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天冬氨酸-351、赖氨酸-352和赖氨酸-515的突变改变了COS-1细胞中表达的Ca2+-ATPase的Ca2+转运活性。
加拿大安大略省多伦多大学查尔斯·贝斯特研究所，班廷和贝斯特医学研究部。
摘要
编码兔快速抽搐骨骼肌肌浆网Ca2+-ATP酶新生儿和成人亚型的全长cDNA在COS-1细胞中瞬时表达。从转染COS-1细胞分离的微粒体部分含有免疫反应性Ca2+-ATPase，催化Ca2+转运的速率至少是对照组的15倍。两种亚型催化的钙转运速率或钙依赖性没有差异。天冬氨酸-351是酶中催化酰基磷酸的形成位点，被突变为天冬酰胺、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、组氨酸或丙氨酸。在每种情况下，Ca2+转运活性和Ca2+依赖性磷酸化都被消除。通过将赖氨酸-352突变为精氨酸、谷氨酰胺或谷氨酸，或将Asp351-Lys352突变为Lys351-Asp352，也可以消除钙转运。酶中异硫氰酸荧光素修饰位点赖氨酸-515的突变导致Ca2+转运活性降低，如下所示：精氨酸，60%；谷氨酰胺，25%；谷氨酸，5%。这些结果证明了酰基磷酸形成对Ca2+转运功能的绝对要求，并定义了一个对ATP结合很重要的残基。他们还证明了通过表达和定点突变彻底分析Ca2+-ATP酶活性位点的可行性。
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