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国际实验病理学杂志。2009年8月；90(4): 454–462.
数字对象标识：10.1111/j.1365-2613.2009.00660.x号
预防性维修识别码：项目经理2741156
PMID：19659904

西地那非慢性治疗刺激Leydig细胞和睾酮分泌

卡琳娜·利迪安娜·阿尔坎塔拉·萨拉瓦,*† 阿曼达·卡罗琳娜·苏亚雷斯·E·席尔瓦,* 玛丽亚·伊恩的流浪者,‡ Araken Almeida De Araújo公司,§ 何塞·罗伯托·波特略·德·苏扎（JoséRoberto Botelho De Souza）,和克里斯蒂娜·阿尔夫斯·佩克索托*†
作者信息 文章注释 版权和许可信息 PMC免责声明

摘要

磷酸二酯酶5型（PDE5）抑制剂西地那非是一种新型的口服治疗肺动脉高压的方法。由于Leydig细胞呈现PDE5，本研究旨在研究西地那非（25 mg/kg）慢性治疗对男性的影响瑞士韦伯斯特小鼠类固醇生成。在为期4周的实验设计后，通过形态学和免疫细胞化学程序对Leydig细胞进行分析。用放射免疫法测定血清睾酮。莱迪格细胞出现了显著的超微结构改变，如囊泡状的光滑内质网、大液泡散布在细胞质中、线粒体增大，嵴不连续，轮生膜周围有囊泡，这些都是类固醇分泌细胞活化的典型特征。在分离的Leydig细胞中检测到类固醇生成急性调节蛋白、细胞色素P450侧链裂解酶和睾酮的重要免疫细胞化学标记。此外，西地那非治疗组小鼠的总睾酮水平显著增加。本研究获得的结果与以下假设一致：通过抑制PDE5积累环鸟苷一磷酸可能参与雄激素生物合成刺激。肺动脉高压患者应考虑激素紊乱的重要临床意义。

关键词：莱迪格细胞、P450scc、西地那非、StAR、类固醇生成、睾酮

环核苷酸单磷酸（cAMP和cGMP）是平滑肌运动、电解质稳态、神经内分泌信号和视网膜光转导等多种过程的重要细胞内调节因子。不稳定气体一氧化氮（NO）是平滑肌松弛的关键介质，它与细胞质中的可溶性鸟苷酸环化酶（sGC）相互作用，以增加三磷酸鸟苷（GTP）向环磷酸鸟苷的转化。另一方面，利钠肽激活膜结合的鸟苷酸环化酶并积累细胞内cGMP。cGMP的增加触发了信号转导级联反应，包括激活环核苷酸依赖的蛋白激酶a和G，随后肌动蛋白系统的磷酸化，以及钙2+通道和三磷酸腺苷驱动的Ca2+位于肌浆网外细胞膜的泵。这种级联导致细胞溶质钙的减少2+并使肌肉放松(乌克特等。2006;季米特里亚季斯等。2008).

西地那非是一种名为UK-92480的化合物，是一种水溶性柠檬酸盐，由英国辉瑞公司首次合成，用于治疗高血压和心绞痛。有趣的是，这种药物表现出不同的药理作用，显著的阴茎勃起，成为勃起功能障碍的一线治疗选择(Kalsi&Kell 2004年;乌塔亚萨斯等。2007). 据报道，全世界有2000多万男性接受这种药物治疗，每年花费约20亿美元(Sharma 2007年).

西地那非治疗的可能性来自于调节细胞内cGMP水平。这种环核苷酸被细胞内5型磷酸二酯酶降解为非活性形式(PDE5）酶，存在于系统血管平滑肌和血小板中(戈弗拉尼等。2006). 西地那非的主要药理作用是以抑制浓度（IC）抑制cGMP特异性PDE550)2至7nM(雅培等。2004)导致cGMP在靶器官中积累和特殊作用。

肺动脉高压是一种罕见的侵袭性疾病，影响儿童和成人，预后差，生活期望值低。它可以分为原发性或继发性高血压，有多种病因。原发性肺动脉高压的原因尚不清楚，但继发性肺高压可能是由于肺、心脏和胸外功能障碍所致(乌塔亚萨斯等。2007).

西地那非彻底改变了肺动脉高压的治疗。研究表明，这种药物通过增加肺部血液供应来减轻肺动脉高压。这种药物降低了右心室收缩压、右心室肥厚、肺动脉肌化并增加了cGMP水平，表明NO-cGMP途径对药物反应有贡献(赵等。2001,2003).

长期以来，使用高剂量西地那非作为儿童和成人的补充治疗，进行了几项肺动脉高压的临床研究(舒尔泽·奈克等。2003;斯托克等。2003;卡拉察等。2004;驼峰等。2005;普雷斯顿等。2005;加尼埃等。2006;洛巴托等。2006). 根据卡拉察等。(2005)西地那非治疗系列肺动脉高压儿童增加了运动能力，改善了氧合血红蛋白饱和度，无任何副作用，似乎对该病的治疗有益。

然而，应考虑高剂量和每日剂量西地那非治疗肺动脉高压的重要意义。最近，PDE5通过免疫组织化学和western blotting在大鼠睾丸的血管平滑肌细胞、睾丸间质细胞和肾小管周细胞中定位(希皮奥尼等。2005). 因此，似乎有必要研究干扰PDE5活性的化合物，如西地那非，是否会影响睾丸生理。

本研究首次描述了西地那非慢性治疗对小鼠Leydig细胞的影响，有助于更好地了解其对类固醇生成的作用。

材料和方法

化学制品

西地那非来自美国纽约州纽约市辉瑞公司；Sespo Comércio e Indústria Ltda.的麻醉剂氯胺酮和二甲苯嗪。，巴西圣保罗；来自美国纽约州格兰德岛Gibco的Hank平衡盐溶液（HBSS）和Medium 199（M199）；来自Miles，Naperville，IL，USA的牛血清白蛋白（BSA，组分V）；Percoll来自瑞典乌普萨拉GE Healthcare Bio-Sciences AB；胶原酶（I型）、大豆胰蛋白酶抑制剂、人绒毛膜促性腺激素（hCG）、亮肽、戊二醛、多聚甲醛、Cacodylic酸、磷酸一钠和磷酸二钠七水合物、四氧化锇、氯化钙、铁氰化钾、氯化铵、吐温20、硝酸铅（II）和柠檬酸钠，来自Sigma Chemical Co。，美国密苏里州圣路易斯；SPIN-PON树脂（Embed 812）、LR-White树脂和美国宾夕法尼亚州华盛顿电子显微镜科学公司生产的乙酸铀；丙酮和乙醇购自Isofar Indüstria e Comércio de Produtos Químicos Ltda。，巴西里约热内卢。

实验设计

40岁青春期瑞士韦伯斯特所有实验均使用25天龄、体重15-20克的小鼠（取自巴西累西腓Pesquisas Aggeu Magalháes/FIOCRUZ）。检查小鼠的健康状况，并使其适应25°C和12小时光照：12小时暗光周期的实验室环境。这些动物被关在金属笼子里，并以标准的实验室饮食喂养。实验组由20只动物组成，通过饮用水给予25 mg/kg体重的西地那非4周(赵等。2003). 每天记录体重，并调整水中药物浓度以保持剂量。对照组也由20只只接受纯水的动物组成，使用与上述相同的程序。所有实验均按照道德准则（L-0035/08–CEUA/FIOCRUZ）进行。

用西地那非治疗后，实验动物和对照动物用氯胺酮（115 mg/kg，i.m.）和木聚嗪（10 mg/kg，i.m.）麻醉，然后通过无抗凝剂的心脏穿刺采血。血清分离并储存在-70°C下，用于睾酮激素的放射免疫测定。快速解剖并固定睾丸进行形态学分析。

光学显微镜

将睾丸固定在Bouin溶液中8小时，然后在乙醇系列中脱水并嵌入石蜡中。使用切片机切割4μm的连续切片(莱卡牌手表RM 2125RT），并用苏木精-伊红染色进行组织学观察(翁等。2005).

莱迪格细胞分离

小鼠Leydig细胞富集制剂的分离和纯化经过改良Hedger和Eddy（1986）和Wanderley和Negro-Vilar（1996）在无菌条件下，用细镊子将睾丸剥离，不破坏生精小管，并在含有0.5 mg/ml胶原酶、0.2 mg/ml大豆胰蛋白酶抑制剂和5μg/ml亮氨酸蛋白酶的汉克平衡盐（含0.1%BSA（HBSS/BSA），pH 7.4，在恒温摇动水浴中（20分钟，90 Hz，34°C）。将分散的睾丸悬浮在50 ml（最终体积）HBSS/BSA中，并让其沉淀（5分钟）。用塑料吸管吸取含有莱迪格细胞的上清液，通过70μm尼龙细胞过滤器过滤，并用50 ml HBSS/BSA清洗。细胞悬浮液在150℃离心克，15分钟，20°C。将获得的颗粒重新悬浮在5 ml HBSS/BSA中，代表粗制睾丸间质细胞悬浮液。采用间断Percoll密度梯度（20%、35%、43%、68%和90%）获得纯化的Leydig细胞。然后将粗制莱迪格细胞悬浮液涂在梯度顶部，并在800℃下离心克在20°C下保持30分钟。使用注射器仔细抽吸35–43%和43–68%界面中的细胞，并将其转移到含有M199和0.1%BSA的离心管中。混合后，在150克在20°C下培养20分钟，并丢弃所获得的上清液。为了去除多余的Percoll，用含有0.1%BSA的M199清洗细胞颗粒两次，然后在同一溶液中重新悬浮。根据电子显微镜的测定，这些制剂含有70%以上的莱迪格细胞(Hedger&Eddy 1986年). 通过台盼蓝排除法量化细胞存活率（90-95%）。

对于免疫细胞化学分析，用1 mIU/ml hCG在34°C下刺激分离的Leydig细胞30分钟，以刺激类固醇生成途径。然后，立即固定这些细胞进行电子显微镜分析。

电子透射显微镜

对于常规程序，将睾丸碎片和分离的Leydig细胞固定在含有2.5%戊二醛和4%多聚甲醛的溶液中过夜，该溶液置于0.1 M的二羧酸缓冲液中。固定后，将样品在同一缓冲液中洗涤两次，然后将其后固定在含有1%四氧化锇、2mM氯化钙和0.8%铁氰化钾的0.1M二氧化二钙缓冲液（pH 7.2）中的溶液中，在丙酮中脱水，并包埋在Embed 812中。在60°C下聚合3天(萨赖瓦等。2006). 在300米镍网格上收集超薄切片，用5%醋酸铀酰和柠檬酸铅复染，并使用FEI Morgani 268D透射电子显微镜进行检查。

为了进行免疫细胞化学研究，将分离的和hCG刺激的Leydig细胞固定在含有0.5%戊二醛和4%多聚甲醛的0.1M磷酸盐缓冲液中过夜。固定后，将样品在同一缓冲液中清洗三次，用50 mM氯化铵孵育40 min，在乙醇中脱水，并嵌入LR-White树脂中。在30°C下聚合5天。该程序的执行如下所述佩克索托等。(1999).

免疫细胞化学

用金刚石刀切割分离的和hCG刺激的Leydig细胞的超薄切片，并收集在镍网格上。在室温下，在0.02M PBS（pH 7.2）中培养30分钟，其中含有1%BSA和0.01%吐温20（PBS-BT）。然后在PBS-BT中分别以1:25、1:200和1:25的稀释度与抗类固醇生成性急性调节蛋白（StAR）、细胞色素P450scc侧链裂解酶（P450scc）和睾酮的一级抗体孵育切片1小时。然后在PBS BT中清洗切片并与二级抗体孵育，10nm胶体金标山羊抗兔IgG。作为抗体控制，切片只在金标标记存在的情况下培养。按照免疫染色程序，用5%醋酸铀酰和柠檬酸铅对切片进行复染(佩克索托等。1999).

在最终放大56.000倍的显微镜下对10个不同Leydig细胞的显微照片进行定量分析，随机选择这些细胞，用Kruskal–Wallis试验比较对照细胞和西地那非处理细胞中的金标颗粒数量。由于实验处理的细胞和对照样品是用相同的方法处理的，因此没有对组织收缩进行校正。

激素分析

按照制造商试剂盒（Coat-A-Count Total testosterone；Diagnostic Products Corporation，Los Angeles，CA，USA）提供的说明，使用固相放射免疫分析法测定血清睾酮。睾酮测定的灵敏度为4 ng/dl，组内和组间变异系数分别为4–18%和5.9–12%。数值以ng/ml表示。

采用Mann-Whitney试验对数据进行分析，以比较对照组和接受西地那非治疗的生物体的睾酮水平(Zar 1996年).

抗体

在兔子体内培养针对不同肽的多克隆抗体StAR（sc-25806，Santa Cruz Biotechnology，INC.，Santa Cruz，CA，USA）、细胞色素P450scc酶（AB1244；Chemicon International，INC.，Billerica，MA，USA）和睾酮（ab8557，ABCAM INC.，Cambridge，MA，US），对应于代表人类源全长StAR的氨基酸1–285，大鼠细胞色素P450scc酶的氨基酸421–441和与BSA结合的全长睾酮蛋白。10 nm胶体金标山羊抗兔IgG购自Sigma Chemical Co.（美国密苏里州圣路易斯）。

结果

组织学分析

对照组和实验组的Leydig细胞之间未观察到形态学差异（数据未显示）。

电子显微镜分析

在睾丸组织中，对照Leydig细胞表现出不规则多边形的形态特征，在某些情况下，不对称细胞核偏心地位于细胞体内，核仁较大，核浆较轻，核膜内表面异染色质团块较小。丝状伪足突出并与来自相反细胞的丝状伪肢交叉。管状平滑肌内质网（SER）丰富，由贯穿细胞质的相互连接、分支和吻合的小管组成。管状SER偶尔被线粒体和脂滴包围。膜轮回是SER的扁平和部分开窗的池的同心包，经常被观察到。粗面内质网稀少，主要位于核周和周围区域。线粒体遍布细胞质，分布不规则，表面常被SER池包裹。线粒体大小不一，有管状和厚嵴。几个高尔基复合体分散在细胞体中，通常在细胞极附近发现，因为细胞核的位置是偏心的。检测到一些致密体，可能是自然界中的溶酶体。细胞质的部分区域发现大小不规则的过氧化物酶体。通过细胞质可以看到几个大小不等的脂滴，其中一些与SER保持密切接触(图1a、c和e).

保存图片、插图等的外部文件。对象名称为iep0090-0454-f1.jpg

睾丸间质细胞。（a、c和e）未经处理的Leydig细胞，显示细胞核（N）、脂滴（L）、几个带有管状嵴的线粒体（M）、管状平滑内质网（SER）、稀少的粗面内质网和过氧化物酶体（星形）。（b、d和f）25 mg/kg西地那非处理的Leydig细胞呈现细胞核（N）、脂滴（L和高尔基（黑色箭头）。棒材，1μm（a、b、c、d）；500纳米（e，f）。

西地那非处理的Leydig细胞呈现上述所有细胞器。观察到一些差异，例如由不同直径的分离囊泡组成的囊泡SER。小泡中出现管状SER岛。在外周细胞质中发现了一些大液泡，可能是向细胞外间隙开放的。线粒体增大，嵴排列紊乱或中断。在膜轮回周围观察到几个小泡，可能与激素前体的分泌有关(图1b、d和f). 上述所有这些变化都是类固醇生成能力增强的活化细胞的典型特征。

在分离的Leydig细胞中观察到类似的形态学差异。然而，SER表现为小梁样外观。这种变化可能与隔离程序有关。hCG刺激不会改变处理组和对照组分离的Leydig细胞的超微结构特征(图2).

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分离的莱迪格细胞。（a） 未经hCG刺激的未处理Leydig细胞；（b） 25 mg/kg西地那非处理的Leydig细胞，无hCG刺激；（c） hCG刺激未处理的Leydig细胞；（d） 用hCG刺激25mg/kg西地那非处理的Leydig细胞。所有处理均具有相似的超微结构形态：脂滴（L）、带管状嵴的线粒体（M）、细胞核（N）和小梁平滑肌内质网（SER）。条形，500 nm。

Leydig细胞中的StAR、P450scc和睾酮

免疫细胞化学显示，西地那非处理的Leydig细胞中酶促类固醇生成途径明显更为活跃。与对照样品相比，在处理细胞的细胞质中检测到明显的StAR、P450scc和睾酮标记。然而，在检测P450scc时，在线粒体中观察到强烈反应(图3和表1).

表1

对照组和西地那非处理的Leydig细胞中金标颗粒分布的定量分析

金标粒子数
StAR公司
细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶
睾酮
控制西地那非（25 mg/kg）控制西地那非（25 mg/kg）控制西地那非（25 mg/kg）
线粒体1 ± 1.3334.9 ± 4.5813.1 ± 1.4499.8 ± 4.341*0.3 ± 0.6752.6 ± 2.875
SER公司03.6 ± 4.9710.8 ± 1.3172.8 ± 1.9890.6 ± 0.6994.1 ± 2.767
脂滴03 ± 5.6210001.333 ± 1.506
真空管0.222 ± 0.4410.3 ± 0.6750.143 ± 0.3780.5 ± 0.9260.143 ± 0.3783.889±8.373
总计数1.2 ± 1.31710.6 ± 10.426*4 ± 2.10813 ± 4.163*1±1.05411 ± 6.092*

类固醇生成性急性调节；P450scc、P450侧链裂解酶；SER，滑面内质网。

在处理过的细胞中发现显著变化（*Kruskal–Wallis，P（P）< 0.01). 金标颗粒的平均值（平均值±SD）；n个= 10.

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StAR、P450scc和睾酮免疫细胞化学。（a、c和e）在非西地那非处理的样品中观察到StAR（a）、P450scc（c）和睾酮（e）的弱标记（箭头）。（b、d和f）在25 mg/kg西地那非处理的Leydig细胞中检测到StAR（b）、P450scc（d）和睾酮（f）标记增加（箭头）。脂滴（L）、线粒体（M）、滑面内质网（SER）、液泡（V）。棒材，200 nm。

血清睾酮浓度

与对照动物（Mann–Whitney，P（P）< 0.01). 两组参数如所示表2.

表2

西地那非治疗对小鼠血清睾酮水平的影响（ng/ml）

血清睾酮水平（ng/ml）
N个平均值最小值最大值标准偏差曼·惠特尼
控制160.390.131.600.36Z轴= 3.26
西地那非（25 mg/kg）174.840.17145.14

25 mg/kg西地那非与对照样品之间存在显著差异，P（P）< 0.01.

讨论

使用西地那非可以证明cGMP系统与类固醇生成的相关性。特别是在睾丸中，这种环核苷酸参与精子运动、睾丸生殖细胞的发育、肾小管周固有层细胞的松弛、睾丸间质细胞中睾酮的生成和睾丸血管的扩张(米登多尔夫等。2000).

分泌类固醇的Leydig细胞调节男性生殖道的发育和活动以及外部性特征，并可能促进生精小管中的精子发生。类固醇激素是由胆固醇在一个多步骤的酶过程中合成的，在这个过程中，StAR似乎将胆固醇从细胞储存物转移到线粒体内膜，并通过细胞色素P450scc酶转化为孕烯醇酮。在睾酮合成之前，孕烯醇酮在SER中被转运并酶促转化为睾酮前体(Clark&Cochrum 2007年;杨等。2007).

这是首次证明西地那非慢性治疗对Leydig细胞类固醇生成的影响的研究。这些细胞由丰富的滑面内质网、大量带有管状嵴的线粒体和数量可变的脂滴组成，它们积极参与激素的生物合成。

西地那非处理的Leydig细胞显示出泡状SER和一些散布在细胞质中的大液泡，这是活跃分泌细胞的特征。根据Ohata（1979）这些空泡来源于SER的含睾酮小泡，可以向细胞表面迁移，进入细胞外空间。

膜轮生的功能尚不明确。据推测，这种细胞器储存用于睾酮合成的胆固醇。有趣的是，在西地那非处理的Leydig细胞中，在轮虫的外围观察到几个小泡，这可能与激素前体运输有关。

分离的Leydig细胞表现出相似的超微结构特征；然而，他们显示了一个小梁样的SER。这种形态变化可能与分离过程有关，因为这些细胞是在酶溶液中消化的，可能会影响纤丝网络。

本研究中观察到的所有超微结构改变都可能与睾酮合成增强有关，这是由PDE5抑制和cGMP积累所致。为了证实这一假设，进行了免疫细胞化学和激素研究。结果表明，治疗组分离的hCG刺激Leydig细胞中StAR、P450scc和睾酮的标记增强。此外，与对照组相比，治疗组的血浆睾酮显著增加。

PDE5抑制剂通过抑制5型磷酸二酯酶（一种负责降解cGMP的酶）来促进其药理作用。这种环核苷酸水平的升高影响许多细胞内功能(格伦等。2007). 这种药物机制可能参与类固醇生成途径的激活和睾酮分泌，因为最近在Leydig细胞中发现了PDE5(希皮奥尼等。2005). 类固醇激素由性腺中的胆固醇合成，以响应垂体激素，例如hCG，通过经典的第一信使/第二信使途径。为了阐明hCG介导的睾酮合成诱导机制，研究了3β-HSD-1、P450的变化供应链控制和StAR在小鼠Leydig细胞中的表达，并检测到这些酶的增强表达(杨等。2007). 在本研究中，西地那非慢性治疗后，分离的和hCG刺激的Leydig细胞表现出StAR、P450scc和睾酮的免疫定位增强。这些数据表明，西地那非和hCG可能通过不同的机制协同作用提高cGMP水平。hCG通过激活鸟苷环化酶系统增加细胞内cGMP的产生(林等。1979;Mukhopadhyay&Leideberger 1988年)西地那非通过抑制PDE5诱导cGMP积累，或通过NO或ANP依赖机制发挥作用(普雷斯顿等。2004).

环状GMP由两类称为鸟苷酸环化酶的酶合成，这两类酶都从细胞内GTP生成cGMP。颗粒鸟苷酸环化酶是结合利钠肽和鸟苷肽的膜结合受体。sGC是一种含血红素的异二聚体一氧化氮受体。它由构成活性酶的两个亚基α和β组成。cGMP直接作用于效应物，如cGMP依赖性蛋白激酶、环核苷酸门控通道和cGMP调节的磷酸二酯酶(Wong&Garbers 1992年;Krutreaker&Murad 2006年).

安德里克等。(2007)描述了鸟苷酸环化酶的刺激和磷酸二酯酶5的抑制在体外伴随着cGMP和雄激素生成的升高。然而，sGC和蛋白激酶G（PKG）的抑制显著减少了StAR的磷酸化，导致类固醇生成减少。因此，作者认为cGMP通过PKG依赖性修饰StAR蛋白参与莱迪格细胞类固醇生成。

一项研究探讨了4β-PMA（蛋白激酶C（PKC）的一种有效激活剂）对心房肽诱导的Leydig细胞睾酮生成和cGMP积累的影响。该化合物通过PKC刺激的磷酸二酯酶活性增强抑制睾酮生成并显著降低cGMP的量。在磷酸二酯酶抑制剂的存在下，睾酮的生成和cGMP的形成被完全逆转。4β-PMA治疗后激素分泌减少的原因与第二信使的积累减少有关(Mukhopadhyay和Leideberger 1988年).

同样，目前的研究表明，西地那非的慢性治疗可能通过PDE5抑制导致cGMP积累，增加了Leydig细胞中睾酮的生物合成。

本研究获得的结果与卡罗萨等。(2004)患有勃起功能障碍的男性雄激素水平显著低于正常男性。这些作者证明了两种不同的V型磷酸二酯酶抑制剂治疗（塞得那非（50 mg）和他达拉非（20 mg））对睾酮减少可逆性的影响。这种药物治疗能够提高睾酮水平并降低LH水平，这可能是因为性交频率较高。然而，作者并没有排除PDE5抑制剂对人类睾丸直接作用的可能性，因为该组织表达相当高的PDE5。

库拉纳和潘迪（1993）证明在纯化的小鼠Leydig细胞中，心钠素、脑钠尿肽和C型钠尿肽（CNP）诱导睾酮生物合成的中间前体的产生。所有这些利钠肽通过涉及细胞内cGMP生成和积累的跨膜信号转导机制刺激类固醇生成途径。这种刺激作用始于胆固醇转化为孕烯醇酮的第一步。

西地那非对大鼠急性和慢性低氧诱导的肺动脉高压的肺血管扩张作用由心房钠尿肽（ANP）增强，可能是通过协同作用增加血浆cGMP合成(普雷斯顿等。2004). 同样，ANP可能参与Leydig细胞中cGMP的合成，在西地那非治疗后会积累cGMP。相反，NO对Leydig细胞类固醇生成产生抑制作用，这不是由sGC介导的，因为它不能增加cGMP的产生(德尔蓬塔等。1996). 根据米登多尔夫等。(1997)NO和CNP已被证明会影响睾酮的释放。虽然CNP通过cGMP对小鼠cAMP依赖性蛋白激酶的混杂激活而增加睾酮，但由于该药物可以通过直接与血红素铁结合来抑制P450scc酶，因此对NO的反应检测到睾酮水平降低。

雄激素已被证明在人类和实验动物的动脉中发挥直接的血管扩张作用。奥卡等。(2007)结果表明，睾酮前体脱氢表雄酮完全阻断缺氧性肺血管收缩，同时伴随钾通道开放，sGC蛋白表达/活性上调，肺动脉对NO的舒张反应性增强。

此外，Seyrek公司等。(2007)最近已经证明，睾酮的超生理浓度通过ATP-敏感性K发挥作用+桡动脉通道开放引起舒张在体外.

因此，本研究不排除西地那非慢性治疗后类固醇激素生物合成增强可能参与肺动脉高压的改善。

总之，西地那非的慢性治疗可能通过cGMP积累对睾酮生成产生刺激作用。这种增加的激素合成应该被考虑在内，因为这种治疗方案在全世界范围内广泛用于肺动脉高压患者。我们实验室正在进行其他实验，以描述对精子参数和受精能力的可能影响。

致谢

这项工作得到了奥斯瓦尔多·克鲁兹基金会（FIOCRUZ）和国家发展委员会（CNPq）的支持。

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文章来自国际实验病理学杂志由以下人员提供威利