跳到主要内容
访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
神经科学杂志。2009年7月1日；29(26): 8506–8511.
数字对象标识：10.1523/JNEUROSCI.0924-09.2009
预防性维修识别码：PMC2726650型
NIHMSID公司：尼姆斯128482
PMID：19571141

抑制自噬诱导延缓额颞叶痴呆患者ESCRT-III功能障碍引起的神经细胞丢失

李进阿和汾标高通讯作者
作者信息 文章注释 版权和许可信息 PMC免责声明

摘要

自噬是一种保守的溶酶体蛋白降解途径，其在年龄依赖性神经退行性疾病中的确切作用尚不清楚。在这里，我们表明，自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤通过丢失其必需成分mSnf7-2或疾病蛋白CHMP2B的异位表达，延缓了由转运III所需的功能失调的内质体分选复合体（ESCRT-III）引起的神经元细胞丢失简介5与3号染色体相关的额颞叶痴呆有关。自噬基因活性的降低也延缓了神经元的丢失第5天和第7天然而，功能失调的ESCRT-III诱导的泛素化蛋白的内胚体积累没有受到显著影响，进一步证实了失调的自噬途径在神经退行性变中的重要作用。这些发现表明，在某些神经退行性疾病条件下，自噬小体过度积累导致的自噬应激对神经元生存不利。

引言

额颞叶痴呆（FTD）是60岁之前最常见的年龄依赖性神经退行性变，与额叶和/或颞叶的局灶性萎缩有关(Vossel和Miller，2008年). 一些蛋白质与FTD发病机制有关，如Tau(Hong等人，1998年;Hutton等人，1998年)，含缬氨酸蛋白质(Watts等人，2004年)、CHMP2B(Skibinski等人，2005年)，丙二醇(贝克等人，2006年;Cruts等人，2006年)和TDP-43(Neumann等人，2006年). CHMP2B是运输III（ESCRT-III）所需的内体分选复合体的一个成分，该复合体在丹麦FTD3大家族中发现罕见突变(Skibinski等人，2005年). ESCRT-III是将泛素化跨膜蛋白从早期内体运输到多泡体和其他生物过程中的腔泡所必需的(Hurley，2008年). 突变型CHMP2B如何导致神经退行性变尚不完全清楚。

尽管CHMP2B公司突变在FTD患者群体中很罕见，突变蛋白CHMP2B简介5在培养的成熟皮层神经元中引起树突状回缩、自噬体积累和神经元细胞丢失(Lee等人，2007年). 这些神经毒性反应反映了CHMP2B的失败简介5与含有ESCRT-III的mSnf7-2分离(Lee等人，2007年). ESCRT-III的正常功能需要正确的组装和拆卸(Hurley，2008年). 事实上，小干扰RNA（siRNA）敲低mSnf7-2或表达显性阴性形式的SKD1，一种对ESCRT-III分解至关重要的AAA型ATP酶，也会导致自噬体积累和神经元细胞损失(Lee等人，2007年). 其他ESCRT成分的丢失也会破坏非神经元哺乳动物细胞的自噬途径(Filimonenko等人，2007年).

自噬（大自噬）是一种高度保守的大量降解途径，在生理和病理生理条件下对分化、稳态和存活很重要(水岛等人，2008年). 细胞质蛋白质和细胞器主要以非特异性的方式被双层膜隔离。由此产生的空泡称为自噬体，经过一系列成熟步骤，最终与溶酶体融合降解。自噬途径与许多神经退行性疾病有关。例如，神经元自噬在阿尔茨海默病早期被激活，并随着疾病的进展而变得异常(Boland等人，2008年). 与帕金森病相关的α-突触核蛋白突变体通过伴侣介导的自噬途径阻止自身降解，导致获得功能毒性(Cuervo等人，2004年). 此外，激活的自噬有助于清除亨廷顿氏病中的含多聚谷氨酰胺的有毒蛋白质(Ravikumar等人，2004年). 尽管人们普遍认为自噬有利于神经元存活，但其在年龄依赖性神经退行性疾病中的确切作用尚不清楚。特别是，目前尚不清楚自噬体的积累对FTD3不同致病阶段的神经元存活是否具有保护作用或有害作用，也不清楚其他涉及内体-溶酶体途径缺陷的神经退行性疾病。这一重要问题在以下研究中得到了部分解决。

材料和方法

生成和验证第5天和第7天siRNA。

为了生成基因特异性siRNA结构，将两个寡核苷酸退火并克隆到pSUPER-GFP载体（Oligoengine）中。补充表S1中列出了目标序列（可在网址：www.jneurosci.org作为补充材料）。对于慢病毒的产生，第5天,第7天或干扰siRNA，包括H1启动子，被克隆到FUGW载体中。为了验证每个siRNA，成熟的皮层神经元感染了含有第5天或第7天siRNA。感染后4-5天，使用Atg5或Atg7抗体（1:1000；Novus Biological）进行Western blot。

初级皮层神经元的培养和治疗。

从胚胎第18天（E18）的Sprague-Dawley大鼠（Charles River）和第5天−/−老鼠。通过基因组PCR和Atg5抗体的Western blot（1:1000；Novus Biological）证实了Atg5的缺失。在15天时，用Lipofectamine 2000（Invitrogen）转染神经元或感染慢病毒在体外转染后的神经元始终表达绿色荧光蛋白（GFP），转染后第1天GFP阳性神经元的数量作为量化后几天神经元存活的基线。用碘化丙啶（PI）排除试验评估神经元活力。转染后1-3天，GFP阳性和PI阴性神经元被计数为存活神经元。所有实验都重复了三到四次。为了抑制自噬诱导，用CHMP2B转染的成熟皮层神经元简介5或mSnf7-2型siRNA用5 m米3-甲基腺嘌呤（3-MA）（西格玛）或10μ米沃特曼（西格玛）。为了用siRNAs抑制自噬，细胞被转染mSnf7-2型siRNA或CHMP2B简介5每次病毒感染后3-5天。对于所有神经元细胞存活分析，使用Newman–Keuls多重检验进行方差分析(事后（post-hoc）比较）以比较各组之间的统计显著性。为了定位LC3或Rab7，GFP–LC3或GFP–Rab7与CHMP2B共转染简介5或mSnf7-2型小干扰RNA。

蛋白质印迹和免疫染色。

在放射免疫沉淀分析缓冲液（50 m）中均匀化神经元米三氯化氢，pH 7.5，150 m米氯化钠、0.1%NP-40、0.1%十二烷基硫酸钠和0.5%脱氧胆酸钠）。样品用抗LC3（1:1000）、抗泛素（1:1000-mSnf7-2型（1:1000），或抗肌动蛋白（1:2000）和辣根过氧化物酶结合的抗兔或抗鼠二级抗体（1:4000）。如前所述进行免疫染色实验(Lee等人，2007年).

电子显微镜。

野生型（WT）或atg5型−/−小鼠被感染mSnf7-2型siRNA并固定在2%戊二醛、1%多聚甲醛和100 m米碳酸钠，pH 7.4。为了诱导饥饿，培养的成熟皮层神经元在厄尔平衡盐溶液（Invitrogen）中孵育24小时mSnf7-2型敲除小鼠，在E6.5收集胚胎并固定。然后将组织在2%四氧化锇中后固定，在2%乙酸铀酰水溶液中块染，在丙酮中脱水，并包埋在LX-112树脂中（Ladd Research Industries）。超薄切片用0.8%柠檬酸铅进行对比染色，在Jeol JEM-1230电子显微镜上进行检查，并用Gatan Ultrascan USC1000数码相机拍照。

结果

自噬抑制剂延缓功能失调的ESCRT-III诱导的神经细胞丢失

先前的研究表明，功能失调的ESCRT-III会导致自噬体积累，这可能是由于自噬体成熟受阻(Filimonenko等人，2007年;Lee等人，2007年;Lee和Gao，2008年). 为了评估在存在与FTD3相关的突变CHMP2B的情况下，自噬体的积累对神经元存活是否有利或有害，我们从E18胚胎中分离出皮层神经元，培养15天，并用CHMP2B转染分化良好的成熟神经元重量(图1A类)或CHMP2B简介5构造(图1B类,C类)与GFP构造一起使用。我们用自噬抑制剂3-MA处理成熟的皮层神经元，该抑制剂抑制Vps34的活性，Vps34是一种III类磷脂酰肌醇-3（PI3）激酶，在自噬诱导过程中与Beclin 1在囊泡成核中相互作用(Seglen和Gordon，1982年;水岛等人，2008年). 5m处理米3-MA并没有完全阻断CHMP2B引起的神经元细胞丢失，而是延迟了这种丢失简介5表达式(图1C类,D类). 例如，转染后第3天，CHMP2B的58.4%简介5-在有3-MA存在的情况下，表达神经元是活的，但在没有3-MA的情况下只有9.2%是活的(第页< 0.001) (图1D类). 作为阴性对照，3-MA治疗本身并不影响神经元存活(图1D类). 为了进一步证实自噬抑制对神经元细胞存活的影响，我们用沃特曼蛋白处理细胞，沃特曼是另一种抑制Vps34和其他PI3激酶的小分子(Blommaart等人，1997年). 这种治疗也没有完全抑制但确实减缓了CHMP2B简介5-诱导的神经元细胞丢失（补充图S1，可在网址：www.jneurosci.org作为补充材料）。

保存图片、插图等的外部文件。对象名称为zns9990967080001.jpg

自噬抑制剂3-MA部分抑制由功能失调的ESCRT-III引起的神经元细胞丢失。A类，CHMP2B转染后第3天培养的大鼠皮层神经元的图像重量并用二甲基亚砜处理。B类，转染FTD3相关突变蛋白CHMP2B后第3天成熟皮层神经元的图像简介5表现出广泛的神经元细胞丢失。在本实验中，添加了DMSO作为C类.C类将DMSO中的3-MA添加到培养液中，增加表达CHMP2B的皮层神经元的存活率简介5.英寸A–C，绿色信号来自与不同形式的CHMP2B共转染的GFP。D类表达FTD3相关突变蛋白CHMP2B的成熟皮层神经元的存活简介5在存在或不存在3-MA的情况下。E类，在存在或不存在3-MA的情况下，mSnf7-2活性降低的成熟皮层神经元的存活率。值是三个或四个独立实验的平均值±SEM***第页<0.001，由纽曼-凯尔斯多重检验的方差分析确定。由于空间限制，此图中仅显示转染后1、2和3天的值。比例尺：（inC类)A–C，50微米。

我们以前的工作表明，mSnf7-2的siRNA敲除而不是CHMP2B活性的敲除会导致自噬体积累和神经元细胞死亡，而CHMP2B简介5神经毒性是通过其与mSnf7-2更强的相关性介导的(Lee等人，2007年). 因此，我们还检查了5 m米3-MA对mSnf7-2活性降低引起的神经元细胞丢失的影响。我们发现，在mSnf7-2被siRNA敲除后2或3天，3-MA存在时的神经元存活率高于不存在3-MA时的神经元生存率(图1E类). 3-MA在转染mSnf7-2型siRNA或CHMP2B简介5也很明显（数据未显示）。为了证实3-MA确实抑制了功能失调ESCRT-III神经元的自噬途径，我们发现3-MA抑制了内源性LC3-II水平和LC-II/LC-I比率的增加（补充图S2，见网址：www.jneurosci.org作为补充材料），被认为是自噬体形成的生化指标(Klonsky等人，2008年). CHMP2B的毒性阻止了Western blot分析，因为CHMP2B简介5-不能产生含有HEK-FT细胞慢病毒颗粒的病毒。总之，这些药理学分析增加了自噬体积累导致其成熟受阻导致与FTD3相关的突变CHMP2B导致神经元细胞丢失的可能性。

抑制自噬基因功能延缓ESCRT-III功能异常诱导的神经元细胞丢失

由于3-MA和沃特曼抑制了一些与自噬途径无关的PI3激酶，我们想确认对神经元细胞死亡的药物治疗确实反映了对自噬诱导的抑制。我们抑制了自噬特异性基因的表达，并评估了对功能失调的ESCRT-III诱导的神经元细胞丢失的影响。我们首先测试了Atg7，这是一种在自噬体形成的初始阶段激活Atg12和Atg8（LC3）所需的E1样酶(水岛等人，1998年). 特异于不同区域的几种siRNA构建体之一第7天信使核糖核酸(图2A类)将内源性LC3-II水平和LC-II/LC-I比率从0.9降低mSnf7-2型siRNA-转染神经元至0.4英寸mSnf7-2型siRNA和第7天siRNA转染的神经元(图2B类)与自噬体形成减少一致。相应地，敲除Atg7显著提高表达CHMP2B的成熟大鼠皮层神经元的存活率简介5(图2C–F类). 例如，转染后第3天，57%的CHMP2B简介5-表达Atg7活性降低的神经元存活，但表达功能性Atg7的神经元存活率仅为27%(第页< 0.001). 在转染后第3天，敲除Atg7还延迟了皮质神经元的神经元细胞丢失，mSnf7-2活性降低（56 vs 33%）(第页< 0.001) (图2G公司). 同样，击倒Atg5（补充图S3A类，网址为网址：www.jneurosci.org作为补充材料），这是在自噬体形成期间延长隔离膜所必需的(水岛等人，2001年)，也因mSnf7-2活性降低而延迟神经细胞丢失（补充图S3B–D类，网址为网址：www.jneurosci.org作为补充材料）或CHMP2B简介5表达式（补充图S3E–G公司，网址为网址：www.jneurosci.org作为补充材料）。因此，当ESCRT-III功能失调时，自噬体的过度积累会导致最终的神经元细胞丢失。

保存图片、插图等的外部文件。对象名称为zns999096708002.jpg

Atg7的siRNA敲除抑制了功能失调ESCRT-III诱导的神经元细胞丢失。A类，生成第7天-特定的siRNA结构。附件7选择siRNA构建体#2用于实验。B类，mSnf7-2活性降低导致的自噬体积累被第7天siRNA，如内源性LC3-II水平和LC3-II/LC3-I比率的变化所示。C类，用干扰siRNA转染培养的大鼠皮层神经元3d后的图像。D类，转染后第3天成熟皮层神经元的图像mSnf7-2型siRNA显示大量神经元细胞丢失。E类，siRNA对Atg7的敲除增加了皮层神经元的存活，降低了mSnf7-2的活性。F类，通过或不通过转染mSnf7-2活性降低的成熟皮层神经元存活率的量化第7天小干扰RNA。G公司，表达FTD3相关突变蛋白CHMP2B的成熟皮层神经元存活的量化简介5无论是否转染第7天小干扰RNA。值为转染后第1、2和3天神经元的三个或四个独立实验的平均值±SEM**第页< 0.01, ***第页<0.001，由纽曼-凯尔斯多重检验的方差分析确定。比例尺：（inE类)C–E类，50微米。

附件5-缺陷神经元对功能失调的ESCRT-III的神经毒性更具抵抗力

接下来，我们检查了CHMP2B的神经毒性简介5在分离自第5天淘汰赛(第5天−/−)老鼠(Kuma等人，2004年). 尽管这些老鼠在新生儿饥饿期死亡(Kuma等人，2004年),第5天−/−有丝分裂后的神经元存活数周后，异常蛋白质最终在这些细胞中积累(Hara等人，2006年). 我们从E18中分离出皮层神经元第5天敲除小鼠胚胎并通过Western blot证实Atg5缺失（数据未显示）。这些培养的神经元在没有Atg5的情况下存活数周，只要它们被保存在神经元培养基（神经基底细胞培养基中的B27）中（数据未显示）。尽管LC3-GFP阳性自噬体在饥饿的野生型皮层神经元中积累，但在饥饿的皮层神经元中没有观察到第5天−/−培养15–18天的皮层神经元（补充图S4，网址：网址：www.jneurosci.org作为补充材料），证实Atg5在分离自第5天敲除小鼠胚胎。

为了进一步证明通过抑制自噬诱导减少自噬应激有助于神经元细胞存活，即使存在泛素化蛋白聚集，我们进行了以下实验。没有第5天当mSnf7-2被敲除时，敲除的神经元显示任何LC3–GFP阳性的自噬体(图3B类)或CHMP2B简介5表达了(图3D类). 相应地，Atg5缺乏可消除mSnf7-2缺失或CHMP2B异位表达引起的内源性LC3-II表达增加简介5(图3E类). 电子显微镜显示E7.5神经元中存在大量自噬体mSnf7-2型敲除胚胎，表明ESCRT缺失体内也会导致自噬途径的缺陷(图3F类). 正如预期的那样，自噬体在小鼠皮层神经元中积聚，表达mSnf7-2型小干扰RNA(图3G公司)在E18培养的皮层神经元中完全缺失第5天−/−胚胎和慢病毒感染mSnf7-2型小干扰RNA(图3H（H）).

保存图片、插图等的外部文件。对象名称为zns999096708003.jpg

附件5−/−皮层神经元对ESCRT-III功能障碍引起的神经元细胞丢失更具抵抗力。A类，mSnf7-2活性降低导致GFP–LC3阳性自噬体在野生型皮层神经元中积聚。B类，mSnf7-2活性降低不会导致GFP–LC3阳性自噬体在第5天−/−皮层神经元。C类，CHMP2B的表达简介5导致野生型神经元中GFP–LC3阳性自噬体的积聚。D类，CHMP2B的表达简介5没有引起GFP–LC3阳性自噬体在第5天−/−神经元。比例尺：（inD类)A–D，10微米。E类,mSnf7-2型siRNA在分离自第5天−/−小鼠胚胎，如蛋白质印迹上LC3-II的缺失所指示的。请注意，LC3-II的相对水平远低于大鼠神经元。F类，电子显微镜显示许多自噬体mSnf7-2型敲除小鼠胚胎（E6–E6.5）。G公司自噬体在mSnf7-2缺陷的皮层神经元中积聚明显。H（H）,mSnf7-2型siRNA没有诱导自噬体在第5天电子显微镜显示敲除神经元。红色箭头表示自噬体。比例尺：（inH（H）)F–H（飞行高度），1微米。我，mSnf7-2活性降低对野生型和第5天−/−皮层神经元。J型，FTD3相关突变蛋白CHMP2B的作用简介5野生型和野生型的生存第5天−/−皮层神经元。值为转染后第1、2和3天神经元的三个或四个独立实验的平均值±SEM**第页< 0.01, ***第页<0.001，由纽曼-凯尔斯多重检验的方差分析确定。KO，击倒。

因此，三种证据（GFP–LC3、Western blot和EM分析）证实，通过丢失第5天该活性可防止由功能失调的ESCRT-III引起的自噬体积聚。与3-MA治疗和siRNA敲除第7天，通过丧失第5天有丝分裂后神经元的活动延迟，尽管没有完全阻断mSnf7-2的丢失导致的神经元细胞丢失(图3我). 之后第4天mSnf7-2型敲除后，30%的Atg5缺陷神经元存活，但只有6%的对照神经元存活(第页< 0.001). 表达CHMP2B的皮层神经元的存活率简介5也因完全失去第5天活性（转染后第3天为54 vs 35%，第4天为29 vs 9%；两者均为第页<0.001）(图3J型). 这些结果表明，通过抑制自噬小体在诱导期的积累来减少自噬应激，可以延迟由功能失调的ESCRT-III诱导的神经元细胞丢失，这表明自噬在某些神经退行性疾病中具有有害作用。

解偶联皮层神经元中自噬体和泛素化蛋白的积累

泛素化蛋白的积累是许多年龄依赖性神经退行性疾病的标志。为了确定自噬操作是否影响与FTD3相关的泛素化蛋白的状态，我们检查了由功能失调的ESCRT-III引起的内胚体缺陷与自噬体积累之间的时间关系。FK2抗体Western blot显示，mSnf7-2活性的siRNA敲除导致转染后3d泛素化蛋白的积累(图4A类). 这种堆积发生在mSnf7-2型击倒或CHMP2B简介5在LC3阳性自噬体形成之前的表达(Lee等人，2007年). 成熟皮层神经元CHMP2B简介5诱导与Rab7阳性内体共定位的泛素化蛋白的积累(图4B–D类). 自噬抑制剂3-MA(图4E–G公司)或Atg5活性丧失(图4H–J型)未显著影响含有泛素化蛋白聚集体的神经元数量。相反，3-MA治疗或Atg5缺失抑制CHMP2B中GFP–LC3阳性自噬体的形成简介5-表达皮层神经元(图4K（K）,N个,问)转染后3d不影响FK2-阳性泛素化蛋白聚集体的形成(图4M（M）,P（P）,秒). 当mSnf7-2活性被siRNA（另一种破坏ESCRT-III正常功能的方式）降低时，也获得了类似的结果（数据未显示）。因此，自噬体积累和其他机制（如泛素化蛋白聚集体的积累）导致的神经元细胞丢失可以解偶联。

保存图片、插图等的外部文件。对象名称为zns9990967080004.jpg

皮层神经元中自噬体积累和泛素化蛋白积累的解耦。A类感染慢病毒构建物编码控制或扰乱或干扰后3d成熟皮层神经元泛素化蛋白的Western blot分析mSnf7-2型小干扰RNA。B–J类、CHMP2B简介5导致FK2-阳性泛素化蛋白在Rab7-阳性内体中积聚(B–D类)不受3-MA处理的定性影响(E–G公司)或Atg5活性丧失(H–J型). 神经元H（H）似乎有更多的聚集物，可能是因为它的尺寸更大。K–S公司，3-MA处理或Atg5活性的丧失抑制了GFP–LC3阳性自噬体的形成(N个,问)而不是FK2-阳性泛素化蛋白的积累(O（运行）,R（右）)表达CHMP2B的皮层神经元简介5第3天。在B类,E类、和H（H），使用菁2结合二级抗体。在L（左）,O（运行）、和R（右）采用菁3结合二抗。3-MA抑制80%CHMP2B中GFP–LC3阳性自噬体的出现简介5-表达神经元(N个)，而没有第5天敲除的神经元有自噬体。在K（K）,N个、和问共聚焦显微镜直接采集GFP信号。比例尺：（in秒)B–S型，10微米。CTL，控制；KO，淘汰赛。

讨论

在这项研究中，来自药理学、细胞和遗传学分析的多条证据表明，当ESCRT-III功能失调时，过度的自噬体积累会导致神经元细胞丢失，此外还有其他潜在机制，如泛素化蛋白聚集体的积累。尽管功能失调的ESCRT-III导致自噬体成熟受阻，但同时抑制自噬诱导减少了自噬小体的有害积累。在整个研究过程中，我们使用了两种互补的方法来破坏ESCRT-III的正常功能。一种是基于siRNA的功能丧失方法来敲低内源性mSnf7-2的表达，mSnf7-2是ESCRT-IIII的关键成分，对动物发育和神经元存活至关重要(Lee等人，2007年). mSnf7-2的缺失阻碍了ESCRT-III在内胚层膜上的正确组装。我们还使用了获得功能的方法。我们表达了FTD3相关疾病蛋白CHMP2B简介5，与mSnf7-2形成复合物，比CHMP2B更贪婪重量(Lee等人，2007年)从而破坏ESCRT-III从内涵体膜的正常分解。这两种方法都表明，抑制自噬抑制对神经元存活的影响不仅仅归因于突变蛋白的过度表达。

近年来，一些疾病基因与FTD相关(Hong等人，1998年;Hutton等人，1998年;Watts等人，2004年;Skibinski等人，2005年;贝克等人，2006年;Cruts等人，2006年;Neumann等人，2006年). 然而，不同形式FTD的分子发病机制的详细机制基本上尚未探索。我们的发现对我们理解疾病过程有几个重要意义。首先，与自噬在神经退行性疾病中发挥有益作用的研究相反(拉维库马尔等人，2004年)，我们的结果表明，在某些情况下（例如，在与内胚体-溶酶体缺陷相关的神经变性中），自噬体的过度积累对神经元的存活有害。在FTD3的情况下，突变的CHMP2B蛋白似乎阻止了自噬体成熟为自溶体(Filimonenko等人，2007年;Lee和Gao，2008年). 在这些条件下，减少自噬诱导似乎比缺陷自噬更有益。ESCRT成分如何参与自噬途径尚待确切确定(莱博格和斯坦马克，2009年;Yue等人，2009年). 第二，尽管神经元存活需要基础自噬(Hara等人，2006年;小松等人，2006年)过度生产或清除减少都可能导致自噬过程的失调，导致神经退化。最后，正常ESCRT-III功能的完全丧失会导致内胚体缺陷和泛素化蛋白的积累，这可能导致独立于自噬状态的神经退行性变。尽管如此，3-MA等小分子部分抑制自噬诱导，可能是某些形式FTD早期和其他可能的神经退行性疾病的潜在治疗剂。

脚注

这项工作得到了加利福尼亚再生医学研究所（J.L.）、美国国立卫生研究院（NIH）（F.-B.G.）和NIH拨款CO6 RR018928（给J.David Gladstone研究所）的支持。我们感谢水岛核电站第5天基因敲除小鼠，L.Liu协助小鼠基因分型和皮层培养，J.Wong协助电子显微镜，S.Ordway和G.Howard协助编辑。

工具书类

  • Baker M、Mackenzie IR、Pickering-Brown SM、Gass J、Rademakers R、Lindholm C、Snowden J、Adamson J、Sadovnick AD、Rollinson S、Cannon A、Dwosh E、Neary D、Melquist S、Richardson A、Dickson D、Berger Z、Eriksen J、Robinson T、Zehr C等。前果胶突变导致与17号染色体相关的τ阴性额颞痴呆。自然。2006;442:916–919.[公共医学][谷歌学者]
  • Blommaart EF、Krause U、Schellens JP、Vreeling-SindelárováH、Meijer AJ。磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂沃特曼和LY294002可抑制离体大鼠肝细胞的自噬。欧洲生物化学杂志。1997;243:240–246.[公共医学][谷歌学者]
  • Boland B、Kumar A、Lee S、Platt FM、Wegiel J、Yu WH、Nixon RA。神经元自噬诱导和自噬体清除：与阿尔茨海默病自噬病理学的关系。神经科学杂志。2008;28:6926–6937. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Cruts M、Gijselinck I、van der Zee J、Engelborghs S、Wils H、Pirici D、Rademakers R、Vandenberghe R、Dermaut B、Martin JJ、van Duijn C、Peeters K、Sciot R、Santens P、De Pooter T、Mattheijssens M、van den Broeck M、Cuijt I、Vennekens K、De Deyn PP等。progranulin的零突变导致与染色体17q21相关的泛蛋白阳性额颞叶痴呆。自然。2006;442:920–924.[公共医学][谷歌学者]
  • Cuervo AM、Stefanis L、Fredenburg R、Lansbury PT、Sulzer D。伴侣介导的自噬对突变α-同核蛋白降解的影响。科学。2004年；305:1292–1295.[公共医学][谷歌学者]
  • Filimonenko M、Stuffers S、Raiborg C、Yamamoto A、Maleröd L、Fisher EM、Isaacs A、Brech A、Stenmark H、Simonsen A。自噬清除与神经退行性疾病相关的蛋白质聚集体需要功能性多泡体。细胞生物学杂志。2007;179：485–500。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Hara T、Nakamura K、Matsui M、Yamamoto A、Nakahara Y、Suzuki-Migishima R、Yokoyama M、Mishima K、Saito I、Okano H、Mizushima N。抑制神经细胞中的基础自噬会导致小鼠的神经退行性疾病。自然。2006;441:885–889.[公共医学][谷歌学者]
  • Hong M、Zhukareva V、Vogelsberg-Ragaglia V、Wszolek Z、Reed L、Miller BI、Geschwind DH、Bird TD、McKeel D、Goate A、Morris JC、Wilhelmsen KC、Schellenberg GD、Trojanowski JQ、Lee VM。遗传性FTDP-17不同tau亚型的突变特异性功能损伤。科学。1998年；282:1914–1917.[公共医学][谷歌学者]
  • 赫尔利·JH。ESCRT复合物与多泡体的生物发生。当前Opin细胞生物学。2008;20：4–11。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Hutton M、Lendon CL、Rizzu P、Baker M、Froelich S、Houlden H、Pickering-Brown S、Chakraverty S、Isaacs A、Grover A、Hackett J、Adamson J、Lincoln S、Dickson D、Davies P、Petersen RC、Stevens M、de Graaff E、Wauters E、van Baren J等。τ族错义和5′-拼接突变与遗传性痴呆FTDP-17的关联。自然。1998年；393:702–705.[公共医学][谷歌学者]
  • Klonsky DJ、Abeliovich H、Agostinis P、Agrawal DK、Aliev G、Askew DS、Baba M、Baehrecke EH、Bahr BA、Ballabio A、Bamber BA、Basham DC、Bergamini E、Bi X、Biard-Piechaczyk M、Blum JS、Bredeson DE、Brodsky JL、Brumell JH、Brunk UT等。高等真核生物自噬检测方法的使用和解释指南。自噬。2008;4：151–175。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 小松M、瓦古里S、千叶T、村田S、岩田J、田田I、上野T、小池M、内山Y、小米E、田中K。中枢神经系统中自噬的丧失会导致小鼠的神经退化。自然。2006;441:880–884.[公共医学][谷歌学者]
  • Kuma A、Hatano M、Matsui M、Yamamoto A、Nakaya H、Yoshimori T、Ohsumi Y、Tokuhisa T、Mizushima N。新生儿早期饥饿期间自噬的作用。自然。2004年；432：1032–1036。[公共医学][谷歌学者]
  • Lee JA、Gao FB。ESCRT在自噬相关神经变性中的作用。自噬。2008;4:230–232.[公共医学][谷歌学者]
  • Lee JA、Beigneux A、Ahmad ST、Young SG、Gao FB。ESCRT-III功能障碍导致自噬体积聚和神经变性。当前生物量。2007;17:1561–1567.[公共医学][谷歌学者]
  • Mizushima N、Noda T、Yoshimori T、Tanaka Y、Ishii T、George MD、Klinsky DJ、Ohsumi M、Ohsami Y.自噬所必需的蛋白质结合系统。自然。1998年；395:395–398.[公共医学][谷歌学者]
  • Mizushima N、Yamamoto A、Hatano M、Kobayashi Y、Kabeya Y、Suzuki K、Tokuhisa T、Ohsumi Y、Yoshimori T。使用Apg5缺陷小鼠胚胎干细胞解剖自噬体形成。细胞生物学杂志。2001;152:657–668. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 水岛N、莱文B、克尔沃AM、克林斯基DJ。自噬通过细胞自我控制与疾病作斗争。自然。2008;451:1069–1075. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Neumann M、Sampathu DM、Kwong LK、Truax AC、Micsenyi MC、Chou TT、Bruce J、Schuck T、Grossman M、Clark CM、McCluskey LF、Miller BL、Masliah E、Mackenzie IR、Feldman H、Feiden W、Kretzschmar HA、Trojanowski JQ、Lee VM。额颞叶变性和肌萎缩侧索硬化症中的泛素化TDP-43。科学。2006;314:130–133.[公共医学][谷歌学者]
  • Raiborg C，Stenmark H。泛素化膜蛋白的内体分选中的ESCRT机制。自然。2009;458:445–452.[公共医学][谷歌学者]
  • Ravikumar B、Vacher C、Berger Z、Davies JE、Luo S、Oroz LG、Scaravilli F、Easton DF、Duden R、O'Kane CJ、Rubinsztein DC。在亨廷顿病的苍蝇和小鼠模型中，抑制mTOR可诱导自噬并降低聚谷氨酰胺扩增的毒性。自然遗传学。2004年；36:585–595.[公共医学][谷歌学者]
  • Seglen PO，Gordon PB。3-甲基腺嘌呤：分离大鼠肝细胞自噬/溶酶体蛋白降解的特异性抑制剂。美国国家科学院院刊。1982;79:1889–1892. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Skibinski G、Parkinson NJ、Brown JM、Chakrabarti L、Lloyd SL、Hummerich H、Nielsen JE、Hodges JR、Spiollantini MG、Thusgaard T、Brandner S、Brun A、Rossor MN、Gade A、Johansen P、Sörensen SA、Gydeson S、Fisher EM、Collinge J.额颞叶痴呆患者内体ESCRTIII复合物亚基CHMP2B的突变。自然遗传学。2005;37:806–808.[公共医学][谷歌学者]
  • Vossel KA，Miller BL.额颞叶退行性变治疗的新方法。神经醇电流。2008;21:708–716. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Watts GD、Wymer J、Kovach MJ、Mehta SG、Mumm S、Darvish D、Pestrong A、Whyte MP、Kimonis VE。与骨和额颞叶痴呆Paget病相关的包涵体肌病是由突变的缬氨酸蛋白引起的。自然遗传学。2004年；36:377–381.[公共医学][谷歌学者]
  • Yue Z，Friedman L，Komatsu M，Tanaka K。神经元自噬的细胞途径及其在神经退行性疾病中的意义。Biochim生物物理学报。2009年doi:10.1016/j.bbamcr.2009.01.016。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
文章来自神经科学杂志由以下人员提供神经科学学会