p38IP存在于膜上，与mAtg9共定位，并且是依赖于饥饿的mAtg9贩运所必需的。(A）HEK293A细胞单独转染HA–p38IP或与HA–p28IP和RFP–mAtg9联合转染，均质并离心，所得核后上清液（PNS）通过10万离心分离克进入膜颗粒和胞浆。用SDS-PAGE溶解等量的蛋白质，并用抗甘露糖-6-磷酸受体（MPR）抗体作为膜相关蛋白的对照，用抗超氧化物歧化酶（SOD）抗体作为胞浆蛋白、抗mAtg9抗体和抗HA抗体的对照进行免疫印迹。使用ImageJ软件对HA–p38IP水平进行量化，并在PNS中相对于HA–p38IP进行绘图(n个=4) (**P（P）=0.0051). (B）使用siRNA去除HEK293细胞的mAtg9，然后用HA–p38IP转染并在全培养基或EBSS中培养（数据未显示）。星号表示mAtg9耗尽的细胞。棒材为5μM。使用ImageJ软件分析了喂食和饥饿条件下对照组和mAtg9耗竭的细胞的核荧光强度与细胞溶质荧光强度(***P（P）=<0.0001，学生t吨-测试）。(C类)用HA–p38IP转染HEK293A细胞并进行间接免疫荧光处理。用抗HA抗体检测HA–p38IP，用抗mAtg9抗体检测内源性mAtg9。在全培养基或EBSS中，HA–p38IP定位于细胞核和细胞质斑点。HA–p38IP与mAtg9共同定位于细胞外围（箭头）。棒材（上面板）5μM，（下面板）1μM。(D）用抗mAtg9抗体从单独转染HA–p38IP或RFP–mAtg8和HA–p28IP的HEK293细胞中免疫沉淀mAtg9。用抗HA或抗mAtg9抗体检测了总共5%的裂解物或免疫沉淀物。从相同的免疫印迹中获得左侧和右侧底部面板，但暴露不同的时间，以便更好地显示内源性mAtg9。(E）用对照或p38IP siRNA转染HEK293细胞。转染后72小时，将细胞在全培养基或EBSS中孵育2小时，然后固定并免疫染色以检测内源性mAtg9定位。mAtg9定位通过对相邻核表型或分散表型的细胞进行视觉评分来量化。条形=5μm（数据表示为200个细胞的平均值±标准偏差，*P（P）=0.0413，学生的t吨-测试）。
