ULK1和ATG13受到mTOR介导的磷酸化作用。
A类，ULK1在自噬后保持部分磷酸化归纳。MEF细胞在无氨基酸培养基中培养(饿死)1h后进行裂解。然后用磷酸酶，或模拟处理，然后进行免疫印迹以分析迁移率ULK1。B类，ATG13在自噬诱导后脱磷酸。来自稳定表达GFP-ATG13的MEF细胞的裂解液也经过处理或用磷酸酶模拟处理，然后进行SDS-PAGE和免疫印迹抗GFP。C类、ULK1和ATG13在自噬时脱磷酸归纳。表达GFP-ATG13的MEF细胞在完全培养基中培养(控制)，含500 n的介质米雷帕霉素(雷帕霉素)或无氨基酸介质(饿死)，后面是抗ULK1的裂解和免疫印迹(顶部面板)或抗GFP(底部面板). 样品一式两份。天，百万TOR过度表达增加ATG13磷酸化。转染293T细胞单独或与Myc-tagged野生型结合使用类型(重量)或kinase-dead(死去的)mTOR，如图所示。24小时转染后细胞在完全培养基中孵育，该培养基含有500牛顿米雷帕霉素或无氨基酸培养基(饿死)的1.5 h。然后裂解细胞，加载两份，并进行SDS-PAGE和抗Myc免疫印迹。
