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国际实验病理学杂志。2009年12月；90(6): 630–637.
数字对象标识：10.1111/j.1365-2613.2009.00686.x
PMCID公司：PMC2803254型
PMID：19958399

氧化层粘连蛋白-1诱导内皮细胞中单核细胞粘附和ICAM-1表达增加

埃琳娜·科斯蒂杜,*† 康斯坦蒂娜·托普里杜,† 安杰洛斯·达尼利迪斯,‡ 玛莎·卡洛扬尼,*和乔治·科利亚科斯†
作者信息 文章注释 版权和许可信息 PMC免责声明

摘要

动脉粥样硬化与氧化应激增加和内皮细胞募集单核细胞有关。亚内皮基底膜蛋白，如在细胞粘附中起核心作用的层粘连蛋白，暴露于活性氧物种。在本研究中，研究了单核细胞在预先附着于氧化层粘连蛋白或天然层粘连素的人脐带静脉内皮细胞（HUVEC）上的附着。通过酶联免疫吸附试验评估HUVEC的细胞内粘附分子-1（ICAM-1）表达。使用血色试剂盒检查HUVEC与氧化或天然层粘连蛋白-1的粘附。为了进一步研究上述现象，使用了抗αL、抗αM、抗α2和抗β2整合素亚单位抗体。与预附着于天然层粘连蛋白的HUVEC相比，预附着于氧化层粘连蛋白的HUVEC表达更高水平的ICAM-1和以更高程度附着于这些细胞的单核细胞。用抗αM和β2整合素亚基的单克隆抗体孵育单核细胞，可以平衡上述差异。此外，与天然层粘蛋白相比，HUVEC与氧化层粘蛋白的结合程度更高。在与α2整合素亚基抗体孵育后，这种差异是相等的。这些结果表明，在层粘连蛋白被氧化修饰的情况下，HUVEC和基底膜之间的相互作用发生了修饰。这种改良的相互作用导致内皮细胞ICAM-1表达增加，从而增加单核细胞募集能力。

关键词：附着，人脐带静脉内皮细胞，层粘连蛋白-1，单核细胞，氧化

基底膜（BM）蛋白质在暴露于活性氧物种（如超氧阴离子、过氧化氢和羟基自由基）后会被氧化(艾哈迈德等。2003). 这种氧化可能会改变蛋白质的结构和性质，从而影响其与多种细胞（包括单核细胞和内皮细胞）的相互作用，因此可能是动脉粥样硬化发生的一种新机制。

层粘连蛋白是多域和多功能交叉型糖蛋白，是基底膜的关键结构和功能成分。此外，它们在许多生物功能中发挥着中心作用，例如细胞粘附、分化和几种细胞类型的迁移(卡斯特罗诺沃1993;德阿坎格里斯等。, 1996). 我们实验室以前的研究表明，层粘连蛋白和IV型胶原羰基化强烈影响其与单核细胞的相互作用(科斯蒂杜等。2007,2008). 因此，层粘连蛋白氧化/羰基化也可能改变其与内皮细胞的相互作用，从而影响其与单核细胞的后续相互作用，并以这种方式促成动脉粥样硬化病变的形成。

单核细胞附着并通过活化的内皮细胞迁移是导致动脉粥样硬化发生的第一个关键步骤(Osterud&Bjorklid 2003年). 单核细胞和内皮细胞之间的牢固粘附是由位于内皮细胞上的表基因免疫球蛋白（ICAM-1、ICAM-2、VCAM-1）与其配体、位于大多数白细胞上的β2整合素（β2、CD18）之间的相互作用介导的(安德森1995). 细胞内细胞粘附分子-1（ICAM-1）通过与β2（CD11/CD18）整合素的相互作用促进单核细胞与内皮细胞的粘附。CD11亚单位、αL（aL，CD11a）和αM（aM，CD11b）在单核细胞上表达，并与ICAM-1上的不同结构域结合(安德森1995;霍雷2001). 几种细胞因子诱导ICAM-1的释放和表达(卡利等。1999)或ROS，如过氧化氢(Lo（低）等。1993)并受转录调控(窗格等。1995). 据报道，趋化因子、ROS和佛波酯通过β2（CD11/CD18）整合素的参与，诱导中性粒细胞与内皮细胞的粘附增加(安德森等。1986;塞利亚克等。1994). 然而，内皮细胞BM相互作用对上述现象的参与从未被研究过。

在本研究中，研究了单核细胞与天然或氧化层粘连蛋白预连接的HUVEC的粘附。

材料和方法

材料

层粘连蛋白-1是从EHS（Engelbreth-Holm-Swarm）肿瘤中分离出来的。Medium Earle 199，基础缺血培养基（IMDM）加NaHCO三Percoll是从英国剑桥Biochrom公司购买的。3,3′，5,5′-四甲基联苯胺盐酸盐（TMB）片剂、抗鼠抗体HRP-结合IgG和邻二茴香胺盐酸盐片剂均来自Sigma（美国密苏里州圣路易斯）。过氧化氢（30%）、抗坏血酸和血色染色试剂盒来自默克公司（德国达姆施塔特）。抗ICAM-1单克隆抗体[小鼠抗人IgG1，表位FL（h）]购自Santa Cruz Biotechnology，Inc（德国海德堡）。硫酸亚铁铵和十六烷基三甲基溴化铵来自Fluka（Seelze，德国）。乙酸来自Applechem（德国达姆施塔特），抗CD49b-FITC（小鼠抗人IgG 2ak，克隆HAS6）来自Ancell（美国明尼苏达州贝波特）。抗CD11a（小鼠抗人IgG2a，克隆38）、抗CD11b（小鼠抗人类IgG1，克隆ICRF44）和抗CD18（大鼠抗人Ig G2b，克隆YFC 118,3）来自AbD Serotec（德国杜塞尔多夫）。所有其他试剂均为分析级试剂，从商业来源获得。

参与主体

从15名健康新生儿的脐带中分离出内皮细胞。从15名健康志愿者的血液样本中，通过差速离心和固体表面附着制备单核细胞。对所有样品的每个参数/实验进行测试。

层粘连蛋白氧化

层粘连蛋白-1是从EHS（Engelbreth-Holm-Swarm）肿瘤中分离出来的，如其他地方所述被氧化(阿拉姆达里等。2005). 简而言之，PBS中的层粘连蛋白与100 mM EDTA、833 mM抗坏血酸和100 mM硫酸亚铁铵在37°C下培养1小时。在4°C下针对PBS进行过夜透析，随后进行两次缓冲液改变，然后将氧化层粘连蛋白储存在−80°C下。为了评估层粘连蛋白氧化，使用了我们实验室首次建立的高灵敏度ELISA（酶联免疫吸附测定）方法(阿拉姆达里等。2005)，而在体外-使用比色羰基分析法对产生的氧化层粘连蛋白进行定量（数据未显示）(阿拉姆达里等。2005).

内皮细胞的制备和培养

如Jaffe所述，通过胶原酶灌注法从健康新生儿的脐带中分离出内皮细胞等。稍作修改(杰菲等。1973). 简而言之，用无菌磷酸盐缓冲盐水（PBS）（0.9%NaCl，pH 7.4）仔细清洗脐带静脉，然后在室温下填充含有0.5μg/ml胶原酶的Earle 199培养基10分钟。然后将内容物倒入干净、无菌的猎鹰体内，用Earle 199培养基（不含胶原酶）清洗脐带静脉。然后在260℃下将总含量离心10分钟克最后再悬浮在完整的Earle 199培养基中（20%FCS，25 mM HEPES，50μl Pen/Strep，0.25μg/ml真菌素，50μg/ml庆大霉素，90μg/ml肝素）。然后将细胞置于预先涂有0.2%w/v明胶的PBS烧瓶中，并在37°C下培养，直至细胞汇合。使用前，用0.05%胰蛋白酶和0.02%EDTA对细胞进行胰蛋白酶处理，在260℃下离心10分钟克最后再悬浮在完全的Earle 199培养基中。

单核细胞制备

通过改进先前描述的方法，从早餐前早上从健康献血者采集的血液样本中分离出单核细胞(西格尔舞者等。2004). 简言之，用PBS 1×（1 mM EDTA，pH 7.2）稀释肝素化全血，并使用18号脊柱针和Ficoll-Paque Plus（1.077 g/ml）在50 ml猎鹰试管中分层。离心后（400克/20 min/RT/不制动）收集外周血单个核细胞（PBMC）层，然后用PBS 1×（1mM EDTA，pH 7.2）冲洗三次。然后用IMDM稀释PBMC，并将其覆盖在46%Percoll的50ml猎鹰试管中。离心后（550克/30 min/RT/无制动）收集单核细胞层，用PBS 1×（1 mM EDTA，pH 7.2）稀释并用冷PBS 1倍洗涤，然后用于实验。用0.4%台盼蓝溶液1:1稀释后，通过在Neubauer平板上测量来估计分离的单核细胞的数量。每次共分离出3-40万个细胞/ml，存活率至少为98%。使用藻红蛋白标记的CD14单克隆抗体进行流式细胞术显示，85%以上的细胞是单核细胞。

内皮细胞粘附试验

在微孔上测量内皮细胞附着。将80000个重新悬浮在Earle培养基（10%FCS）中的细胞放置在预先涂有37.5μg/ml氧化或天然层粘连蛋白-1的聚苯乙烯板的每个孔中。将细胞在37°C的培养皿中培养30分钟，培养后，通过抽吸去除非粘附细胞，并用无菌PBS（pH 6.0）冲洗培养皿三次。用血色染色试剂盒对贴附在层粘连蛋白上的内皮细胞进行染色，将其浸入200μl的10%醋酸中，加入每个孔中以去除结合的染料，并在摇床上培养3-4分钟。最后在590 nm处测量染色溶液的光密度。

抗人α2（a2，CD49b）整合素亚单位存在时内皮细胞与层粘连蛋白的粘附

用20μl 250μg/ml人IgG清洗100至200万HUVEC并在冰上预培养5分钟，以阻止非特异性结合，然后用80μl单克隆抗α2整合素亚基（初始浓度：0.25 mg/ml）在冰上和黑暗中以1:50稀释培养45分钟。在没有用作对照的抗α2整合素亚基的情况下，用250μg/ml人IgG培养的细胞。然后用含有50 mM磷酸钠（pH 7.5）、100 mM氯化钾、150 mM氯化钠、5%甘油和0.2%牛血清白蛋白的特定缓冲液清洗细胞三次。为了稀释抗体，使用相同的缓冲液。

然后如上所述评估人类脐带静脉内皮细胞与天然和氧化层粘连蛋白的粘附。

ELISA法检测内皮细胞ICAM-1的表达

将100微升细胞悬浮液（80000个细胞在Earle 199培养基中，10%FCS）放置在预先涂有37.5μg/ml天然或氧化层粘连蛋白-1的聚苯乙烯板的每个孔中。然后在37°C的温度下将细胞在微孔中培养过夜。在先导性实验中，使用如上所述的血色试剂盒估计在这些条件下（隔夜培养）附着于氧化或天然层粘连蛋白的细胞数量，发现数量相等。

培养后，抽吸丢弃培养基，并用100μl无菌PBS 1×冲洗微孔一次。通过改进先前描述的方法，评估粘附在天然或氧化层粘连蛋白上的内皮细胞中ICAM-1的表达(新宫等。1994). 简而言之，向每个孔中添加50μl 0.2μg/孔小鼠抗ICAM单抗（Earle 199培养基中），并在37°C下培养1小时。孵育后，用PBS 1×洗涤微孔三次，向每个微孔中添加100μl稀释在Earle 199培养基中的辣根过氧化物酶结合抗鼠IgG 1:10000，并在37°C下孵育1h。然后用PBS 1×和100μl的3,3′，5,5′-四甲基联苯胺（TMB）溶液在底物缓冲液（1.455 g Na）中清洗孔四次2高性能操作41.91 g柠檬酸，pH 5，2μl 30%H2O（运行）2，最终体积：200 ml）添加到每个孔中，并在37°C下培养50 min。最后使用ELISA阅读器在450 nm处读取光密度。

单核细胞粘附试验

在微孔上测量单核细胞附着。将80000个IMDM细胞（10%FCS）置于预涂有内皮细胞（106/ml）如上文所述，预先连接到37.5μg/ml氧化或天然层粘连蛋白-1。单核细胞在37°C的温度下在微孔中孵育30分钟，孵育后，通过抽吸去除非粘附细胞，并用无菌PBS（pH 6.0）冲洗微孔三次。如前所述，使用髓过氧化物酶（MPO）分析定量单核细胞附着(科利亚科斯等。, 2004). 简而言之，单核细胞在37°C的PBS（pH 6.0）中用0.5%（w/v）十六烷基三甲基溴化铵溶解30分钟。裂解后，在含有0.4 mM H的PBS（pH 6.0）中加入50μl 0.2 mg/ml二茴香胺盐酸盐2O（运行）2添加到每个井中。15分钟后，使用ELISA阅读器在405 nm处分光光度法测定裂解液的MPO活性。

在存在抗人αL（aL，CD11a）、αM（aM，CD11b）和β2（b2，CD18）整合素亚基的情况下，单核细胞附着于预先附着于氧化或天然层粘连蛋白的HUVEC

将1至200万单核细胞洗涤并与20μl 250μg/ml人IgG在冰上预孵育5分钟，以阻断非特异性结合，然后与10μl 0.1 mg/ml抗人αl（CD11a）、0.1 mg/ml抗人αM（CD11b）或0.1 mg/ml抗人β2（CD18）在冰上和黑暗中孵育45分钟整合素亚基。然后用PBS清洗细胞三次。然后如上所述评估单核细胞与HUVEC的附着，该单核细胞预先附着在氧化或非氧化层粘连蛋白上。

统计分析

为了进行统计评估，使用了适用于Windows的统计软件GraphPad InStat 3.00版（GraphPad-software Inc.，San Diego，CA，USA）。数值表示为平均值±平均值标准误差（SEM）。通过Student t检验（成对或非成对）估计数据集之间差异的统计显著性。此外，在适当的情况下，单向方差分析采用Bonferroni或Dunnett后验。双尾蛇P（P）以<0.05为显著性水平。

结果

内皮细胞附着于氧化层粘连蛋白和天然层粘连素-1。α2整合素亚基的作用

为了研究层粘连蛋白氧化是否会影响其与内皮细胞的相互作用，研究了培养30分钟后内皮细胞与氧化和非氧化层粘连素的粘附。我们的结果表明，孵育30分钟后，HUVEC与氧化层粘连蛋白的结合程度高于非氧化分子(P（P）≤ 0.05) (图1). 此外，将HUVEC与抗α2整合素亚单位抗体孵育后，与之前观察到的差异相等(P（P）≤ 0.05) (图1).

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在存在或不存在针对α2（a2）整合素亚基（抗CD49b）的抗体的情况下，内皮细胞附着于氧化或天然层粘连蛋白-1。条形代表至少15个独立实验平均值±标准误差。*表明与附着在非氧化层粘连蛋白-1上的内皮细胞的数值存在显著差异表明与附着于氧化层粘连蛋白-1的内皮细胞中获得的值存在显著差异。

另一方面，过夜培养后，所有附着在基质上的细胞要么是天然的，要么是氧化的。因此，在接下来的实验中，在隔夜培养后使用预先贴附的内皮细胞。

氧化和天然层粘连蛋白-1附着的内皮细胞中ICAM-1的表达

为了定量氧化层粘连蛋白附着的内皮细胞与天然分子附着的内皮细胞核之间ICAM-1表达的差异，我们使用了一种敏感的ELISA检测(新宫等。1994). ICAM的表达也被评估到附着在塑料表面的HUVEC上。可塑表面是指ELISA板孔的底部，用于评估HUVEC与氧化或天然层粘连蛋白的ICAM表达。这些样品被用作阴性对照，以估计HUVEC对非蛋白质底物的附着。HUVEC与塑料表面的附着估计为0.316（A450纳米).

我们的结果表明，与那些附着于非氧化分子的内皮细胞相比，附着于氧化层粘连蛋白-1的内皮细胞表达更高水平的ICAM-1(P（P）< 0.0001) (图2).

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粘附于氧化层粘连蛋白或天然层粘连素-1的内皮细胞中ICAM-1的表达。条形代表至少15个独立实验平均值±标准误差。*表明与附着在非氧化层粘连蛋白-1上的内皮细胞的数值存在显著差异。**表明与附着于氧化层粘连蛋白或天然层粘连素-1的内皮细胞的数值存在显著差异。

单核细胞附着于附着于氧化或天然层粘连蛋白-1的内皮细胞

我们发现，附着在氧化层粘连蛋白上的HUVEC表达较高水平的ICAM-1，因此我们研究了其单核细胞募集能力是否相应增加。对于与氧化层粘连或天然层粘连的HUVEC相连的未知单核细胞样品的定量，使用基于吸光度（a）的标准曲线405纳米)不同比例的MPO，反映了不同数量的细胞（100000=100%MPO）(图3a).

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（a） 预附着于氧化层粘连蛋白或天然层粘连素的HUVEC上未知单核细胞样品定量的标准曲线。（b） 单核细胞附着在内皮细胞上，该内皮细胞预先附着在氧化或非氧化层粘连蛋白-1上。条形代表至少15个独立实验平均值±标准误差。*表明与内皮细胞上预先附着到天然层粘连蛋白-1的单核细胞的数值存在显著差异。

根据我们的结果，与附着在天然分子上的单核细胞相比，附着在氧化层粘连蛋白上的内皮细胞与单核细胞的粘附程度更高(P（P）= 0.005) (图3). 此外，由于单核细胞与内皮细胞的粘附主要由ICAM-1与整合素αLbeta2（aL（左）b条2)和alphaMbeta2（aM（M）b条2)，我们研究了在存在或不存在抗αM和抗β2整合素亚基抗体的情况下，单核细胞附着在氧化层粘连蛋白或天然层粘连素上的HUVEC。我们的结果表明，用抗αM和β2整合素亚基抗体孵育单核细胞，与之前观察到的差异相等(P（P）<0.0001），而与αL整合素亚基抗体孵育并不影响HUVEC与oxLMN的粘附(表1)（Dunnett后测试：P（P）<0.0001，Bonferroni后测试：P（P）< 0.0001). 此外，我们的结果表明，单核细胞粘附的差异并不是由于内皮细胞附着在氧化层粘连蛋白或天然层粘连素上的数量差异造成的，因为在我们的实验条件下，HUVEC以相同的程度附着在氧化或天然层粘连蛋白上（数据未显示）。

表1

在存在抗αL（CD11a）或αM（CD11b）或β2（CD18）整合素亚基的情况下，单核细胞附着在氧化或天然层粘连蛋白上的HUVEC上

治疗细胞数±SD#(×10三)
LMN公司91.7 ± 3.6
LMN+反字母L（CD11a）95.3 ± 9*
LMN+抗αM（CD11b）90.5 ± 0.2
LMN+抗β2（CD18）91.7 ± 3.7
oxLMN公司95.2 ± 0.26*
oxLMN+抗αL（CD11a）95.8 ± 0.2
oxLMN+抗αM（CD11b）75.4 ± 1.5**
oxLMN+抗β2（CD18）90.1 ± 0.3**
#至少10个独立实验的平均值。
*与LMN值的显著差异(P（P）< 0.05).
**与oxLMN值有显著差异(P（P）< 0.05).

讨论

本研究结果表明，与附着于天然层粘连蛋白的相同细胞相比，附着于氧化层粘连素的内皮细胞（HUVEC）表面的单核细胞附着率增加。这是第一次单核细胞与内皮细胞的粘附增加与层粘连蛋白氧化有关。

用抗αM和β2整合素而非αL整合素亚基的抗体孵育单核细胞，使先前观察到的差异相等。根据我们的结果，以前的研究表明，刺激的单核细胞粘附内皮细胞是由αM（CD11b）介导的(普列托等。1988;哈萨尔等。1991)而不是αL（CD11a）整合素亚基(普列托等。1988)当使用针对上述整合素的特异性抗体时。

此外，有报道称，单核细胞对内皮细胞表面的亲和力依赖于ICAM-1的表达，因为ICAM-1是内皮细胞表面主要的单核细胞粘附分子之一(霍雷2001).

因此，本研究的数据表明，与粘附在天然分子上的HUVEC相比，粘附在氧化层粘连蛋白上的HU VEC细胞表面的ICAM-1表达更高。为了评估单核细胞在HUVEC表面的附着和ICAM-1的表达，进行了HUVEC-层粘连蛋白的过夜培养，以实现所有细胞（100%）与氧化层粘连或天然层粘连。当单核细胞被添加到内皮细胞基质中时，内皮细胞已经完全附着在氧化或非氧化层粘连蛋白上。据我们所知，经过过夜培养后，尚未发现HUVEC细胞分化。此外，使用的HUVEC细胞群体是均质的，而添加到氧化层粘连蛋白或天然层粘连素中的细胞来自同一样本。

因此，观察到的差异不能归因于层粘连蛋白上附着的细胞数量，而是归因于蛋白质本身的氧化修饰。

本研究的进一步发现是，培养30分钟后，HUVEC细胞与氧化层粘连蛋白的亲和力高于天然分子。据我们所知，这是层粘连蛋白氧化首次与内皮细胞附着相关。值得注意的是，我们实验室以前的研究表明，与非氧化分子相比，单核细胞与氧化层粘连的程度更高(科斯蒂杜等。2007;科斯蒂杜等。, 2009). 为了评估HUVEC与层粘连蛋白亲和力的差异，细胞与层粘着蛋白孵育仅30分钟。可以想象，HUVEC需要更多时间才能完全附着到层粘连素上。因此，在培养过夜后，所有接种的细胞都附着在两种形式的层粘连蛋白上，即天然层粘连蛋白和氧化层粘连蛋白。基于上述，可以推测，HUVEC与层粘连蛋白的初始连接具有时间依赖性，这反映了细胞与氧化层粘连或天然层粘连素之间亲和力的差异。

与天然分子相比，内皮细胞对氧化层粘连蛋白的亲和力增加可能反映了体内内皮细胞对暴露于氧化应激的损伤进行更快覆盖的趋势。氧化应激是动脉粥样硬化的一个常见特征，因此，细胞外基质氧化也可能在动脉粥样硬化中常见。

人脐带静脉内皮细胞主要通过各种整合素受体与细胞外基质相互作用，每一种受体识别特定的细胞外序列(电影院等。1998;Garmy-Susini&Varner 2008年). 氧化分子和天然分子之间观察到的HUVEC与层粘连蛋白之间的差异可能归因于通过不同整合素受体的细胞-层粘连。因此，可以假设，通过层粘连蛋白氧化添加负电荷残基可以改变分子的形状和构象，从而与细胞发生修饰性相互作用。氧化可以在层粘连蛋白表面释放一些新的整合素结合位点，这些位点在非氧化条件下是隐蔽的。

我们的数据还表明，a2整合素亚基在HUVEC与氧化层粘连而非天然层粘连方面起着特殊作用。已知α2β1整合素参与动脉粥样硬化(歌海娜等。2003)，在糖尿病和代谢综合征中发现增加(金等。1996;科斯蒂杜等。2007;科斯蒂杜等。, 2009)然而，除了a2整合素亚基之外，我们的数据并不排除其他细胞表面分子参与了上述现象。

本论文中使用的层粘连蛋白-1被认为是层粘连蛋白质的原型，因为它很容易从Engelbreth-Holm-Swarm（EHS）肿瘤的基质中分离出来(廷普尔等。1979). 在渗出过程中与单核细胞接触的血管特异性层粘连蛋白亚型是层粘连素-8和层粘连酶-10(佩德拉扎等。2000). 有趣的是，层粘蛋白-1、层粘蛋白-8和层粘蛋白-10共享相同的β链和γ链（β1-gamma1）(矿工等。1997). 因此，可以假设上述易于磷酸化的链(特蕾莎娜等。2005)也可能容易发生其他类型的翻译后修饰，如氧化。

总结我们的数据，我们认为氧化修饰的层粘连蛋白可能通过α2整合素激活内皮细胞，并触发它们表达ICAM-1和其他细胞表面分子水平的增加，在内皮表面招募血单核细胞。据报道，内皮细胞与氧化纤维蛋白原结合后，内皮细胞表面ICAM-1表达上调(什切格洛维托娃等。2006)和纤维连接蛋白(奥尔等。2005). 据报道，功能失调的内皮细胞产生的ICAM增加导致动脉粥样硬化中单核细胞和T淋巴细胞的粘附增加(Gimbrone&Topper 1999年). 然而，这是首次通过内皮细胞和单核细胞粘附增加ICAM表达与氧化层粘连蛋白相关。众所周知，活化的内皮细胞可以释放多种分子，包括趋化因子，据报道，这些分子可以激活整合素，而整合素是单核细胞与内皮细胞更充分结合所必需的(韦伯等。1996). 因此，活化的内皮细胞可以通过这种方式诱导单核细胞中αMbeta2（CD11b/CD18）整合素的活化，而ICAM-1表达增加可以通过与活化的αMbeta 2（CD11 b/CD18，整合素）的相互作用招募单核细胞。

我们的数据并不排除其他粘附分子，如VCAM-1和选择素参与上述现象。值得注意的是，VCAM-1被发现在小鼠动脉粥样硬化过程的启动中起着关键作用，而其在管腔内皮的表达先于巨噬细胞的内皮下积聚(丹斯基等。2001). 然而，本研究的重点是粘附在氧化层粘连蛋白上的内皮细胞中ICAM-1的表达。

总之，我们的数据首次表明，在基底膜蛋白如层粘连蛋白被氧化修饰的情况下，内皮细胞和基底膜之间的相互作用也可以通过α2整合素亚基的参与而被修饰。这种修饰的相互作用可以导致单核细胞募集能力的增加，这归因于ICAM-1表达的增加以及αM和β2整合素亚单位的参与。这些初步观察结果，再加上未来的研究，可能会对动脉粥样硬化病变的发生和发展机制产生新的见解。

致谢

本论文是03ED29研究项目的一部分，该项目在“人类研究人力强化计划”（PENED）的框架内实施，由国家和社区基金共同资助（25%来自希腊发展部-研究与技术总秘书处，75%来自欧盟-欧洲社会基金）。

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文章来自国际实验病理学杂志由以下人员提供威利