构审查委员会的批准，并获得了所有患者的知情同意。研究组包括21名2型糖尿病患者和19名无症状颈动脉狭窄的非糖尿病患者。这些患者因颅外高度（>70%）颈内动脉狭窄接受颈动脉内膜切除术。23根据北美症状标准，通过重复多普勒超声和动脉内脑血管造影确定管腔狭窄程度。根据美国糖尿病协会标准对糖尿病进行分类。24糖尿病患者正在服用二甲双胍作为抗糖尿病治疗。患者的临床特征总结如下.
表1
| 变量 | 非糖尿病 | 糖尿病 |
|---|
| N个 | 19 | 21 |
| 年龄，y | 66±4 | 69 ± 5 |
| 性别，男性/女性 | 10/9 | 11/10 |
| 高血压 | 19 | 21 |
| 空腹血糖，mg/dl | 90.5±11.0 | 130.2 ± 42* |
| 糖化血红蛋白，% | 5.4 ± 0.1 | 7.8 ± 0.9* |
| 甘油三酯，mg/dl | 128.7 ± 63.4 | 149.3 ± 76.1 |
| 积极治疗，n个 | | |
| 他汀类药物 | 10 | 15 |
| 胰岛素 | — | — |
| 二甲双胍 | — | 21 |
| ACE抑制器 | 8 | 8 |
| 中国建设银行 | 8 | 6 |
动脉切除标本
手术后，标本分为两部分：一部分来自低狭窄区域（斑块边缘区域；)另一个来自高度狭窄区域（斑块中心区域；). 立即将试样浸入10%的缓冲福尔马林中。切片连续切割成5μm，安装在赖氨酸涂层载玻片上，并用H&E方法染色。颈动脉标本通过光学显微镜进行分析。
糖尿病和非糖尿病患者动脉粥样硬化斑块中3-硝基酪氨酸（3-NT）和PGIS的克隆化。A类和B类：低狭窄区域的典型示例(A类)和高度狭窄区域(B类). 切片用H&E染色。抄送：动脉粥样硬化斑块双重染色的典型例子。顶部：动脉粥样硬化斑块中PGIS（绿色）的免疫染色。中间：同一切片的3-NT（红色）免疫反应。底部：来自3-NT和PGIS染色的合并图像；请注意，3-NT染色（红色）与PGIS染色（绿色）共定位，黄色表示3-NT免疫反应性和PGIS染色共定位。将正常兔或小鼠免疫球蛋白组分替换为一级抗体作为阴性对照。D类和电子邮箱：显示了3-NT和PGIS免疫组织化学染色的定量分析。所有数据均表示平均值±SEM；非糖尿病组，n个= 19; 糖尿病组，n个= 21.
免疫组织化学
切片脱蜡、复水并用5%的正常血清封闭。然后用特定抗体培养切片：抗内皮一氧化氮合酶（eNOS；BD Transduction Laboratories，San Jose，CA）、抗诱导型一氧化氮合酶、抗髓过氧化物酶（MPO；Santa Cruz Biotechnology，Inc.，Santa Cruz，CA）和抗细胞间粘附分子-1（ICAM-1；Santa Cruz Biotechnology，Inc.）、抗血管细胞粘附分子1（VCAM-1；Santa Crux Biotechnology，Inc）、抗骨桥蛋白（Abcam，Cambridge，MA）、抗基质金属蛋白酶（MMP）-2（Calbiochem，San Diego，CA）和MMP-9（Novocastra Laboratories Ltd.，Benton Lane，UK）。然后将切片与二级抗体孵育30分钟；使用3，3′-二氨基联苯胺或Avidin荧光D（Vector Laboratories，Burlingame，CA）观察阳性免疫反应。将正常兔或小鼠免疫球蛋白组分替换为一级抗体作为阴性对照。使用Vector Laboratories提供的试剂盒，按照公司提供的方案，在SLM 510激光扫描共焦显微镜（德国耶拿卡尔蔡司医疗技术公司）上对3-硝基酪氨酸（Upstate Biotechnology，Inc.，Billerica，MA）和PGIS（Cayman Chemical，Ann Arbor，MI）进行双重染色。
组织学定量分析
使用基于个人计算机的8位彩色图像分析系统进行实验分析。简而言之，切片是在奥林巴斯倒置显微镜（Olympus America，Melville，NY）下观察的。序列图像是使用Retiga 1300彩色制冷相机和Q捕获软件（QImaging，Burnaby，BC，Canada）拍摄的。使用Bioquant分析系统（田纳西州纳什维尔）测量染色面积，并定义免疫染色的颜色阈值掩模，通过采样检测红色。对所有标本应用相同的阈值。记录每个截面的阳性总面积百分比。
细胞培养和处理
在Ham’s F12培养基、10%胎牛血清、100μg/ml肝素和30μg/ml内皮细胞生长补充剂中培养人主动脉内皮细胞（HAEC；American Type Culture Collection，Rockville，MD）。细胞接种在60×15mm培养皿中，培养皿预先涂有0.1%猪明胶。当它们汇合时，这些细胞被用于实验。将HAEC与棕榈酸酯（100μmol/L）、高糖（30 mmol/L）或棕榈酸酯加高糖培养72小时。孵育后，提取细胞蛋白，并对细胞裂解物进行免疫沉淀和Western blot分析。
免疫沉淀和Western Blot分析
如前所述，通过免疫沉淀和Western blotting鉴定细胞提取物中PGIS的硝化作用。25，26，27在裂解缓冲液中制备总细胞裂解物（1%Triton X-100、150 mmol/L NaCl、10mmol/L Tris、pH 7.4、1mmol/L EDTA、1mmol/L EGTA、0.2 mmol/L-苯甲基磺酰氟、0.2 mmol/L原钒酸钠和0.5%Nonide P-40），并使用Bradford分析测定蛋白质含量。可溶性蛋白与10μg抗硝基酪氨酸单克隆抗体孵育。用蛋白A Sepharose CL-4B沉淀免疫复合物，通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行拆分，并将其印在硝化纤维素膜上。然后用适当的一级抗体孵育细胞膜，并如前所述进行分析。28，29
PGIS活性测定
通过测定PGI的稳定代谢物来测定PGIS活性2，6-酮-PGF1α细胞与其底物PGH孵育后2(10−5mol/L持续3分钟）。18，30简言之，与PGH孵育后2用1 N HCl酸化至pH 3.5，停止反应。用乙酸乙酯萃取培养基。离心后，有机相在氮气下蒸发干燥。然后将样品重新悬浮在100μl PBS中1α和PGE2随后根据供应商提供的说明，使用酶联免疫吸附测定试剂盒（Cayman Chemicals）进行测定。
统计分析
数据以平均值±标准误差表示。显著性通过单向方差分析确定，然后采用Bonferroni方法。P（P）<0.05被认为具有统计学意义。
结果
糖尿病诱导颈动脉斑块中前列腺素合酶硝化
我们开始使用双标记免疫荧光技术研究颈动脉斑块中PGIS是否被硝化。我们首先检测了糖尿病和非糖尿病患者颈动脉斑块中3-硝基酪氨酸的形成，这通常被视为活性氮物种的指标。在糖尿病和非糖尿病患者的斑块中，3-硝基酪氨酸的染色面积在高狭窄区较低狭窄区显著增加。糖尿病诱导高、低狭窄区斑块中更多3-硝基酪氨酸的形成与3-硝基酪氨酸的改变类似，糖尿病人和非糖尿病人的高狭窄区斑块中PGIS的表达增加。在这两个区域，糖尿病斑块的PGIS水平较高重要的是，绿色和红色荧光的合并共聚焦图像提供了黄色，以指示斑块中抗PGIS和抗硝基酪氨酸的共定位区域，这表明与这两种抗体的染色模式相同表明PGIS是ONOO硝化的主要蛋白质负极在颈动脉斑块中。这些发现表明，糖尿病增加了活性氮的生成，导致PGIS的酪氨酸硝化。
高血糖和棕榈酸酯增加PGIS的硝化作用并降低其活性
2型糖尿病的两个特征是高血糖和游离脂肪酸增加。为了进一步证实糖尿病诱导PGIS的酪氨酸硝化，我们用高糖处理HAEC以模拟高血糖，用棕榈酸酯模拟游离脂肪酸升高72小时。与对照组相比，高糖和棕榈酸单独增加3-硝基酪氨酸水平。值得注意的是，事实证明，高糖和棕榈酸酯的组合在诱导氧化应激方面更有效结果，通过免疫沉淀和Western blot分析，在暴露于高糖或单独棕榈酸酯的细胞中，PGIS硝化增加，高糖加棕榈酸酯使硝化的PGIS增加PGIS活性，通过测量PGI的分解产物来判断2，6-酮-PGF1α在用高糖或棕榈酸酯处理的细胞中显著降低。值得注意的是，高糖和棕榈酸酯的结合进一步降低了PGIS活性.这些在体外实验支持糖尿病增加活性氮生成，诱导PGIS硝化，并抑制PGIS活性。
高糖和棕榈酸酯会增加前列环素合酶硝化作用，并降低其在HAEC中的活性。答：将HAEC与棕榈酸酯（Pal；100μmol/L）、高糖（HG；30 mmol/L）或高糖加棕榈酸酯培养72小时。孵育后，提取细胞蛋白，如材料和方法用3-硝基酪氨酸（3-NT）抗体对细胞裂解产物进行Western blot分析。该斑点是来自三个不同实验的三个斑点的代表。B类：PGIS是从棕榈酸酯、高糖或高糖加棕榈酸酯处理的HAEC中免疫沉淀的；Western blots（WB）检测到PGIS和3-NT。该斑点是来自三个不同实验的三个斑点的代表。抄送：通过分析PGF评估PGIS活性α1，PGI的降解成分2，使用酶联免疫分析，n个= 5. *P（P）与对照组相比<0.05；†P（P）与棕榈酸酯或高糖相比，<0.05。
糖尿病对eNOS、iNOS和MPO表达的调节
接下来，我们通过eNOS、iNOS和MPO染色检查了活性氮物种的潜在来源。在非糖尿病斑块中，eNOS在高狭窄区域表达升高。与非糖尿病斑块相比，高狭窄区域的糖尿病斑块显示eNOS染色较弱在低狭窄区的斑块中，糖尿病患者iNOS的免疫反应更为丰富。在非糖尿病患者的斑块中，iNOS的免疫反应在高狭窄区较低狭窄区增强髓过氧化物酶是一种白细胞衍生酶，可催化许多活性氧化物质的形成，并已成为动脉粥样硬化发展的潜在参与者。MPO的免疫组织化学染色在低度和高度狭窄区域均因糖尿病而增强。在非糖尿病斑块中，在高度狭窄区域增加3-硝基酪氨酸和MPO的双重染色显示，3-硝基酪酸的染色区域大于MPO的染色区域，因此这两种染色只有部分重叠.
糖尿病和非糖尿病患者颈动脉斑块中eNOS和iNOS表达的形态学分析。答：代表性切片显示eNOS的特异性免疫反应（绿色信号；顶部).底部：典型的显微照片显示iNOS免疫反应（红色信号）。B类和抄送：显示了eNOS和iNOS免疫组织化学定量形态计量学测量。数据表示为平均值±SEM；非糖尿病组，n个= 19; 糖尿病组，n个= 21.
糖尿病增加颈动脉斑块中MPO的表达。答：免疫组织化学显示MPO在糖尿病和非糖尿病颈动脉斑块中的表达不同。B类：MPO免疫染色的定量显示。图像分析表明，糖尿病增加了低和高狭窄区域斑块中MPO的表达。数据表示为平均值±SEM；这些结果是21个糖尿病斑块和19个非糖尿病斑块的典型结果。C：显示了动脉粥样硬化斑块中的3-NT和MPO双重染色。
糖尿病和非糖尿病颈动脉斑块炎症标志物的变化
在动物模型中，PGIS在早期动脉粥样硬化病变中被硝化和灭活，22PGIS的抑制通过TP受体刺激培养的内皮细胞增加内皮炎症。6为了研究硝化PGIS是否与人类动脉粥样硬化斑块中的炎症反应相关，我们对糖尿病患者的几种炎症标记物进行了染色，包括ICAM-1、VCAM-1和骨桥蛋白。来自低狭窄区域的糖尿病斑块显示出比非糖尿病斑块更强烈的ICAM-1染色。非糖尿病患者高狭窄区斑块中ICAM-1免疫组化染色升高同样，VCAM-1的免疫染色在低狭窄区域的糖尿病切片中更为丰富，而在非糖尿病斑块的高狭窄区域中VCAM-1染色增加骨桥蛋白（OPN）最初在成骨细胞中被鉴定为矿化调节基质蛋白，是一种多功能蛋白，在多种急慢性炎症条件下上调，包括伤口愈合、纤维化和动脉粥样硬化。OPN在动脉粥样硬化斑块中高度表达，尤其是在巨噬细胞和泡沫细胞中。在动脉粥样硬化的背景下，OPN通常被视为一种促炎症和促动脉粥样硬化分子。31在糖尿病和非糖尿病患者中，高狭窄区域的斑块中骨桥蛋白染色增强。与非糖尿病斑块相比，来自低狭窄区域的糖尿病斑块中骨桥蛋白表达升高因此，这些分析证实了糖尿病斑块中存在较高的炎症反应。
糖尿病和非糖尿病患者斑块中ICAM-1和VCAM-1的免疫组织化学检测。答： 顶部：用特异性抗体（红色信号）对VCAM-1进行免疫染色。底部：ICAM-1的代表性免疫染色（绿色信号）。B类和抄送：VCAM-1和ICAM-1免疫组织化学染色定量显示。所有数据均表示为平均值±SEM；非糖尿病组，n个= 19; 糖尿病组，n个= 21.
骨桥蛋白在糖尿病和非糖尿病患者人类动脉粥样硬化斑块中的表达。答：典型的显微照片显示糖尿病和非糖尿病患者石蜡切片上骨桥蛋白（棕色信号）的表达。B类：OPN免疫染色定量分析。数据表示为21名糖尿病患者和19名非糖尿病患者的平均值±SEM。
基质金属蛋白酶在糖尿病和非糖尿病患者斑块中的表达
基质金属蛋白酶一直与动脉粥样硬化和斑块破裂的病理生理学有关。为了确定MMP在患者动脉粥样硬化斑块中的表达，我们用特异性抗体免疫组织化学方法分析了糖尿病和非糖尿病患者颈动脉斑块中MMP-2和MMP-9的蛋白水平。如所示，糖尿病和非糖尿病患者高狭窄区斑块中MMP-2染色显著增加类似于3-硝基酪氨酸的变化，糖尿病显著增加了低狭窄区和高狭窄区斑块中MMP-9的水平.
颈动脉斑块中MMP-2和MMP-9的免疫组织化学分析。答： 顶部：代表性横截面显示MMP-2的特异性免疫反应。底部：颈动脉粥样硬化病变的MMP-9免疫染色显示。MMP-2的定量(B类)和MMP-9(C类)免疫组化染色显示。数据表示为21名糖尿病患者和19名非糖尿病患者的平均值±SEM。
讨论
在这项研究中，我们证明，在动脉粥样硬化开始的低狭窄区域的人类颈动脉斑块中，糖尿病增强了PGIS的酪氨酸硝化，伴随着炎症标记物（包括ICAM-1、VCAM-1和骨桥蛋白）的显著增加。在高狭窄区域的糖尿病斑块中，PGIS硝化增加与MMP-9蛋白水平增加相关。此外，糖尿病增强了低狭窄区斑块中iNOS的表达，并上调了高狭窄区和低狭窄区MPO的表达。这些发现支持PGIS的酪氨酸硝化与2型糖尿病患者动脉粥样硬化颈动脉过度炎症反应相关。
糖尿病增加氧化应激和亚硝化应激，引发内皮功能障碍，这是动脉粥样硬化的早期事件。32，33血管细胞能够产生ONOO负极因为它们能够同时释放超氧物和NO。以前的研究表明，高糖可以促进血管细胞产生超氧物，6它可能来自NADPH氧化酶、黄嘌呤氧化酶、线粒体呼吸链、花生四烯酸级联反应（包括脂氧合酶和环氧合酶）以及微粒体酶。34高糖对培养的内皮细胞中eNOS的影响是一个有争议的话题，因为有证据表明两者都会增加33并且减少了35已在文献中发表。在这项研究中，我们没有发现糖尿病患者和非糖尿病患者在低狭窄区斑块中eNOS的表达存在显著差异，尽管糖尿病似乎降低了高狭窄区斑块的eNOS表达。我们的数据表明，NO增加可能是iNOS表达增加所致。Cromheeke等人36已经报道了iNOS和硝基酪氨酸在动脉粥样硬化斑块中的共定位，作者指出iNOS在产生NO的斑块中具有酶活性，NO与超氧物反应形成ONOO负极反过来，ONOO负极蛋白质的硝化酪氨酸残基。37
MPO是一种哺乳动物酶，对先天免疫防御和其他炎症过程至关重要。存在于粒细胞中36和巨噬细胞38人类动脉粥样硬化斑块；MPO在催化人体动脉壁靶蛋白的氧化和硝化修饰中发挥作用。在目前的研究中，我们发现糖尿病增加了狭窄程度低和狭窄程度高的区域的MPO表达，3-硝基酪氨酸和MPO染色只有部分重叠，表明MPO部分参与了动脉粥样硬化斑块中3-硝基酪酸的形成。这些结果与我们之前的发现一致，即MPO的产物次氯酸钠会增加ONOO负极以及通过NADPH氧化酶产生超氧化物，导致eNOS解偶联和内皮功能障碍。39
虽然NO被认为是一种重要的血管扩张剂，但其在动脉粥样硬化形成中的作用仍有争议。NO可能通过减少氧化应激、单核细胞募集和平滑肌细胞增殖来预防动脉粥样硬化。然而，高剂量NO通过诱导细胞凋亡、基质破坏和ONOO促进动脉粥样硬化的形成负极形成。40在目前的研究中，我们提供了令人信服的证据，证明糖尿病会增强ONOO负极颈动脉低狭窄区和高狭窄区的形成。我们还发现糖尿病患者斑块中3-硝基酪氨酸的染色面积显著增大，并且在体外高糖加棕榈酸酯增加了3-硝基酪氨酸的形成。重要的是，使用双重染色技术，我们发现3-硝基酪氨酸染色主要与PGIS染色共定位，这表明PGIS可能是ONOO硝化的主要蛋白负极在人类中。用ONOO硝化PGIS负极可能是糖尿病血管并发症的重要机制。二十碳五烯酸是内皮细胞正常内稳态的重要参与者。德克萨斯州2是血小板聚集、血栓形成和血管收缩的有效激动剂，而PGI2导致cAMP增加，使血小板失活，抑制血栓形成，是一种有效的血管扩张剂。在内皮细胞和平滑肌细胞中，ONOO负极用报告的（半最大抑制浓度）IC在极低浓度下容易硝酸化和灭活PGIS50=100毫摩尔/升。41PGIS失活导致PGI降低2和PGH的积累2在血管组织内激活TP受体，6，7触发血小板聚集、血栓、血管痉挛、细胞凋亡和粘附分子的表达。6先前的研究表明，TP拮抗剂S18886增加了糖尿病小鼠血管组织中eNOS的表达并降低了炎症标记物。7与这些数据一致，我们发现糖尿病增加了低狭窄区域斑块中ICAM-1和VCAM-1的表达。此外，骨桥蛋白（一种促炎细胞因子）的表达也因糖尿病而升高。因此，通过ONOO硝化PGIS负极可能是糖尿病动脉炎症反应的重要机制，可能有助于2型糖尿病患者动脉粥样硬化的加速。
在糖尿病患者高狭窄区域的斑块中，PGIS硝化增加与MMP-9蛋白水平增加相关。基质金属蛋白酶属于锌依赖性内肽酶家族，可促进细胞外基质中成分的降解。42最近，一些证据表明，基质金属蛋白酶可能削弱纤维帽，继而破坏动脉粥样硬化病变的稳定性。43高糖诱导MMP-2和MMP-9表达并增加其活性。44，45S188886抑制TP受体可降低MMP的表达和活性。46总的来说，这些报告表明，TP受体的刺激不仅可以促进动脉粥样硬化的进展，还可以将病变转化为不稳定表型。因此，TP抑制剂预防斑块失稳的可能性值得进一步研究。
总之，我们已经报道过高血糖会增加PGIS的氧化应激和酪氨酸硝化，导致PGI降低2和PGH的积累2和TXA2TP受体的相关激活增加了血管系统的炎症反应，6，7动脉粥样硬化的主要病理过程。因此，糖尿病增强的PGIS酪氨酸硝化可能在糖尿病患者动脉粥样硬化加速中发挥作用。
脚注
向谢忠林（医学博士，博士，地址：俄克拉何马州俄克拉荷马市斯坦顿L.杨大道941号俄克拉何玛大学医学部内分泌与糖尿病科基础科学教育大楼302室，邮编：73104）发送转载请求。电子邮件：ude.cshuo@eixz.
由国家卫生研究院拨款（1P20RR024215-01至Z.X.）、美国心脏协会（Z.X.X）的科学家发展拨款和俄克拉荷马州科学技术促进中心（Z.X）拨款支持。
工具书类
- Beckman JA、Creager MA、Libby P.糖尿病和动脉粥样硬化：流行病学、病理生理学和管理。JAMA公司。2002;287:2570–2581.[公共医学][谷歌学者]
- Biondi-Zoccai GG、Abbate A、Liuzzo G、Biasuci LM。动脉粥样硬化、炎症和糖尿病。美国心脏病杂志。2003;41:1071–1077.[公共医学][谷歌学者]
- Libby P、Ridger PM、Maseri A.炎症和动脉粥样硬化。循环。2002;105:1135–1143.[公共医学][谷歌学者]
- Kobayashi T、Tahara Y、Matsumoto M、Iguchi M、Sano H、Murayama T、Arai H、Oida H、Yurgi-Kobayash T、Yamashita JK、Katagiri H、Majima M、Yokode M、Kita T、Narumiya S。血栓素A（2）和前列环素在apoE缺乏小鼠动脉粥样硬化形成中的作用。临床投资杂志。2004;114:784–794. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
- Linton MF、Fazio S.环氧合酶-2与动脉粥样硬化。当前Opin Lipidol。2002;13:497–504.[公共医学][谷歌学者]
- Zou MH、Shi C、Cohen RA。高糖通过过氧亚硝酸盐导致酪氨酸硝化和前列环素合成酶失活，与血栓烷/前列腺素H（2）受体介导的细胞凋亡和粘附分子表达有关。糖尿病。2002;51:198–203.[公共医学][谷歌学者]
- Zuccollo A、Shi C、Mastroianni R、Maitland-Toolan KA、Weisbrod RM、Zang M、Xu S、Jiang B、Oliver-Krasinski JM、Cayatte AJ、Corda S、Lavielle G、Verbeuren TJ、Cohen RA。血栓素A2受体拮抗剂S18886可防止糖尿病引起的动脉粥样硬化加剧。循环。2005;112:3001–3008.[公共医学][谷歌学者]
- Ceriello A.对氧化应激和糖尿病并发症的新见解可能导致“因果”抗氧化疗法。糖尿病护理。2003;26:1589–1596.[公共医学][谷歌学者]
- Bohlen HG，Lash JM。局部高血糖快速抑制EDRF介导的正常大鼠小动脉血管扩张。美国生理学杂志。1993;265：H219–H225。[公共医学][谷歌学者]
- Giugliano D、Marfella R、Coppola L、Verrazzo G、Acampora R、Giunta R、Nappo F、Lucarelli C、D’Onofrio F。L-精氨酸可逆转人类急性高血糖的血管效应：高血糖期间一氧化氮可用性降低的证据。循环。1997;95：1783年至1790年。[公共医学][谷歌学者]
- Kawano H、Motoyama T、Hirashima O、Hirai N、Miyao Y、Sakamoto T、Kugiyama K、Ogawa H、Yasue H。高血糖快速抑制肱动脉的血流介导内皮依赖性血管舒张。美国心脏病杂志。1999;34:146–154.[公共医学][谷歌学者]
- Tesfamariam B，科恩RA。自由基介导葡萄糖升高引起的内皮细胞功能障碍。美国生理学杂志。1992;263：H321–H326。[公共医学][谷歌学者]
- Marfella R、Verrazzo G、Acampora R、La MC、Giunta R、Lucarelli C、Paolisso G、Ceriello A、Giugliano D。谷胱甘肽可逆转健康受试者急性高血糖引起的全身血流动力学变化。美国生理学杂志。1995年；268：E1167–E1173。[公共医学][谷歌学者]
- Ting HH、Timimi FK、Boles KS、Creager SJ、Ganz P和Creager MA。维生素C可改善非胰岛素依赖型糖尿病患者的内皮依赖性血管舒张功能。临床投资杂志。1996;97:22–28. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
- Beckman JS、Beckman TW、Chen J、Marshall PA、Freeman BA。过氧亚硝酸盐产生的明显羟自由基：一氧化氮和超氧化物对内皮损伤的影响。美国国家科学院程序。1990;87:1620–1624. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
- 贝克曼JS，科佩诺WH。一氧化氮、超氧物和过氧亚硝酸盐：好的、坏的和丑陋的。美国生理学杂志。1996;271：C1424–C1437。[公共医学][谷歌学者]
- Beckman JS，Chen J，Ischiropoulos H，Crow JP。过氧亚硝酸盐的氧化化学。方法酶制剂。1994;233：229–240。[公共医学][谷歌学者]
- Zou MH，Ullrich V.通过同时产生一氧化氮和超氧化物形成的过氧亚硝酸盐选择性地抑制牛主动脉前列环素合酶。FEBS信函。1996;382:101–104.[公共医学][谷歌学者]
- Tesfamariam B，Jakubowski JA，Cohen RA。内皮衍生PGH2-TxA2引起的糖尿病兔主动脉收缩。美国生理学杂志。1989;257：H1327–H1333。[公共医学][谷歌学者]
- Dai FX，Diederich A，Skopec J，Diedrich D.链脲佐菌素治疗大鼠糖尿病诱导的内皮功能障碍：前列腺素内过氧化物和自由基的作用。《美国肾脏病杂志》。1993;4:1327–1336.[公共医学][谷歌学者]
- Shimizu K、Muramatsu M、Kakegawa Y、Asano H、Toki Y、Miyazaki Y、Okumura K、Hashimoto H、Ito T。前列腺素H2作为内皮源性收缩因子在糖尿病状态下的作用。糖尿病。1993;42:1246–1252.[公共医学][谷歌学者]
- Zou MH，Leist M，Ullrich V.前列环素合成酶的选择性硝化和动脉粥样硬化牛冠状动脉中的血管舒张缺陷。《美国病理学杂志》。1999;154:1359–1365. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
- Young B、Moore WS、Robertson JT、Toole JF、Ernst CB、Cohen SN、Broderick JP、Dempsey RJ、Hosking JD。无症状颈动脉粥样硬化研究中围手术期死亡率和发病率的分析。ACAS调查员。无症状颈动脉硬化症研究。(打、击等的)一下。1996;27:2216–2224.[公共医学][谷歌学者]
- 糖尿病诊断和分类专家委员会的报告：糖尿病护理。2003;26（补充1）：S5–S20。[公共医学][谷歌学者]
- Xie Z，Dong Y，Scholz R，Neumann D，Zou MH.蛋白激酶C-zeta使LKB1在丝氨酸428处磷酸化是二甲双胍增强内皮细胞AMP活化蛋白激酶活化所必需的。循环。2008;117:952–962. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
- 谢Z，张杰，吴杰，维奥莱特B，邹MH.内皮细胞AMP-活化蛋白激酶上调线粒体解偶联蛋白-2可减轻糖尿病患者的氧化应激。糖尿病。2008;57：3222–3230。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 已缩回
- Xie Z，Dong Y，Zhang M，Cui MZ，Cohen RA，Riek U，Neumann D，Schlattner U，Zou MH。过氧亚硝酸盐激活蛋白激酶C zeta调节培养内皮细胞中LKB1依赖性AMP激活的蛋白激酶。生物化学杂志。2006;281:6366–6375.[公共医学][谷歌学者]
- 谢Z，董毅，张杰，Scholz R，Neumann D，Zou MH.LKB1丝氨酸307作为新的磷酸化位点的鉴定，对其核质转运和内皮细胞血管生成至关重要。分子细胞生物学。2009;29:3582–3596. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
- Xie Z，Singh M，Siwik DA，Joyner WL，Singh K。骨桥蛋白抑制成年大鼠心脏成纤维细胞中白细胞介素-1β刺激的基质金属蛋白酶活性增加：蛋白激酶C-zeta的作用。生物化学杂志。2003;278:48546–48552.[公共医学][谷歌学者]
- Zou MH，Klein T，Pasquet JP，Ullrich V.白细胞介素1β通过内源性过氧亚硝酸盐的形成降低大鼠系膜细胞中前列环素合成酶的活性。生物化学J。1998;336（第2部分）:507–512. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
- Cho HJ、Cho HJ、Kim HS。骨桥蛋白：一种处于炎症、动脉粥样硬化和血管钙化交叉点的多功能蛋白质。当前动脉粥样硬化代表。2009;11:206–213.[公共医学][谷歌学者]
- Calles-Escandon J，Cipolla M.糖尿病与内皮功能障碍：临床观点。内分泌学修订版。2001;22:36–52.[公共医学][谷歌学者]
- Cosentino F、Hishikawa K、Katusic ZS、Luscher TF。高糖增加人主动脉内皮细胞中一氧化氮合酶的表达和超氧阴离子的生成。循环。1997;96:25–28.[公共医学][谷歌学者]
- Brownlee M.糖尿病并发症的生物化学和分子细胞生物学。自然。2001;414:813–820.[公共医学][谷歌学者]
- Ding Y、Vaziri ND、Coulson R、Kamanna VS、Roh DD。模拟高血糖、胰岛素和胰高血糖素对内皮一氧化氮合酶表达的影响。美国生理内分泌代谢杂志。2000;279：E11–E17。[公共医学][谷歌学者]
- Cromheeke KM、Kockx MM、De Meyer GR、Bosmans JM、Bult H、Beelaerts WJ、Vrints CJ、Herman AG。诱导型一氧化氮合酶与人类动脉粥样硬化斑块中的脂质氧化/过氧化迹象共存。心血管研究。1999;43:744–754.[公共医学][谷歌学者]
- White CR、Brock TA、Chang LY、Crapo J、Briscoe P、Ku D、Bradley WA、Gianturco SH、Gore J、Freeman BA。动脉粥样硬化中的超氧化物和过氧亚硝酸盐。美国国家科学院程序。1994;91:1044–1048. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
- Daugherty A、Dunn JL、Rateri DL、Heinecke JW。髓过氧化物酶是脂蛋白氧化的催化剂，在人类动脉粥样硬化病变中表达。临床投资杂志。1994;94:437–444. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
- 徐J，谢Z，Reece R，Pimental D，邹MH.次氯酸对内皮型一氧化氮合酶的解偶联作用：NAD（P）H氧化酶衍生超氧物和过氧亚硝酸盐的作用。动脉硬化血栓血管生物学。2006;26：2688–2695。[公共医学][谷歌学者]
- Bult H.一氧化氮与动脉粥样硬化：治疗的可能意义。今天的Mol Med。1996;2:510–518.[公共医学][谷歌学者]
- Zou M，Jendral M，Ullrich V.前列腺素合酶硝化后牛冠状动脉内前列腺素内过氧化物依赖性血管痉挛。英国药理学杂志。1999;126：1283–1292。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
- Galis ZS，Khatri JJ。基质金属蛋白酶在血管重塑和动脉粥样硬化中的作用：好的、坏的和丑陋的。圆形Res。2002;90:251–262.[公共医学][谷歌学者]
- Galis ZS、Sukhova GK、Lark MW、Libby P.人类动脉粥样硬化斑块脆弱区域基质金属蛋白酶表达增加和基质降解活性增加。临床投资杂志。1994;94:2493–2503. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
- Kadoglou NP、Daskalopoulou SS、Perrea D、Liapis CD。基质金属蛋白酶与糖尿病血管并发症。血管学。2005;56:173–189.[公共医学][谷歌学者]
- Death AK，Fisher EJ，McGrath KC，Yue DK。高糖改变两种关键血管细胞中基质金属蛋白酶的表达：对糖尿病动脉粥样硬化的潜在影响。动脉粥样硬化。2003;168:263–269.[公共医学][谷歌学者]
- Viles-Gonzalez JF、Fuster V、Corti R、Valdiviezo C、Hutter R、Corda S、Anand SX、Badimon JJ。动脉粥样硬化消退和TP受体抑制：S18886对斑块大小和组成的影响：一项磁共振成像研究。欧洲心脏杂志。2005;26:1557–1561.[公共医学][谷歌学者]
