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动脉粥样硬化斑块中的巨噬细胞异质性
布里斯托尔大学布里斯托尔心脏研究所，英国布里斯托尔皇家医院7级
致英国布里斯托尔BS2 8HW布里斯托尔皇家医院布里斯托尔大学布里斯托尔心脏研究所7层安德鲁·纽比的信函电话：+44 117 342 3583；传真：+44 117 342 3581；ku.ca.lotsirb@ybwen.a 摘要
审查目的
巨噬细胞和泡沫细胞在动脉粥样硬化及其临床后遗症期间的不同行为引发了一个问题，即所有这些活动是否都是单个细胞群的特性。
最近的调查结果
最近，具有不同表面标记和炎症行为模式的单核细胞亚群被描述为在动脉粥样硬化进展中具有互补作用。斑块中也发现了从这些单核细胞亚群中衍生出的各种巨噬细胞表型，以应对先天性和获得性免疫介质。根据功能特性和基因组特征，它们对斑块形成的各个方面可能有不同的影响，包括纤维帽和脂质核心的形成。
总结
单核细胞和巨噬细胞表型多样性在动脉粥样硬化形成中很重要。需要更多的工作来定义实验动物和人类不同泡沫细胞表型的一致标记集。需要进行细胞追踪研究以确定其与单核细胞亚型的关系。此外，表型的遗传和药理操作将有助于定义其功能并开发由此产生的治疗潜力。
关键词：动脉粥样硬化、免疫、炎症、巨噬细胞、单核细胞
简介：单核细胞/巨噬细胞在炎症和动脉粥样硬化中的作用
单核细胞和巨噬细胞是先天性和后天性免疫的重要伙伴，因此在动脉粥样硬化斑块的形成及其临床后遗症中发挥着多种作用（参见) [1]. 蛋白聚糖在血管内膜中捕获低密度脂蛋白[2]LDL的随后修饰部分通过产生趋化因子（包括CCL2）触发循环单核细胞的募集[三,4]. 这些单核细胞分化为巨噬细胞，巨噬细胞迁移到炎症部位，降解细胞外基质（ECM）屏障。巨噬细胞能有效吞噬并杀死任何专利感染生物体，并清除细胞碎片，包括在炎症过程中作为“附带损伤”被杀死的细胞(). 在动脉粥样硬化和其他黄色瘤中，巨噬细胞吸收修饰的低密度脂蛋白并转化为泡沫细胞巨噬细胞（FCM）[1]保持胆固醇再输出的能力[5]. 巨噬细胞也有助于提供炎症的免疫记忆。巨噬细胞、树突状细胞（以及潜在的其他细胞）将处理过的肽抗原与主要组织相容性复合体（MHC）和其他辅活化剂一起提供给T淋巴细胞[6]. 如果FCM和/或树突状细胞从斑块中退出，这可能发生在局部或次级淋巴组织中[7]. 获得性免疫的发展可能需要招募一个单独的单核细胞亚群来响应不同的趋化因子，包括CX三CL1和CCL5[4] (). 巨噬细胞可以产生促炎（如TNF-α、IFN-γ）和抗炎（如IL-10、转化生长因子（TGF-β））细胞因子，因此可以促进或抑制免疫反应[6]. 巨噬细胞也可以介导组织修复[8]; 在动脉粥样硬化中，巨噬细胞促进平滑肌细胞（SMC）从介质向内膜迁移，其增殖形成纤维帽[9]. 巨噬细胞（尤其是纤维细胞[10])可能直接促进ECM合成，而成骨样巨噬细胞促进钙化。FCM也会分泌血管生成因子，将输精管吸引到斑块中，就像它们在其他形式的肉芽肿中一样().
巨噬细胞多样性的起源两种不同单核细胞群的招募和不同介质的作用可能导致不同的巨噬细胞表型。摄取修饰的脂蛋白可将其转化为泡沫细胞，泡沫细胞可能在斑块形成中发挥多种功能。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子；脂多糖；M-CSF，巨噬细胞集落刺激因子。
患者患有冠状动脉粥样硬化，但死于继发于斑块破裂的冠状动脉血栓形成。在大多数情况下，这是由一个薄的、高度炎症的、缺乏胶原蛋白的纤维帽破裂引起的，纤维帽覆盖在一个大的、缺乏胶原的脂质核上[11]. 破裂最终是在心脏循环的血流动力学压力下，受损帽的机械失效。巨噬细胞通过多种机制与斑块破裂密切相关。首先，巨噬细胞是细胞外蛋白酶的主要来源，可降解帽和核心中的胶原蛋白和其他ECM成分[9]. 第二，死亡配体、活性氧物种（包括一氧化氮和蛋白酶）的产生可导致SMC凋亡[12]从而导致纤维帽变薄[13]. 第三，FCM的死亡会引起脂质核心膨胀，特别是在晚期斑块中[14•]. 第四，巨噬细胞刺激侵入血管斑块基底，促进斑块内出血，导致核心进一步生长[11]. 斑块破裂往往导致非致命性冠状动脉血栓形成。在这种情况下，血栓发生重组，并由巨噬细胞的成纤维作用促进[15].
单核细胞亚群与动脉粥样硬化
小鼠循环单核细胞作为两个同样丰富的主要亚群存在，具有不同的细胞表面标记物和趋化因子受体表达模式，即Ly6C高的CCR2型+CX公司三CR1号机组低的与Ly6C相比低的中央控制室2−CX公司三CR1号机组高的赖氨酸6C高的单核细胞在循环中的寿命很短，并迅速转移到急性炎症病灶，例如最近的心肌梗死[8]和早期动脉粥样硬化斑块[三,4]. Ly6C的循环浓度高的单核细胞对促炎刺激和高胆固醇血症的反应增加[三,4]. 最近的两项研究一致认为Ly6C的招募高的中央控制室2+CX公司三CR1号机组低的单核细胞进入动脉粥样硬化斑块不仅依赖于趋化因子CCL2，还依赖于CX三因此，CL1和这些细胞因子途径的敲除具有额外的保护作用[16••,17••]. 其中一项研究[16••]但不是另一个[17••]建议动员Ly6C高的骨髓中的单核细胞有助于这种协同作用。相比之下，Ly6C低的单核细胞在循环中持续时间更长，参与所谓的巡视行为，与内皮细胞相互作用而不外渗[18]. 赖氨酸6C低的单核细胞在炎症和受损组织（包括梗死心肌）中的结合延迟[8]. Ly6C的招募低的单核细胞进入动脉粥样硬化斑块依赖CX三CL1而非CCL2，以及Ly6C的动员低的进入循环的单核细胞依赖于CCR5[4,16••]. 康巴迪埃等. [16••]表明CCR5的拮抗作用增加了对CCL2和CX缺陷小鼠动脉粥样硬化的保护作用三CL1通路[16••]并注意到在这些趋化因子敲除研究中，斑块大小和循环单核细胞数量之间存在线性关系，尤其是Ly6C低的人口。这些实验研究强调了具有广泛作用和延长时间框架的抗凝血因子干预的潜在价值，如最近慢病毒基因传递所示[19•].
观察到载脂蛋白E（ApoE）小鼠斑块和CX中CCL2水平快速升高三CL1仅在晚期和晚期斑块中[20]也符合两个单核细胞亚群顺序补充的想法，类似于心肌梗死后的情况[8]. 有趣的是，CX三具有不稳定斑块表型的斑块中CL1水平较高[20]这可能与单核细胞转化为树突状细胞的倾向增加有关。综上所述，这导致了一个颇具吸引力的假设，即修饰的低密度脂蛋白最初会吸入Ly6C高的单核细胞。斑块自身抗原（包括氧化低密度脂蛋白）的免疫反应优先通过Ly6C募集介导低的单核细胞[21]从而促进斑块的发展和不稳定性。实际上，来自Ly6C的巨噬细胞高的单核细胞处理与先天免疫相关的功能（左侧)，而那些来自Ly6C的低的单核细胞主要参与获得性免疫反应（右侧). 在这一点被接受之前，需要进行细胞追踪实验来阐明单核细胞亚群的命运，并且需要直接测试免疫调节对斑块不稳定性的影响。
人类中也存在单核细胞亚群[18]并表现出许多功能差异，包括清除氧化低密度脂蛋白的能力[22]. 丰富的CD14+CD16型−中央控制室2+人类的种群是Ly6C的表型等价物高的小鼠中的数量，而CD14的含量要少得多低的CD16型+CX公司三CR1号机组+种群是Ly6C的表型当量低的[18,23]. 然而，小鼠亚群的功能等价性尚不清楚，因此，将任何发现直接从小鼠推论到人类还为时过早。CD14的大多数+CD16型−中央控制室2+单核细胞似乎具有抗炎作用，因为它们对细菌脂多糖（LPS）产生细胞因子IL-10。相反，较小的CD14低的CD16型+CX公司三CR1号机组+人群似乎是促炎性的，因为它对脂多糖产生促炎介质，并显示在炎症状态（包括动脉粥样硬化）期间血浆水平升高[24]. 然而，令人困惑的是，最近的一项基因组研究得出结论，循环CD14+冠状动脉疾病患者的单核细胞表达更多的抗炎基因[25]. 在人类和小鼠中还有其他较小的亚群[18].
巨噬细胞异质性与动脉粥样硬化
如所示巨噬细胞的功能可大致分为一系列二分法，例如先天性或获得性免疫、组织破坏或修复、移行或移行、胆固醇积聚或释放、促炎性或抗炎性。原则上，这些功能可以由不同的巨噬细胞亚群或在某些情况下与不同单核细胞前体相关的谱系执行，如上文所述。戈登和泰勒[26]总结了存在两种广泛类型的巨噬细胞表型的证据，广泛称为经典活化（或M1）和交替活化（或M2），每一种都可以细分。最近，莫瑟和爱德华兹[27]提出至少存在三种表型，经典型、调节型和伤口愈合型，并进一步假设这些可能只是彩虹表型中可识别的节点。
进一步的进展取决于确定明确的标记或不同的表型，理想的功能，以及形态或简单的基因组。表型标记应独立于激活状态，不可逆或至少缓慢可逆，与具有相同表型的其他功能基因组标记一致相关，并可通过表观遗传修饰进行解释。
来源于体外分化巨噬细胞的标志物
许多研究使用候选基因或基因组方法比较了单核细胞分化或分化巨噬细胞在两种或两种以上条件下的激活。一些研究使用转化的髓系细胞系，如人类THP-1或U937细胞或小鼠RAW294.7髓系细胞，通过佛波肉豆蔻酸盐（PMA）分化为巨噬细胞样表型。例如，Ox-LDL摄取[28]或分泌型磷脂酶A2治疗[29]最近报道了在THP-1单核细胞中诱导树突状细胞的几种标志物。这些研究的一个局限性是担心转化和PMA治疗的联合效应掩盖或扭曲了正常的表型变异。
人类外周血单核细胞已通过多种不同的方式获得和纯化（例如新鲜血液与浅黄色涂层；淘洗与差速离心，塑料粘附与磁珠上的阳性或阴性选择）。大多数论文都没有系统地报道这些干预措施对不同纯化单核细胞群体的比例、其活性或污染物的识别的影响。在动物中，外周血、腹膜、肺泡和骨髓巨噬细胞都被用于有或无额外诱发刺激的情况。这些方法学因素无疑会影响随后观察到的基因表达模式。
随后用于分化和刺激细胞的条件对产生的表型也有重大影响。巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）或正常血清的分化产生了一个通常简称为“巨噬细胞”的群体。多种不同的促炎机制被用于将其转化为所谓的经典活化巨噬细胞[30]. 一般来说，LPS治疗比肽介质如TNF-α或IL-1β引起更广泛的基因组改变。这些激活NF-κB作为其信号机制主要部分的介质与使用其他途径的促炎介质协同作用，尤其是IFN-γ。这种联合治疗改变了总基因组的很大一部分[30]; 在功能上，它们上调吞噬作用、细菌杀伤机制、促炎介质和细胞外蛋白酶的产生，与[26]. 将M-CSF未分化的巨噬细胞与IL-4或IL-13孵育，产生所谓的交替激活的巨噬细胞，显示出与经典激活细胞的许多基因组差异[30,31]. 抗炎细胞因子IL-10和TGF-β的表达增加表明，交替激活的巨噬细胞抑制了经典的激活，导致反应极化。在经典激活过程中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的上调和在交替激活过程中与iNOS竞争底物的精氨酸酶-1的上调，也表明了对一氧化氮生成的重要反调节，增强了经典激活细胞的杀伤能力，抑制了交替激活细胞的杀伤力。趋化因子和趋化因子受体库发生了重大变化[30]，这可能允许交替激活的巨噬细胞离开炎症部位，进入次级淋巴组织并参与免疫调节。在交替激活的巨噬细胞中，平滑肌和内皮细胞募集介质（如血小板反应蛋白-1（TSP-1））和血管内皮生长因子A（VEGFA）的产生增加可能会增强其促进肉芽肿形成和最终组织修复的能力(). 事实上，最近发现TSP-1缺乏会损害小鼠动脉粥样硬化斑块中纤维帽的形成，并由于吞噬功能缺陷而促进炎症和坏死核心的形成[32•]. 清除受体的产生，如甘露糖受体（CD206），也表明交替激活的巨噬细胞在组织修复中的功能。
分离的巨噬细胞与氧化或乙酰化的LDL孵育已被广泛用作泡沫细胞形成的模型。氧化低密度脂蛋白增加金属蛋白酶-1（MMP-1）等经典活化标记物的表达[33]和iNOS，通过激活NF-κB。然而，它也诱导选择性激活标记，包括精氨酸酶-I，这是由于过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）的激活所致[34]. 其他研究显示树突状细胞标记物激活[28]. 修饰的低密度脂蛋白不同成分激活多种信号通路的能力可能是巨噬细胞表型方面这种相当复杂的行为的原因。
用IL-10或TGF-β孵育经典或交替激活的巨噬细胞会导致表型失活。例如，MHC-II复合物在两种巨噬细胞表型中均上调，在这两种情况下，IL-10均下调表达。因此，MHC-II可以被视为巨噬细胞活化的标志，而不是表型。
也可以产生其他巨噬细胞表型在体外用M-CSF和NF-κB配体受体激活剂（RANKL）分化单核细胞产生破骨细胞样巨噬细胞[35]. 单核细胞用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和IL-4、IL-13或IL-21分化产生具有许多树突状细胞特征的群体。
动脉粥样硬化斑块中观察到的表型可能与生成的表型不直接对应在体外最近的一项研究将单核细胞分化与M-CSF（M-巨噬细胞）或GM-CSF和IL-10（GM-macrophages）进行了比较[36•]. 转基因噬菌体具有圆形形态在体外并且过表达标志物25F9和参与胆固醇流出的基因。M-巨噬细胞被拉长并过度表达标记CD14和CD16，以及一些与选择性激活相关的基因，包括IL-13、MMP-12和CD163。根据CD14和CD16的表达，人类颈动脉斑块中M样斑块多于GM样斑块，但也存在中间型斑块。正常动脉段中以GM-like巨噬细胞为主，但缺乏25F9抗原，因此，25F9是一种活化而非表型标记物。这些研究说明了探索几个标记的共定位以确定特定表型存在的重要性。当然，在动脉粥样硬化斑块中，巨噬细胞不与单个细胞因子相互作用，而是与自分泌方式产生的介质汤以及其他组织和炎症细胞相互作用。将人单核细胞与混合的T淋巴细胞共同培养，根据CD14、CD36和LDL受体（LDLR）的表达将单核细胞分为三个不同的亚群[37]. 小鼠巨噬细胞与不同的辅助性T淋巴细胞群共培养产生不同的MMP反应[38].
非泡沫巨噬细胞和泡沫细胞巨噬细胞的体外研究体内
我们支持使用体外生成的FCM分析体内一种方法是直接消化斑块，但许多巨噬细胞无法在这种苛刻的过程中存活[三]. 为了避免这种困难，如所示，巨噬细胞可以侵入兔子或小鼠的皮下海绵，从而在正常胆固醇血症或高胆固醇血症时分别生成非泡沫巨噬细胞（NFM）或FCM[39]. FCM和NFM很容易从海绵中分离出来，并进行功能、形态和基因组分析。将此与基因转移和敲除相结合为研究功能提供了一个强大的平台(). 最后，可以使用免疫细胞化学（ICC）和其他工具在实验和人类斑块中验证主要结论。加利斯等. [40]使用该系统显示，FCM组成性地分泌MMP-1和MMP-3，我们随后通过基因操作显示了NF-κB稳定上调的结果[33]. 最近，我们发现以这种方式分离的兔FCM含有精氨酸酶-I下调（经典激活特征）和MMP-12上调（替代激活特征）的细胞群。精氨酸酶I下调或MMP-12上调的巨噬细胞在早期脂肪条纹中没有出现，但在兔和人斑块中都位于脂质核心附近[39,41]. 低精氨酸酶-I增加兔一氧化氮的生成并有利于动脉粥样硬化[39,42]. MMP-12过度表达促进兔动脉粥样硬化[43,44]而MMP-12基因敲除降低小鼠动脉粥样硬化和动脉瘤形成[45,46]. 这些观察结果表明，晚期斑块中的FCM同时受到经典激活和替代激活，这两种激活都可能对斑块演变产生不利影响（参见).
研究泡沫和非泡沫巨噬细胞功能的平台体内兔皮下海绵中非泡沫和泡沫细胞巨噬细胞的产生产生了pur制剂，可进行分析或基因转移，以确定可通过组织切片中的免疫细胞化学验证的功能。泡沫细胞巨噬细胞；免疫细胞化学；基质金属蛋白酶；NFM，非泡沫巨噬细胞。
最近，我们根据基质金属蛋白酶-14及其抑制剂组织抑制因子（TIMP）-3的差异表达，确定了兔皮下海绵中的FCM亚群[47••]. 基质金属蛋白酶14高的TIMP-3型低的与MMP-14相比，FCM在形态上更像成纤维细胞，通过基质凝胶更具侵袭性，增殖更快，在LPS或饥饿刺激下更容易发生凋亡低的TIMP-3型高的FCM。这些体外特性表明在脂质核心形成中发挥作用，并与此MMP-14一致高的TIMP-3型低的巨噬细胞位于脂质核心附近[47••]. 已知MMP-14受炎症细胞因子上调，而TIMP-3受IL-4上调而受IFN-γ下调[48]这表明MMP-14高的TIMP-3型低的FCM是经典激活的。
组织切片研究
多年来，人们已经认识到人类动脉粥样硬化斑块巨噬细胞的免疫化学异质性。波斯顿和侯赛因[49]这可能是由于最近招募的血源性巨噬细胞与长期驻留细胞之间的差异所致。各种CD标记物已被用于区分斑块中巨噬细胞和FCM的亚群。例如，CD14+巨噬细胞，类似于用M-CSF分化的巨噬细胞在体外在人类动脉粥样硬化斑块中占主导地位，而CD14−巨噬细胞，类似于GM-CSF处理的巨噬细胞在体外，在没有疾病的地区更为丰富[36•]. CD16被认为是斑块巨噬细胞部分通过CD40-CD40L参与获得性免疫反应的标志物[50]. 结合珠蛋白/血红蛋白受体CD163和甘露糖受体CD206与交替激活的巨噬细胞表型相关。例如，Bouhlel等. [51]最近在人颈动脉斑块巨噬细胞中发现了表达CD206和其他替代激活标志物的巨噬细胞，并注意到与FCM和经典激活标志物不同的分布。有趣的是，CD163和CD206没有共同分布，这表明斑块中可能至少有三种表型。波义耳等. [15]最近显示斑内出血引起CD163的积聚高的人类白细胞抗原（HLA）-DR低的巨噬细胞亚群，并提示这些NFM负责血栓溶解。因此，CD163可能是修复表型的标记[27]但也与抗炎症特征有关，如产生IL-10和血氧合酶-1[52]. 最近发现，人类和低密度脂蛋白受体阴性小鼠早期斑块中浅层和深层细胞因子间甘露糖结合凝集素A和C分布的差异；巨噬细胞坏死部位周围聚集的凝集素[53•]. 有趣的是，两种凝集素的联合敲除导致小鼠动脉粥样硬化加剧，这表明它们也是保护性巨噬细胞表型的标志物。
动脉粥样硬化斑块与其他慢性肉芽肿进行了比较。例如，结核结节像斑块一样，中央坏死区被纤维组织和微血管丛包围；两者都有散发性溃疡、出血和血栓形成，都含有处于各种激活状态的白细胞。科莫哈拉等. [54]发现结核肉芽肿周围的巨噬细胞主要是CD163+而肉芽肿内的巨噬细胞呈阴性或弱阳性。类似地，非泡沫CD163+在动脉粥样硬化斑块的外层观察到巨噬细胞，而在晚期病变中与高脂核心相关的FCM对CD163呈阴性或弱阳性[54]. 回忆起这种分布，我们发现了岛屿TIMP-3−由TIMP-3包围的FCM+人类动脉粥样硬化斑块肩部的FCM[47••]. MMP-7和MMP-12选择性地定位于人类斑块坏死核心和预防破裂肩部之间并列的巨噬细胞中[41]. MMP-11仅在晚期病变中检测到[55]. 因此，MMP水平的增加和TIMP-3的丢失可能是晚期斑块脂质核心内胶原降解的原因。
综上所述，这些观察结果为斑块中存在几种巨噬细胞表型提供了证据。最近招募的巨噬细胞和FCM可能具有不成熟、部分激活的表型，这与观察到的经典或替代激活模式都不相符在体外成熟的巨噬细胞和FCM可能会成为典型活化表型和交替活化表型的混合物，从而产生保护性或不良后果（参见). 血栓形成可能引发额外的修复表型。
遗传操作研究
有必要进行更广泛的审查，以记录剔除每个潜在标记基因以激活经典和替代巨噬细胞的结果。许多已经在最近的其他评论中讨论过[6,56]. 这里只需提到，有利于巨噬细胞经典活化的细胞因子或其受体（如IL-1β、IFN-γ）的缺失持续延缓动脉粥样硬化，并导致小鼠斑块表型更加稳定[6]. 最近的一项研究补充了这一文献，表明G蛋白偶联受体G2A的缺失增加了巨噬细胞的经典活化并促进动脉粥样硬化[57]. 替代激活的情况更令人惊讶。IL-4受体的缺失减少动脉粥样硬化[6]并显著减少小鼠动脉瘤的形成[58]. 因此，经典激活是不利的，而替代激活是有益的这一概念可能过于简单。
巨噬细胞表型的药理学调节
众所周知，皮质类固醇、雌激素、PPAR激动剂和肝脏X受体（LXR）激动剂的核激素受体[59-61]、抗炎细胞因子IL-10和TGF-β[6]都能使经典的和交替激活的巨噬细胞失活在体外和体内这些介质已被证明在总体上抑制炎症，并对动脉粥样硬化具有有益的影响。另一方面，这种好处是以增加对某些感染的敏感性和降低检测恶性肿瘤的能力为代价的。选择性影响巨噬细胞亚群的药物并不广泛，但可能提供不同的益处。核激素受体PPAR-γ和LXR-α在巨噬细胞交替激活过程中上调[59-61]. 巨噬细胞特异性过表达LXR-α可通过增加胆固醇流出并可能通过减少经典活化，大大减少小鼠动脉粥样硬化[62]. 相反，PPAR-γ的基因敲除最近被证明可以阻止小鼠巨噬细胞的替代激活[63]. 此外，Bouhlel等. [51]最近描述，PPAR-γ激活启动人类单核细胞向抗炎表型分化，该抗炎表型也表达更多PPAR-β，因此可能经历正反馈。然而，PPAR-γ激活也无法逆转经典激活或将巨噬细胞从经典激活程序转换为替代激活程序在体外或在斑块中[51]. 休斯最近的一项令人兴奋的研究等. [64•]相比之下，鞘氨醇-1-磷酸受体-1（S1P1）激动剂确实具有这种能力，至少在体外激活S1P1（一种鸟嘌呤核苷酸偶联受体）可降低LPS诱导的iNOS诱导和LPS对精氨酸酶-1的抑制，至少部分是通过NF-κB的拮抗。已知S1P1激动剂可减少小鼠动脉粥样硬化，因此，记录其对泡沫细胞表型的影响将是一件有趣的事情体内同样，关于新的抗炎方案（包括脂蛋白相关磷脂酶A2抑制剂）对巨噬细胞表型的影响的数据[65••]和丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶4[66••]，等待着。
结论
虽然单核细胞、巨噬细胞和最近的流式细胞仪的异质性越来越受到广泛的重视，但其对动脉粥样硬化和急性冠脉综合征的影响还只是刚刚开始研究。
定义几个标记是否一致地共分离，例如CD163+和MHCII−在组织血栓的巨噬细胞中[15]，将有助于识别不同的表型。在细胞追踪实验中，需要明确这些表型的数量和相互转化的程度。似乎趋化因子和其他炎症介质可能调控巨噬细胞表型分布，但细节还远未阐明。充分识别招募和激活单核细胞和巨噬细胞亚群所需的环境因素至关重要。尽管表型可逆性的证据有限在体外[67]，例如，有必要通过降脂实验来验证这一点体内围绕不同FCM表型在斑块生物学各个方面的作用（包括纤维帽形成和破坏）的问题也同样重要。迄今为止，经典活化的巨噬细胞似乎是斑块破坏和急性冠脉事件最明显的罪魁祸首，因为它们具有更强的杀死邻近细胞和破坏ECM的能力。然而，交替激活的巨噬细胞也可以通过免疫激活和表达有害的介质复合物（包括一些生长因子和蛋白酶）来促进斑块的进展。阐明FCM表型的作用和调节无疑将揭示新的常规治疗靶点或免疫调节策略，以减少心肌梗死。
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本期《当代世界文学》（第429-430页）中也有与本主题相关的其他参考文献。
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[本文表明，CX3CR1和CCL2的缺失对喂食ApoE缺失小鼠的动脉粥样硬化产生加性作用。CX3CR1和CCL2的缺失选择性地和加性地降低了Ly6C的血液水平高的单核细胞。使用CCR5抑制剂Met-RANTES治疗，可进一步减少动脉粥样硬化，并降低血Ly6C水平低的单核细胞。作者得出结论认为，单核细胞群体都会导致动脉粥样硬化，而趋化因子在骨髓水平上对其进行部分调节。][公共医学][谷歌学者] 17••.Saederup N，Chan L，Lira SA，Charo IF。Fractalkine缺乏显著减少CCR2（−/−）小鼠的巨噬细胞蓄积和动脉粥样硬化损伤形成：动脉粥样硬化形成中独立趋化因子功能的证据。循环。2008;117:1642–1648.
【手稿显示CCR2和CX3CL1的联合缺乏可额外减少脂肪喂养ApoE小鼠的动脉粥样硬化。CCR2缺失可减少循环Ly6C的数量高的单核细胞，但这并没有因CX3CL1缺失而进一步降低。作者得出结论，CX3CL1有助于单核细胞募集到局部病变中。他们还提示CCR2和CX3CL1可能在Ly6C中招募不同的亚群高的分数。] [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 18Geissmann F、Auffray C、Palframan R等。血液单核细胞：不同亚群，它们与树突状细胞的关系，以及它们在调节T细胞反应中的可能作用。免疫细胞生物学。2008;86:398–408.[公共医学][谷歌学者] 19•.Bursill CA，McNeill E，Wang L，等。通过长期抑制CC-细胞因子来转移慢病毒基因以减少动脉粥样硬化进展。基因疗法。2009;16:93–102.
[研究人员使用慢病毒载体将35-kDa广谱半胱氨酸-半胱氨酸趋化因子痘苗病毒抑制剂基因传递到小鼠肝脏。该蛋白在ApoE-null小鼠的血液中持续表达至少3个月，从而减少动脉粥样硬化。][公共医学][谷歌学者] 20Cheng C，Tempel D，van Haperen R，等。剪切应力诱导的动脉粥样硬化斑块成分变化受趋化因子调节。临床投资杂志。2007;117:616–626. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 21Geissmann F，Jung S，Littman DR。血液单核细胞由两个具有不同迁移特性的主要亚群组成。免疫。2003;19:71–82.[公共医学][谷歌学者] 22Mosig S，Rennert K，Krause S，等。单核细胞亚群在家族性高胆固醇血症中的不同功能：CD14（+）CD16（+）单核细胞在氧化低密度脂蛋白解毒中的潜在功能。美国财务会计准则委员会J。2009;23:866–874.[公共医学][谷歌学者] 23Libby P，Nahredorf M，Pittet MJ，Swirski FK。动脉粥样硬化斑块居民的多样性：并非所有单核细胞都是平等的。循环。2008;117:3168–3170.[公共医学][谷歌学者] 24Schlitt A、Heine GH、Blankenberg S等。冠心病中的CD14+CD16+单核细胞及其与血清TNF-α水平的关系。血栓止血。2004;92:419–424.[公共医学][谷歌学者] 25Schirmer SH、Fledderus JO、van der Laan AM等。冠心病患者单核细胞炎症信号的抑制。分子细胞心血管杂志。2009;46:177–185.[公共医学][谷歌学者] 26.Gordon S，Taylor PR.单核细胞和巨噬细胞异质性。Nat Rev免疫学。2005;5:953–964.[公共医学][谷歌学者] 27Mosser DM，Edwards JP。探索巨噬细胞激活的全谱。Nat Rev免疫学。2008;8:958–969. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 28Shen LH，Zhou L，Wang BY，et al.氧化低密度脂蛋白诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞系分化为树突状细胞。动脉粥样硬化。2008;199:257–264.[公共医学][谷歌学者] 29.Ibeas E、Fuentes L、Martin R等，分泌型磷脂酶A（2）IIA作为连接先天免疫和适应性免疫的介质：在动脉粥样硬化中的新作用。心血管研究。2009;81:54–63.[公共医学][谷歌学者] 30Martinez FO，Gordon S，Locati M，Mantovani A.人类单核细胞对巨噬细胞分化和极化的转录谱分析：新分子和基因表达模式。免疫学杂志。2006;177:7303–7311.[公共医学][谷歌学者] 31Martinez FO，Helming L，Gordon S.巨噬细胞的替代激活：免疫学功能观点。免疫学年度回顾。2008;27:451–483.[公共医学][谷歌学者] 32•.Moura R、Tjwa M、Vandervoort P等。血小板反应蛋白-1缺乏加速ApoE（−/−）小鼠动脉粥样硬化斑块的成熟。圆形Res。2008;103:1181–1259.
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[作者对分化的人血单核细胞进行了基因组比较在体外加入GM-CSF、M-CSF和IL-10。所谓的GM巨噬细胞具有圆形形态，过表达标记物25F9和参与胆固醇流出的基因。M-巨噬细胞被拉长并过度表达标记CD14和CD16，以及与M2表型相关的几个基因，包括IL-13、MMP-12和CD163。人类颈动脉斑块中M样斑块多于GM样斑块，但也存在中间型斑块。正常动脉段以GM样巨噬细胞为主，但缺乏25F9抗原。结果表明动脉粥样硬化中巨噬细胞表型的多样性，并提示其可塑性。] [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 37Wintergerst ES，Jelk J，Asmis R.人类单核细胞衍生巨噬细胞上CD14、CD36和LDL受体的差异表达。研究巨噬细胞分化和异质性的新型细胞培养系统。组织化学细胞生物学。1998;110:231–241.[公共医学][谷歌学者] 38Oviedo-Orta E、Bermudez-Fajardo A、Karanam S等。单独和与巨噬细胞共培养的T辅助细胞0、1和2分泌MMP-2和MMP-9的比较。免疫学。2008;124:42–50. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 39Thomas AC、Sala Newby GB、Ismail Y等。兔泡沫细胞和非泡沫巨噬细胞的基因组学鉴定精氨酸酶-I是一氧化氮产生的差异调节因子。动脉硬化血栓血管生物学。2007;27:571–577.[公共医学][谷歌学者] 40Galis ZS、Sukhova GK、Kranzhöfer R等。实验性动脉粥样硬化的巨噬细胞泡沫细胞组成性表达基质降解蛋白酶。美国国家科学院院刊。1995;92:402–406. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 41.Halpert I、Sires UI、Roby JD等。基质溶素在动脉粥样硬化病变中可能破裂的部位由脂溶性巨噬细胞表达，并定位于云芝沉积区，云芝是酶的蛋白多糖底物。美国国家科学院院刊。1996;93:9748–9753. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 42Teupser D、Burkhardt R、Wilfert W等。巨噬细胞精氨酸酶I作为动脉粥样硬化抵抗新候选基因的鉴定。动脉硬化血栓血管生物学。2006;26:365–371.[公共医学][谷歌学者] 43梁杰，刘娥，于毅，等。巨噬细胞金属弹性蛋白酶促进转基因兔动脉粥样硬化的进展。循环。2006;113:1993–2001.[公共医学][谷歌学者] 44Yamada S，Wang KY，Tanimoto A，等。基质金属蛋白酶12在转基因兔中加速动脉粥样硬化的发生，并刺激脂肪条纹向纤维斑块的进展。《美国病理学杂志》。2008;172:1419–1429. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 45Johnson JL、George SJ、Newby AC、Jackson CL。基质金属蛋白酶3、7、9和12对小鼠头臂动脉粥样斑块稳定性的发散作用。美国国家科学院院刊。2005;102:15575–15580. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 46Luttun A、Lutgens E、Manderveld A等。基质金属蛋白酶-9或基质金属蛋白酶-12的缺失可保护载脂蛋白E缺陷小鼠免受动脉粥样硬化介质破坏，但对斑块生长有不同影响。循环。2004;109:1408–1414.[公共医学][谷歌学者] 47••.Johnson JL、Sala-Newby GB、Ismail Y等。金属蛋白酶3的低组织抑制剂和高基质金属蛋白酶14水平定义了高度侵袭性泡沫细胞巨噬细胞的亚群。动脉硬化血栓血管生物学。2008;28:1647–1653.
【根据MMP-14和TIMP-3的差异表达，作者在皮下海绵渗出液中发现了两组兔FCM。基质金属蛋白酶-14高的TIMP-3型低的FCM被拉长，降解明胶，通过基质凝胶具有高度侵袭性，增殖更快，并且比MMP-14更容易发生凋亡低的TIMP-3型高的细胞呈圆形。通过免疫细胞化学，这两个群体同时出现在晚期兔斑块和人类颈动脉斑块的肩部区域。] [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 48Newby AC。单核细胞和巨噬细胞中金属蛋白酶的表达及其与动脉粥样硬化斑块不稳定性的关系。动脉硬化血栓血管生物学。2008;28:2108–2114.[公共医学][谷歌学者] 49Poston RN，Hussain IF。动脉粥样硬化巨噬细胞的免疫组织化学异质性：与淋巴组织的比较表明，最近的血源性巨噬细胞可以与长期驻留的细胞区分开来。组织化学与细胞化学杂志。1993;41:1503–1512.[公共医学][谷歌学者] 50Hakkinen T、Karkola K、Yla-Herttuala S.巨噬细胞、平滑肌细胞、内皮细胞和T细胞在脂肪条纹和更晚期的人类动脉粥样硬化病变中表达CD40和CD40L。氧化低密度脂蛋白、清道夫受体和CD16（Fc-γRIII）表位的定殖维丘建筑。2000;437:396–405.[公共医学][谷歌学者] 51Bouhlel MA、Derudas B、Rigamonti E等。PPARγ激活将人类单核细胞激活为具有抗炎特性的替代M2巨噬细胞。单元格元数据。2007;6:137–143.[公共医学][谷歌学者] 52Philippidis P、Mason JC、Evans BJ等。血红蛋白清除剂受体CD163介导白细胞介素-10的释放和血红素加氧酶-1的合成：体外、体内和体外循环手术后的抗炎单核巨噬细胞反应。圆形Res。2004;94:119–126.[公共医学][谷歌学者] 53•.Matthijsen RA、de Winther MPJ、Kuipers D等。甘露糖结合凝集素的巨噬细胞特异性表达控制低密度脂蛋白受体缺乏小鼠的动脉粥样硬化。循环。2009;119:2188–3101.
[早期但非晚期小鼠和人类动脉粥样硬化斑块的巨噬细胞中甘露糖结合凝集素A和C上调。骨髓细胞中这两种凝集素的联合敲除增加了LDLR敲除小鼠的动脉粥样硬化，这表明这些凝集素是动脉粥样硬化保护性巨噬细胞表型的标志物。][公共医学][谷歌学者] 54Komohara Y、Hirahara J、Horikawa T等。抗巨噬细胞抗体AM-3K识别与抗炎巨噬细胞表型相关的分子CD163。组织化学与细胞化学杂志。2006;54:763–771.[公共医学][谷歌学者] 55Schonbeck U，Mach F，Sukhova GK等。动脉粥样硬化病变中基质溶素-3的表达：通过CD40-CD40配体信号在体内外的调节。《实验医学杂志》。1999;189:843–853. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 56Weber C，Zernecke A，Libby P.白细胞亚群对动脉粥样硬化的多方面贡献：小鼠模型的经验教训。Nat Rev免疫学。2008;8:802–815.[公共医学][谷歌学者] 57Bolick DT、Skaflen MD、Johnson LE等。小鼠G2A缺乏促进巨噬细胞活化和动脉粥样硬化。圆形Res。2009;104:318–384. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 58Shimizu K，Shichiri M，Libby P，等。Th2-为主的炎症和干扰素-γ信号的阻断在同种异体主动脉中诱发动脉瘤。临床投资杂志。2004;114:300–308. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 59.Jandeleit-Dahm KAM，Calkin A，Tikellis C，Thomas M.PPAR激动剂的直接抗动脉粥样硬化作用。当前Opin Lipidol。2009;20:24–29.[公共医学][谷歌学者] 60Rigamonti E，Chinetti-Gbaguidi G，Staels B.通过PPAR-α、PPAR-γ和LXR对小鼠和人巨噬细胞功能的调节。动脉硬化血栓血管生物学。2008;28:1050–1059.[公共医学][谷歌学者] 61柴田N，Glass CK。炎症和动脉粥样硬化中巨噬细胞功能的调节。脂质研究杂志。2009;50：S277–S281。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 62Teupser D、Kretzschmar D、Tennert C等。小鼠肝脏X受体α（LXR-alpha）巨噬细胞过度表达对低密度脂蛋白受体缺乏小鼠动脉粥样硬化的影响。动脉硬化血栓血管生物学。2008;28:2009–2015.[公共医学][谷歌学者] 63Odegaard JI、Ricardo Gonzalez RR、Goforth MH等。巨噬细胞特异性PPARgamma控制替代激活并改善胰岛素抵抗。自然。2007;447:1116–1120. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 64•.Hughes JE、Srinivasan S、Lynch KR等。1-磷酸鞘氨醇诱导巨噬细胞的抗炎表型。圆形Res。2008;102:950–958.
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