PINK1-过表达和敲除细胞系的特性。
A类，来自稳定pRec载体控制SH-SY5Y细胞系的细胞裂解物(C)PINK1敲除稳定细胞系(答14)、和PINK1-过表达克隆细胞系(#24)解决率为5-15%氨二醇缓冲凝胶，并在存在(中间面板)或缺席(左侧面板)阻塞的PINK1肽（100μg/ml，1小时）。为FLAG标签重新标记污点(右侧面板)β-actin作为负荷控制。插入1显示更长的胶片曝光时间，以更好地显示全长内源性PINK1相对于过度表达的PINK1-3xFlag。免疫反应性带包括全长重组PINK1-3xFlag（带一′,～69 kDa），内源性全长（带一，～66 kDa）和a主要处理波段b条，～50 kDa）。一个或两个以下还观察到分子量处理形式（<39 kDa）。A已处理有时观察到PINK1-3x标记的形式（～60 kDa，补充图。第8节）；插图2显示了单元格中此处理带的加重用蛋白酶体抑制剂clasto-lactacystinβ-内酯（band）治疗一″). 较小的PINK1处理带可能会进一步反映处理，可能在C端子端，因为没有更小的FLAG频带观察。B线粒体的蛋白质印迹(米托)和细胞质的(细胞)来源于亲代SH-SY5Y细胞的组分(W公司)，一条稳定的矢量线(Ctrl键)，和PINK1-3xFlag克隆#24在10%三甘氨酸凝胶上溶解并免疫印迹FLAG，内源性PINK1、线粒体P60和乳酸脱氢酶(乳酸脱氢酶). 类似获得了克隆9的结果（数据未显示）。星号,表示非特定带。全长重组PINK1-3xFlag（带一′），内源性全长（带一)、和已处理（波段b条)观察到PINK1。C，的外荧光图像SH-SY5Y细胞双重标记内源性PINK1(绿色)和60-kDa人线粒体抗原(红色)并对带有DAPI公司(蓝色).D类克隆SH-SY5Y株系中PINK1 mRNA水平表达针对N末端（A系列克隆）或中间的shRNAPINK1的（D系列克隆）区域。数据归一化为β-肌动蛋白mRNA作为相对量化值±最大值和最小值。对照克隆使用pRS控制矢量（V系列克隆）作为参考生成值。*,第页< 0.001对V17。E类,PINK1免疫印迹显示稳定PINK1shRNA内源性PINK1s减少细胞系与带有β-actin的载体控制细胞系的比较用作加载控制。50-kDa处理带(b条)和两个较小的处理带(c（c）和d日)在这个斑点中观察到（参见补充图S7了解ECL膜的非裁剪版本）。密度测定法数据（由每条线的三个独立实验汇编而成）如下所示低于(*,第页< 0.01对控制单元线路）。
