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临床癌症研究。作者手稿；PMC 2011年1月1日提供。
以最终编辑形式发布为：
《临床癌症研究》，2010年1月1日；16(1): 338–347.
数字对象标识：10.1158/1078-0432.CCR-09-2046
预防性维修识别码：PMC2804932型
NIHMSID公司：尼姆斯159836
PMID：20048335

K562/GM-CSF免疫治疗降低甲磺酸伊马替尼残留病慢性粒细胞白血病患者的肿瘤负担

B.道格拉斯·史密斯,1中，2 伊维特·卡萨蒙,2 珍妮·科瓦尔斯基,2 克里斯托弗·戈克,2 凯瑟琳·莫非,2 卡罗尔·米勒,三 伊丽莎白·加勒特·梅尔,4 蔡华龄,2 陆琴,2 克里斯蒂娜·恰,2 芭芭拉·比德兹基,2 托马斯·C·哈丁,5 广汉图,5 理查德·琼斯,2 克里斯汀·海格,5和海姆·I·列维斯基2
作者信息 版权和许可信息 PMC免责声明

关联数据

补充资料

摘要

目的

CML对T细胞介导的免疫反应。K562/GM-CSF是一种从表达几种CML相关抗原的CML细胞系衍生的GM-CSF-生产疫苗。开展了一项初步研究，以确定K562/GM-CSF免疫治疗是否可以改善慢性粒细胞白血病患者对甲磺酸伊马替尼（IM）的临床反应。

实验设计

慢性期CML患者至少取得了主要的细胞遗传学反应，但即使在IM治疗一年或多年后仍有持续的、可测量的疾病，则符合条件。每种疫苗均每隔三周接种一次，每次接种四种疫苗，无论是否外用咪喹莫特，同时保持稳定的IM剂量。在接种疫苗之前和之后连续测量CML疾病负担。

结果

19名患者接种了疫苗，之前IM治疗的中位持续时间为37（13-53）个月。平均PCR测量值BCR-ABL公司接种疫苗后，该组的死亡率显著下降（p=0.03）。13名患者的疾病负担逐渐下降，其中8名患者在接种疫苗之前的疾病负担增加。12名患者在接种疫苗后达到了迄今为止最低的肿瘤负担测量值，其中包括7名PCR-检测不到的受试者。

结论

K562/GM-CSF疫苗似乎可以改善IM患者的分子反应，包括实现完全的分子缓解，尽管之前的IM治疗持续时间较长。

关键词：慢性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病、免疫疗法、K562/GM-CSF疫苗

简介

CML可以对T细胞介导的免疫产生高度反应。异基因干细胞移植和供体淋巴细胞输注的治疗潜力表明，针对免疫系统的策略可能在改善对单一药物IM的反应中发挥作用（瑞士巴塞尔诺华国际公司）。K562/GM-CSF是一种来源于CML细胞系的疫苗，该细胞系经转基因后可产生GM-CSF。1辐照肿瘤细胞旁分泌产生的GM-CSF促进树突状细胞向疫苗部位的局部募集，后者捕获释放的肿瘤抗原并运输至引流淋巴结以激活肿瘤特异性CD4+和CD8+T细胞。2,三K562/GM-CSF表达许多CML相关抗原，并有可能产生或增强CML特异性免疫反应。

这项初步研究旨在确定K562/GM-CSF免疫疗法是否能改善IM治疗慢性期CML患者的分子反应。次要目标包括评估CML中K562/GM-CSF疫苗的安全性和耐受性，并描述其对CML相关抗原特异性T细胞和抗体的影响。

患者和方法

方案和患者

这项单机构试点研究由约翰·霍普金斯IRB批准，并根据约翰·霍普金医疗机构和细胞基因公司（加利福尼亚州南旧金山）持有的美国FDA IND申请进行。所有受试者均超过18岁，诊断为慢性期Ph+CML。所有患者均需接受IM治疗≥12个月，取得主要细胞遗传学反应（<=35%Ph+造血），并通过Ph+染色体荧光原位杂交（FISH）或定量实时逆转录聚合酶链反应（RQ-PCR）检测到可测量的疾病BCR-ABL公司mRNA。图1显示试验大纲及其3个阶段。按照患者的登记剂量继续注射IM。每隔6周测量肿瘤负担。这些包括标准临床测量BCR-ABL公司每隔3个月执行一次，并对BCR-ABL公司每隔6周收集一次，并按如下所述保存以备将来测试。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为nihms-159836-f0001.jpg

研究方案：A-入组前阶段（12周），B-免疫治疗（9周），C-计划随访（27周）和持续监测（中位数33个月随访）。所有受试者均需接受IM治疗1年以上，并取得重大细胞遗传学反应，但仍有可测量疾病负担的证据。

K562-GM-CSF免疫治疗

如前所述，用编码人类GM-CSF的质粒载体转染K562细胞系。1K562/GM-CSF细胞由Cell Genesys，Inc.制造。细胞系稳定表达>1000 ng的GM-CSF/106细胞/24小时。4所有患者均接种1×10疫苗8辐照K562/GM-CSF细胞（1.0×107每3周注射0.5 cc×10个四肢皮内部位的细胞），共接种4次。10个皮内部位分布如下：非优势上肢和下肢各3个，优势侧下肢各4个。每次注射都放置在距离其他部位>5 cm的位置，避免了之前注射的区域。在所有10个疫苗接种点接种疫苗前1小时，放置局部利多卡因麻醉霜（EMLA™霜，阿斯利康，特拉华州威明顿，美国）。接种疫苗后4小时，患者用温水和肥皂清洗这些区域。

添加5%咪喹莫特临床佐剂乳膏（Aldara™）

在包装说明书之后处方了收费类受体-7激动剂咪喹莫特（Aldara™，Graceway Pharmaceuticals，Bristol，Tennessee，USA）。简言之，受试者在接种疫苗4小时后，在10个疫苗接种点中的9个接种点使用咪喹莫特乳膏。受试者使用一包咪喹莫特乳膏（250 mg）覆盖3个疫苗接种点，每次给药总剂量为750 mg。将面霜摩擦到皮肤上，覆盖直径约2.5厘米的圆形区域，直到不再可见。受试者在涂抹乳膏8小时后清洗部位。腿上的一个部位没有收到任何咪喹莫特乳膏。所有受试者在接种疫苗后第3天和第5天在相同的部位重复使用咪喹莫特。

实时定量PCR

CML的诊断基于Ph染色体的细胞遗传学检测和/或BCR-ABL公司重排RQ-PCR（参见补充文本完整方法）。由于在研究期间缺乏科学界可获得的一致的“金标准”基线临床参考，即约翰斯·霍普金斯标准BCR-ABL公司建立RQ-PCR作为基线肿瘤负荷的参考。该标准包括来自19名新诊断慢性期CML患者的初始定量BCR/ABL值，并遵循IRIS研究中试验的方法，该研究使用30名新诊断患者样本用于相同目的。5RQ-PCR平均值为1033（S.D.=80%）份BCR-ABL公司每1000份ABL公司.在研究过程中，BCR-ABL公司每六周测量一次。抽血并储存在4摄氏度。在24小时内为所有样本制备RNA。对来自其他样本的一半RNA（即每隔3个月）进行分析，并以下文所述的“实时”方式进行报告。剩余的RNA按照常规条件保存在（−）80摄氏度，以尽量减少RNA损失。收集36周样本后，在一次PCR运行中对这些储存的RNA样本进行检测，以控制检测变异性。这导致每隔一个时间点从同一个血液采集中进行两次测量。为了使用为本研究收集的所有RQ-PCR数据，对分批结果和同期值之间的关系进行建模，以便将分批结果转换为同期标度值，如补充.对同期结果进行了统计上有效的推断(补充图2)。6报告了截至2008年6月1日的所有可用临床措施。

响应定义

细胞遗传反应

在研究登记时，FISH可测量肿瘤负担的患者被视为通过FISH阴性（−）实现了完全细胞遗传学反应（CCR）。FISH阳性的临界值为外周血样背景值的1%。分子反应：通过将单个患者的RQ-PCR结果与上述诊断时的“JH参考标准”水平进行比较，确定分子反应。A类主要分子反应（MMR）被定义为在该标准化基线以下（即低于1.003）实现≥3对数减少BCR-ABL公司每1000份成绩单ABL公司成绩单），同时完全分子反应（CMR）被定义为无法检测，这表示在BCR-ABL公司RQ-PCR的转录本编号。

皮肤活检

在第一次疫苗接种前的第0天和第一次和第四次疫苗接种后的第3天，计划进行选择性皮肤活检，以评估局部免疫反应。接受咪喹莫特乳膏治疗的患者在第3天进行了额外的皮肤活检，包括非咪喹莫特部位。

免疫分析

采集外周血单个核细胞和血清，并在与肿瘤负荷评估样本相同的时间点进行冷冻保存。对于每个受试者，在研究期结束后，在一次分析中对全套收集的样品进行测试。CML相关抗原特异性抗体和T细胞检测方法的详细信息见补充材料。

统计方法

这项试点研究的主要统计结果是通过改变BCR-ABL公司登记基线与接种疫苗后规定时间间隔的成绩单。分析的目的是检测BCR-ABL公司/ABL公司至少80%功率。我们考虑在日志中减少110通过RQ-PCR分析可靠区分的量表，以及与0.5 log平均差的零假设相比潜在的临床相关变化。选择了对数标度上从0.3到0.8的标准偏差范围，假设对数值的差异呈正态分布，并计划进行配对t检验分析。任何导致患者肿瘤负担无法检测的基线变化也被认为是相关的。对每个个体，绘制PCR测量值随时间变化的轨迹。将个人之间的信息进行组合，以获得每个时间点的估计响应。该组合曲线用于进一步描述疫苗引起的生物变化。

结果

患者特征

2004年1月至2005年2月，共有19名受试者被登记，其一般特征如表1所有患者在第一个慢性期均患有Ph+CML，病程中位数为57个月（16-111）。患者接受IM治疗的时间中位数为37个月（13-53个月），平均剂量为每天400毫克（范围为300毫克至800毫克）。在19名患者中，有16名（84%）在确诊时首次接受了干扰素-α治疗。四名受试者的外周血FISH检测结果为疾病，其余15名受试人员的FISH为阴性，但RT-PCR为阳性BCR-ABL公司断点。所有受试者的毒性和反应均可评估。

表1

患者特征

登记的患者总数n=19
男：女9:10
中位年龄52（28-76）岁
中位病程57（16-111）个月
既往IM治疗（n=9）
中位剂量每天400毫克（300–800毫克）
中位数持续时间37（13-53）个月
以前的干扰素治疗（n=16）
加药范围3–13×106单位每天
中位数持续时间13.5（5–75）个月
IM的最佳先前细胞遗传学反应
FISH阳性4（21%）
FISH阴性/PCR阳性15 (79%)
IM的最佳先前分子反应
MMR公司7/15 (47%)
无MMR8/15 (53%)

（IM:甲磺酸伊马替尼，MMR：主要分子反应）

临床反应

在入组时最初呈FISH阳性的4名受试者中，有2名在计划免疫治疗后呈阴性，并持续2.5年以上(图2a). 有趣的是，其中1个继续成为RQ-PCR检测不到，并持续了2年多。其余患者最终符合MMR标准。除了细胞遗传学阴性的临床里程碑外，反应还通过实现标志着肿瘤负担显著降低的分子里程碑来定义。接种疫苗后平均随访33个月（范围10–44个月），74%（n=14）的患者最终达到MMR的临床基准，37%（n=7）的患者达到CMR。在15名FISH阴性受试者中，有8名在接受免疫治疗之前从未达到MMR，尽管IM治疗的平均时间为25个月。免疫治疗后，2例（25%）达到CMR，3例（37%）达到MMR，3例行稳定的RQ-PCR可测量疾病(图2b). 在之前实现MMR的7名患者中，4名（57%）实现了CMR，3名（43%）在持续的MMR中保持稳定(图2b). 共有7名（37%）受试者在开始免疫治疗后，在中位时间为6个月（范围为3-22个月）时检测不到PCR。CMR的中位持续时间为22（3–27）个月，目前有5名患者无法检测到。5名受试者之一（受试者001，表2)目前无法检测到b2a2/b3a2转录本（接种后27个月），该转录本定义了他的原始断点，但确实出现了低水平e1a2转录物（通常与ALL中的p190基因产物相关），表明CML持续存在。其他两名暂时完全缓解的患者有证据表明CML再次复发，尽管他们的RQ-PCR水平都很低。

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到2008年8月，K562/GM-CSF免疫治疗取得了最佳细胞遗传学和分子反应。据报道，4名大体积肿瘤患者（细胞遗传学阳性）在免疫治疗开始时出现反应，图2a，15名分子测量疾病患者在辅助治疗时出现反应，图2b。括号中注明了研究登记前IM治疗的持续时间，“*”表示患者服用了5%咪喹莫特乳膏。2008年8月之前是最佳响应跟进期。

表2

免疫治疗前后患者临床状况

研究#年龄IM剂量（IM上的mos）疫苗前鱼类状态MMR预疫苗疫苗接种后最佳反应最佳响应时间（mos）最佳响应持续时间（mos）疫苗接种后的持续时间（Mos）ΔBCR-ABL2前/后
001160800（24个月）++CMR公司6个月27个月33+ / −
00257600（43个月）+−MMR公司21个月16个月37− / −
008*65800（40个月）+−无MMR不适用不适用10+ / −
014*59600（49个月）+−无MMR不适用不适用14− / +
017*47600（48个月）−−MMR公司33三36+ / −
018*45800（15个月）−+MMR公司不适用不适用35+ / −
015*44400（17个月）−−无MMR不适用不适用26+ / −
012*77400（37个月）−−MMR公司12个月13个月25− / −
009*47800（18个月）−−CMR公司12个月8个金属氧化物半导体20+ / −
010*57300（53个月）−−无MMR不适用不适用12+ / −
00460400（49个月）−−CMR公司22个金属氧化物半导体22个月44− / −
00528600（15个月）−+CMR公司6个月30个月36− / −
006*56400（48个月）−+CMR公司6个月6个月42−/NC
007*66400（39个月）−+CMR公司6个月3个月30−/NC
00335600（13个月）−−MMR公司6个月18个月30−/NC
013*51400（51个月）−+CMR公司3个月12个月39+ / −
016*46600（13个金属氧化物半导体）−+MMR公司不适用不适用38− / −
011*34800（25个月）−+MMR公司不适用20个月36− / +
019*36400（14个金属氧化物半导体）−−无MMR不适用不适用22− / +
1患者登记患有FISH（+）病，在开始免疫治疗前未进行RQ-PCR。研究完成后的批量样品测试显示RQ-PCR值与MMR一致。
2“+”表示RQ-PCR值增加，“−”表示减小，“NC”表示考虑到绝对值（斜率），斜率没有变化<=0.01
*患者服用了艾尔达霜。

将该组作为一个整体进行研究，肿瘤负担的范围在登记时跨越了近3个对数。尽管存在明显的异质性BCR-ABL公司比较免疫治疗前的RQ-PCR值（平均值=0.80，se=0.38）和干预后的值（平均数=-0.48，se=0.81）（p=0.03），该组在对数（以10为基数）标度上的转录副本数存在统计学差异。当观察登记时患有FISH（−）病的15名患者时，也出现了类似的趋势（p=0.01）。19名受试者的个体患者趋势显示在图3垂直虚线分隔免疫治疗前后的测量值。观察19名患者疾病负担的观察趋势(表2，最后一列），8名患者在接种疫苗后从PCR的增加趋势变为减少趋势，5名患者在注射疫苗前减少，在注射疫苗后继续减少（尽管斜率在统计学上更陡），其余6名患者在研究干预前斜率下降，之后呈增加趋势。值得注意的是，在接种疫苗后PCR呈上升趋势的3名患者中，斜率的增加很小（患者3=0.001，患者6=0.03，患者7=0.01），这可能表示PCR水平稳定，而不是真正的增加。总的来说，接种前和接种后的时间段之间存在显著关联（p=0.02，双尾Fisher精确检验，补充表1)共有13名受试者的肿瘤负担逐渐减轻(表2)。

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日志的个别趋势10分子水平的同时标度测量BCR-ABL公司K562/GM-CSF免疫治疗前后的所有患者。研究期间，大约每6周进行一次RQ-PCR检测，包括免疫治疗前窗口和免疫治疗开始后至少6个月。这两个周期（接种前和接种后）由垂直虚线分隔。虚线表示疫苗前后评估期间的估计趋势。y轴表示对数10同期标度BCR-ABL公司措施。受试者之间的y轴不同，因为试验登记时肿瘤负担的变化很大（超过3个对数）。x轴表示BCR-ABL评估，并根据接种前（由前五个“勾号”表示）和接种后（由垂直虚线右侧的17个“勾符号”表示）进行排序。患者医嘱对应于表2。

添加5%咪喹莫特乳膏临床佐剂

动物模型的初步数据表明，在GM-CSF肿瘤疫苗注射部位局部应用5%咪喹莫特乳膏可增强免疫反应。7为了获得这种组合的初步临床经验，最后14名连续受试者接受了咪喹莫特作为局部疫苗佐剂。在疫苗接种部位添加imquimod的耐受性良好，并且与在无注射部位观察到的硬结面积相比，硬结面积增加了（平均面积为255mm2与100 mm相比2，p=0.005）。目前正在对疫苗皮肤活检进行评估。接受或不接受咪喹莫特免疫的患者出现临床反应。

毒性

K562/GM-CSF免疫疗法耐受性良好，最常见的副作用是每个受试者经历的1-2级局部注射部位反应。三名受试者（16%）经历了3级注射部位反应，疼痛、肿胀和红斑随着局部应用冷敷而改善。其他可能与免疫治疗相关的症状包括4名受试者（21%）出现轻度（1-2级）肌痛，3名受试人员（16%）出现低温（1级），2名受试人（11%）出现1-2级疲劳和flu-like症状。免疫治疗的实施并没有出现毒性相关的延迟。总共6个免疫治疗周期导致之前注射部位出现肿胀和红斑的“再次出现”现象。没有任何受试者出现自身免疫反应的临床证据。

相关研究

我们最初通过Western blot检测了针对未定义K562抗原产生的抗体。在几乎所有受试者中，检测到的针对K562裂解物的多克隆抗体强度都有所增加。早在疫苗接种后的第一次测量中就发现了这一点。强度在最终疫苗接种后达到峰值，并逐渐下降至+36周(图4a). 在一些受试者中，这伴随着识别不同分子量抗原的抗体，而这些抗原在疫苗前样本中并不明显（箭头，图4b). 尽管这些变化与K562免疫的疫苗启动一致，但免疫印迹的分辨率不足以区分特定的疫苗反应。K562和原CML共有的特定候选抗原的抗体和T细胞反应(BCR-ABL公司融合蛋白，蛋白酶-3，8威尔姆瘤-1（WT-1），9——14生存素，15——18和表扬。19)进行了检查（参见补充文本方法），但未检测到（数据未显示）。

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两个代表性的Western blot显示在整个研究期间收集的系列样本中检测到的针对K562裂解物的多克隆抗体强度增加（图4a和4b）。也有针对不同分子量抗原的可检测抗体，如图4b中箭头所示，这些抗体在免疫治疗前的样本中没有发现。

讨论

用IM治疗慢性期CML患者，90%以上的慢性期患者血液学缓解，80%以上的患者在前期治疗中有望完全细胞遗传学缓解。20尽管有这些良好的临床反应，但绝大多数接受IM治疗的患者仍然患有分子可测量的疾病。帝国理工学院（Imperial College）最近的数据显示，接受IM治疗的患者5年内CMR的累计发病率仅为8.3%。21Palandri等人发现，277名对干扰素-α有耐药性或不耐受性的晚期慢性期患者中，只有一名患者具有持续的CMR，平均随访72个月。22数据不断积累，静止的原始Ph染色体阳性CML干细胞对伊马替尼不敏感在体外从而使单一药剂IM不能完全根除该疾病23——25并导致大多数停止IM治疗的患者复发。26——30

以前的报告显示，在接受肽基疫苗的患者中，能够诱导T细胞反应，该疫苗试图以CML特有的P210蛋白中的融合序列为靶点。大多数早期报告建议检测肽特异性T细胞增殖反应和延迟型超敏反应，而不是临床反应。31通过改变疫苗或佐剂来修改策略的努力，导致疾病负担发生了微小但可测量的变化，包括一些实现分子缓解的病例。32,33与所有针对特定表位的单一抗原疫苗方法一样，这些策略受到患者表达特定HLA I类或II类分子用于肽提呈的要求的限制。相反，转基因肿瘤细胞疫苗提供的肿瘤相关抗原的广谱性不受HLA类别的限制。此外，每个患者都选择被识别的抗原层次，增加了反应的可能性，而这种制剂的多价性降低了抗原丢失导致肿瘤逃逸的可能性。K562细胞系最初来源于CML患者，表达许多潜在抗原，这些抗原可能是重要的免疫治疗靶点。K562细胞系和原代CML共有的候选抗原靶点包括BCR-ABL公司融合蛋白，蛋白酶-3，8威尔姆瘤-1（WT-1），9——14生存素，15——18和PRAME。19尽管有这些优点，但即使K562细胞大量表达这些候选抗原，也没有检测到针对这些候选抗原的抗体或T细胞反应（数据未显示）。这些结果反映了Lee及其同事的报告，他们在IM诱导缓解后发现T细胞对自体白血病细胞的反应，但对任何已知的白血病相关抗原（包括我们研究中检测的抗原）没有反应。34此后，我们利用本文报道的受试者血清，对K562细胞的cDNA表达库进行了无偏见的筛选。虽然仍处于初步阶段，但我们现在已经鉴定出超过25种由CML细胞表达的抗原，这些抗原在疫苗接种后的样本中得到了识别，但在疫苗接种前的样本中没有得到识别。有趣的是，虽然一些识别的抗原是已知的CML免疫靶点，包括透明质酸介导的运动受体（RHAMM）35和烯醇化酶α36，此屏幕中发现的大多数目标都是新颖的。目前正在进行研究，以确定更多CML患者对每种抗原的免疫反应频率，并检查临床反应与抗原识别模式的相关性。

虽然我们的研究不是为了测试IM对所见免疫效果的影响，但同时使用IM可能会影响K562/GM-CSF免疫治疗的有效性。Abelson酪氨酸激酶是酪氨酸激酶的三个家族之一，在T细胞的发育、活化和扩张中发挥重要作用。这些非受体激酶被激活，以响应前T细胞受体和T细胞受体的参与，并传递影响T细胞发育和成熟T细胞功能的信号。37,38用IM和其他TKI限制这些信号通路的功能是可能导致免疫抑制效应的机制之一。39,40然而，同样可信的是，IM通过在一个或多个拟议的T细胞激活途径的关键节点上的相互作用增强了K562/GM-CSF疫苗的生物活性。研究表明，IM可以增强抗原提呈细胞的刺激能力，从而激活T细胞，41促进干扰素产生杀伤性树突状细胞的发育和活性，42并限制调节性T细胞的抑制性反馈回路。43IM对免疫反应对立臂的影响之间的平衡尚不清楚，但其影响不应被忽视。尽管存在这些问题，IM将疾病控制在MRD状态的能力为免疫治疗提供了一个独特的机会，这种免疫治疗具有不同于白血病固有靶向治疗的作用机制。

总的来说，通过PCR检测CML肿瘤负荷的微小变化在临床上的重要性尚不清楚。大多数PCR分析表明，高达1 log的变化可能属于分析的变化范围，随着时间的推移，PCR值的趋势可能更好地反映真实的临床效果。我们的研究试图通过不简单地重复Branford等人建议的措施来尽量减少在呈现临床反应时的混淆。44和休斯等人45帮助分析IRIS研究，但通过提供所有数据点来最好地显示随时间变化的测量趋势。在我们的研究中，免疫治疗后观察到的肿瘤负担的变化非常有趣，因为我们的13名患者在免疫治疗后PCR呈下降趋势，半数以上的应答患者在随访期间的某些时候达到了分子检测不到的水平，这7种应答中有5种似乎是持久的。尽管PCR作为一种临床工具还处于相对初级阶段，但下降趋势和达到分子检测不到的疾病水平支持了免疫疗法的生物活性。目前的研究没有将患者随机分为免疫治疗组和观察组，只基于IM治疗的持续分子改善问题尚未得到解决。我们的患者群体由晚期慢性期患者组成，其中12名患者尽管IM治疗中位数超过3年，但从未获得过主要的分子反应，仅在稳定的IM治疗中，他们的肿瘤负担不太可能出现显著变化。

这项初步研究表明，在我们19名受试者的76个疫苗周期中，K562/GM-CSF免疫治疗的使用耐受性良好，没有任何严重不良事件。这种干预与减少CML患者的肿瘤负担和实现主要和完全的分子反应有关，CML患者以前对单药IM的反应不完全。最终，免疫治疗的影响将在一项试验中得到最好的确定，在该试验中，在计划退出IM后评估无法检测到的疾病的持续性。该设计已纳入我们正在进行的该试点研究的后续试验中。

翻译相关性陈述

伊马替尼在改善慢性粒细胞白血病患者预后方面取得的巨大进展似乎仅限于其无法直接消除大多数患者尽管经过多年治疗仍存在的早期祖细胞。针对这种最小残留疾病可能会导致改善结果，并可能消除终身治疗的需要。根据异基因干细胞移植和供体淋巴细胞输注均能治疗CML患者的临床观察，免疫治疗有可能针对此类MRD。我们的手稿描述了K562/GM-CSF全细胞疫苗对降低晚期慢性期患者MRD的临床影响。消除MRD可能导致CML的药物治疗。

补充材料

1

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鸣谢

我们感谢研究护理团队成员对本试验患者的关怀，感谢数据管理团队维护规范文件，感谢医学博士Lola Fashoyin在开发基于Johns Hopkins的定量BCR-ABL公司PCR标准。此外，我们感谢蒂娜·鲍尔和罗宾·卡尔森在手稿准备和提交方面的帮助。

这项工作得到了美国国立卫生研究院拨款1R21CA108174-01（H.L.）的支持

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