神经生物老化。作者手稿；PMC 2009年11月1日提供。
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NIHMSID公司：美国国立卫生研究院71542
脑室内脂多糖对老年小鼠疾病行为和脑促炎细胞因子表达的影响
,1 ,1 ,2 ,2和1,三
Y.Huang（黄）
1俄亥俄州立大学分子病毒学、免疫学和医学遗传学系及行为医学研究所，333 W.10第个俄亥俄州哥伦布大街43210号。
C.J.亨利
1俄亥俄州立大学分子病毒学、免疫学和医学遗传学系及行为医学研究所，333 W.10第个俄亥俄州哥伦布大街43210号。
R.丹泽
2伊利诺伊大学动物科学系，1207 W.Gregory博士，伊利诺伊州厄巴纳，61801
R.W.约翰逊
2伊利诺伊大学动物科学系，1207 W.Gregory Dr.，Urbana，IL，61801
J.P.戈德布特
1俄亥俄州立大学分子病毒学、免疫学和医学遗传学系及行为医学研究所，333 W.10第个俄亥俄州哥伦布大街43210号。
1俄亥俄州立大学分子病毒学、免疫学和医学遗传学系及行为医学研究所，333 W.10第个俄亥俄州哥伦布大街43210号。
2伊利诺伊大学动物科学系，1207 W.Gregory Dr.，Urbana，IL，61801
三通信地址：J.P.Godbout，2166B Graves Hall，333 W.10th 18 Ave，The Ohio State University，Columbus，OH 43210。电话：（614）292-7000传真：（61四）333-19 8286，电子邮箱：ude.uso@2.tuobdog 摘要
年龄相关的胶质细胞反应性变化可能会使个体易患神经炎性细胞因子反应加剧，从而导致认知和行为并发症。本研究的目的是确定衰老是否与对中枢天然免疫激活的过度疾病反应有关。我们的研究结果表明侧脑室内（i.c.v）与成年小鼠相比，注射脂多糖（LPS）后2 h，老年小鼠小脑中的促炎细胞因子反应（IL-1β、IL-6和TNFα）增强。这种炎症反应的放大与反应性胶质标记物（MHC II类、TLR2和TLR4）的脑区依赖性增加相一致。此外，脂多糖在老年小鼠中引起了长时间的疾病行为反应，这与小脑和海马中大脑细胞因子的长时间表达平行。最后，中央LPS注射导致老龄小鼠周围IL-6水平增加并延长。总的来说，这些数据证明，与成年小鼠相比，激活中枢固有免疫系统会导致老年小鼠的神经炎症加剧和疾病行为延长。
关键词：大脑，脂多糖，年龄，胶质细胞，细胞因子，小鼠，行为，脑室内
1.简介
脑mRNA的微阵列分析表明，衰老与指示氧化应激、补体激活和胶质细胞反应性的基因表达谱有关[5,25,35]. 这些报告支持这样一个假设，即包括星形胶质细胞和小胶质细胞在内的脑胶质细胞在正常衰老过程中变得更加活跃或反应更积极[22]. 例如，大组织相容性复合体（MHC）II类小胶质细胞的表达（小胶质细胞激活的标志）在老年人、非人类灵长类动物和啮齿动物的大脑中增加[20,25,41,51,52,56,64–66]. 清除剂受体的表达增加也表明了神经胶质表型的年龄相关变化[25,71]，补体受体[56]和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）[25,35,41]. 值得注意的是，大脑中常驻星形胶质细胞和小胶质细胞的实际数量并没有随着年龄的增长而增加[37,43]. 因此，现有星形胶质细胞和小胶质细胞群体中的胶质细胞反应性似乎增加。
了解正常衰老过程中脑胶质细胞的变化非常重要，因为小胶质细胞和星形胶质细胞是大脑固有免疫系统的一部分，在接收和传播炎症信号以响应外周免疫系统的激活方面发挥着重要作用。大脑和免疫系统之间的双向交互作用是对免疫刺激产生适当的免疫、生理和行为反应所必需的[32]. 这种反应部分由包括IL-1β、IL-6和TNFα在内的促炎细胞因子介导。这些细胞因子由胶质细胞在大脑内产生，作用于神经元基质，引发一种疾病行为综合征，这种综合征通常具有适应性，对宿主有益[32,33]. 然而，细胞因子反应失调会导致神经系统并发症[6,9,16]包括认知障碍[2,29,46,68]、厌食症[17]、情绪和抑郁障碍[10,47,58].
外周免疫系统的激活通过增加活化的小胶质细胞产生的细胞因子加剧了神经退行性疾病，如阿尔茨海默病、多发性硬化症和朊病毒病[12,57]. 因此，老年大脑中胶质细胞反应性增加的潜在后果可能是对外周或中枢免疫挑战过敏。例如，在衰老小鼠模型中，用LPS对先天免疫系统的外周刺激会导致老年小鼠大脑中过度的炎症细胞因子反应[25]. 老年小鼠的神经炎症反应增强与疾病行为症状的延迟恢复有关[25]. 此外，老年啮齿类动物大脑中神经炎症的加剧会导致持续时间更长的认知损伤[三]. 这种超敏反应被解释为源于胶质细胞，因为与成人大脑培养物相比，从老年啮齿动物大脑中建立的原代混合胶质细胞培养物和冠状脑切片对LPS刺激具有高反应性，并产生更多炎性细胞因子（IL-1β和IL-6）[72,73]. 老年啮齿动物对静脉注射高水平LPS引起的内毒素休克也更敏感[31]或TNFα/IFNγ̣[14]. 然而，尚不清楚中枢天然免疫系统的短暂刺激是否会导致老年小鼠出现长期的神经炎症和行为缺陷。
我们的实验是为了验证这样一个假设，即老年人对免疫激活和长期疾病行为的大脑超敏反应是由大脑中细胞因子反应的放大引起的。为了消除外周免疫系统的任何潜在混淆，本组实验是通过用脂多糖对小鼠腹腔注射进行的。在这里，我们表明，中枢LPS激发导致老年小鼠的疾病行为反应延长，而小脑和海马中的脑促炎细胞因子表达延长。此外，与成年小鼠相比，中心注射LPS后老年小鼠的血浆IL-6增加的幅度和持续时间更大。此外，我们发现包括MHC II类、TLR2和TLR4在内的胶质细胞反应性潜在标记物在老龄小鼠大脑中的表达增加。这些标记物在老年小鼠小脑中的高表达与对i.c.v LPS的更大初始细胞因子反应有关。这些发现支持了我们的假设，即老年人大脑细胞因子系统的敏感性会促进对外周或中枢先天免疫刺激的过度反应，并可能是该人群行为和认知并发症发病率增加的基础。
2.方法
2.1动物
采用美国国家衰老研究所的雄性BALB/c小鼠，无特定病原体集落。BALB/c小鼠的平均寿命约为26个月[42]因此，为了研究从青年到老年的变化，我们使用了青年男性（3-4个月大）和老年男性（20-22个月小）。小鼠被安置在聚丙烯笼中，并在21°C下保持12小时光照：12小时暗循环随意获得水和啮齿动物食物。社会探索行为范式中使用的男性青少年近亲（4-5周龄）在相同条件下保持不变。在每项研究结束时，对小鼠进行尸检，以确定其是否有明显的疾病迹象（例如脾胶质瘤或肿瘤）。分析中排除了被判定为不健康的小鼠的数据（<5%）。所有程序均符合NIH《实验动物护理和使用指南》，并经俄亥俄州立大学实验动物护理与使用委员会批准。
2.2侧脑室插管
静脉插管的操作如前所述，但有一些改进[24]. 简而言之，使用氯胺酮和木聚嗪（分别为100毫克和10毫克/千克体重）对小鼠进行深度麻醉，并对手术部位进行剃毛和消毒。小鼠被放置在一个立体定向仪器中，使额骨和顶骨形成的平面与桌面平行。在头盖骨上做一个1.5厘米长的切口，以显露前角，并使用以下立体定位坐标在侧脑室放置一个26瓦不锈钢导管：纬度1.6毫米；A–P距离角1 mm；Hor-距硬脑膜2 mm。在套管附近插入两个固定颅骨螺钉，套管用颅骨水泥固定。在导向套管中插入一个假套管，以防止阻塞和感染。小鼠在手术后皮下注射Buprinex（111微克/千克体重），12小时后再次注射。在给予任何治疗之前，给小鼠提供至少7天的恢复时间。通过注射台盼蓝染料并检查染料在整个心室的扩散情况，确认了插管的准确放置。
2.3性能测试
运动活性
小鼠被关在其家庭笼子里，笼子的占地面积为26×20 cm，在3分钟的试验期间，对其运动活动进行视频记录。在视频记录中，笼子被分成6个相同的长方形，一名对实验治疗视而不见的训练有素的观察者确定了交叉线的发生率。
社会探索行为
为了评估参与社会探索行为的动机，在受试者的家庭笼子中引入了一种新的同系物，为期10分钟。行为被录像，受试者参与社会调查的累计时间由一名对实验治疗一无所知的训练有素的观察者根据视频记录确定。在时间0时测量所有实验治疗的基线社交行为。社交行为被确定为实验对象花在调查（例如，肛门生殖器嗅探、跟踪）青少年上的时间[7]. 结果表示为与相应基线测量值相比，参与社会行为的时间减少百分比。
2.4定量实时PCR
使用三试剂方案（西格玛，密苏里州圣路易斯）从大脑中分离出总RNA。RNA样品经过DNase I消化程序，然后使用RT RETROscript试剂盒（德克萨斯州奥斯汀Ambion）反向转录到cDNA。如前所述，使用Applied Biosystems（Foster，CA）Assay on Demand基因表达方案进行定量实时PCR[25]. 简言之，cDNA通过实时PCR扩增，其中目标cDNA（IL-1β、IL-6、TNFα或MHC II类）和参考cDNA（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）使用带有5′荧光报告染料（6-FAM）和3′猝灭染料（NFQ）的寡核苷酸探针同时扩增。在ABI PRISM 7300序列检测系统（加州应用生物系统公司）上测定荧光。使用比较阈值循环（Ct）方法对数据进行分析，结果表示为倍差[36].
2.5血浆细胞因子测定
如前所述，在血浆中测量IL-6[23]. 简而言之，小鼠被一氧化碳窒息2通过心脏穿刺将吸入物和血液收集到EDTA涂层注射器中。样品离心（6000×g，在4°C下15分钟），收集血浆并冷冻保存（−80°C），直到分析。使用我们详细描述的定制ELISA对血浆样本进行IL-6检测[23]. 检测对8 pg/ml的IL-6敏感，组间和组内变异系数小于10%。
2.6实验方案
在所有研究中，成年和老年小鼠均使用留置的静脉插管进行准备。恢复后，给小鼠静脉注射无菌生理盐水或大肠杆菌LPS（10 ng，5 ng/ul；血清型0127:B8，Sigma，St.Louis，MO）。静脉注射用LPS的剂量用于引发轻度短暂的疾病反应[30]. 对于侧脑室的静脉注射，将留置套管与无菌导管连接至Hamilton注射器，并使用KS Scientific精密注射泵以2µl的体积进行注射。在第一组研究中，在静脉注射生理盐水或脂多糖（n=8）后0、2、4、8和24小时测量运动活动、社交行为和食物摄入。在第二组研究中，小鼠经静脉注射生理盐水或脂多糖，然后用一氧化碳处死22或8小时后窒息。大脑被移除、解剖并保存在−20°C的RNA保存液中。从大脑样品中分离出总RNA，并使用实时PCR进行分析（n=7）。血浆也被收集和储存（−80°C），直到化验。
2.7统计分析
所有数据均使用统计分析系统（SAS）通用线性模型程序进行分析。数据进行二元（年龄×LPS）或三元（年龄x LPS×时间）方差分析，以确定显著的主效应以及主要因素之间的相互作用。在适当的情况下，通过F类-受保护的t吨-使用SAS的LSD程序进行测试。所有数据均表示为处理平均值±标准平均误差（SEM）。
3.结果
3.1中枢LPS注射诱导老年小鼠延长疾病反应
由于外周LPS注射在老龄BALB/c小鼠中引起过度的疾病反应[25]，我们试图确定在中央（i.c.v）LPS激发（10 ng）后，老年小鼠的疾病行为是否加剧。为了确定中央注射LPS是否会导致老年小鼠出现更严重的疾病行为综合征，我们对成年和老年小鼠的运动活动、参与社会行为的动机以及食物摄入进行了评估，这些小鼠通过静脉注射生理盐水或LPS。在静脉注射前和注射2、4和8小时后再次测量行为(). 运动活动的方差分析显示LPS的显著主效应（F（1,31）=246.7P（P）<0.001）和年龄×LPS相互作用（F（3,31）=12.46，P（P）< 0.001) (). 虽然成年小鼠在静脉注射LPS后8小时的运动活性有所改善，但老年小鼠的运动活性仍然显著降低(P（P）< 0.001).
衰老延长了脂多糖诱导的运动活动、社交行为和食物摄入不足成年和老年小鼠经静脉注射生理盐水或LPS，并在注射后0、2、4和8小时测量（A）运动活动、（B）社交行为和（c）食物摄入量。条形图表示平均值±SEM（n=8）。带*的意思不同(P（P）<0.05），基线控制和平均值与成人LPS.
静脉注射LPS对社会行为的影响如所示社会行为方差分析显示年龄（F（1,31）=11.5，P（P）<0.001），LPS（F（1,31）=347，P（P）<0.001），年龄×LPS相互作用（F（3,31）=12.46，P（P）< 0.001). 虽然成年小鼠在注射LPS后4到8小时内开始恢复，但在4小时时，老年小鼠的社会行为仍显著减少(P（P）<0.04）和8小时(P（P）< 0.001). 值得注意的是，两个年龄组在静脉注射LPS后24小时内都回到了基线社会调查（数据未显示）。最后，食物摄入量的大幅减少证实了疾病行为的延迟恢复(P（P）<0.05）在接受LPS的老年小鼠中，与接受LPS成人相比(). 总的来说，这些数据表明，与成年人相比，中央LPS注射在老年小鼠中诱导了延长的疾病反应。
3.2中枢LPS注射诱导老龄小鼠小脑内炎症细胞因子反应升高
由于中央LPS注射在老年小鼠中引起过度的疾病反应，我们接下来试图确定在中央LPS激发后，老年大脑中是否存在放大和延长的促炎细胞因子反应。这些实验选择了促炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNFα，因为它们是疾病行为症状的关键中枢神经系统介质[32]. 在本实验中，小鼠经静脉注射生理盐水或LPS，并在2或8小时后采集的离散脑区测量IL-1β、IL-6和TNFα稳态mRNA水平(). 虽然预期多个离散的大脑区域（即下丘脑、杏仁核、纹状体）对免疫挑战表现出不同的反应，但选择小脑和海马是因为这些区域预计参与认知、运动、，以及与长期或过度神经炎症相关的行为缺陷[22].
中枢注射LPS后老年小鼠海马和小脑中炎性细胞因子mRNA表达延长成年和老年小鼠静脉注射生理盐水或LPS，并在2（A，B，c）或8小时后（D，E，F）采集的小脑（白条）和海马（黑条）中测量IL-1β（A，D）、IL-6（B，E）和TNFα（c，F）mRNA水平。条形代表平均值±SEM（n=7）。对于每个大脑区域，带*的平均值有显著差异(P（P）<0.05），与盐水对照组和平均值相比有显著差异成人LPS.
正如预期的那样，静脉注射LPS会在这两个时间点增加小脑和海马中IL-1β、IL-6和TNFαmRNA的表达(P（P）<0.001）。在老年小鼠的小脑中，中央LPS注射后2小时，所有三种促炎细胞因子的表达水平均明显高于成年人(). 小脑细胞因子mRNA表达的方差分析显示，IL-1β（F（3,27）=6.1，P（P）<0.05），IL-6（F（3，27）=4.2，P（P）<0.05）和TNFα（F（3，27）=18.86，P（P）< 0.01). 小脑IL-1β、IL-6和TNFαmRNA的稳态水平大约高1.6倍(P（P）< 0.001,P（P）<0.01，以及P（P）<0.001）与注射LPS的成年小鼠相比。然而，在海马区，炎症细胞因子的表达没有明显的年龄与LPS的交互作用。因此，在2小时的海马中，细胞因子mRNA水平由于LPS而增加，但这种细胞因子的增加与年龄无关。综上所述，这些结果表明，中央LPS注射导致老年小鼠的促炎细胞因子反应升高，这是大脑区域依赖性的。
结果表明，与接受生理盐水的小鼠相比，中央LPS给药8 h后，LPS给药剂小鼠的IL-1β、IL-6和TNFα增加(P（P）<0.001）。小脑细胞因子mRNA水平分析显示，IL-1β（F（3，27）=5.1，P（P）<0.04），IL-6（F（3，27）=8.3，P（P）<0.01）和TNFα（F（3,27）=4.21，P（P）< 0.05). 小脑IL-1β、IL-6和TNFαmRNA的稳态水平分别为3倍(P（P）<0.003），6倍(P（P）<0.001）和2倍(P（P）与静脉注射LPS的成年小鼠相比，老年小鼠的LPS含量更高（<0.004）。与8小时小脑的结果类似，静脉注射LPS的小鼠海马中IL-1β、IL-6和TNFαmRNA的水平高于接受盐水的小鼠(P（P）<0.001）。海马细胞因子mRNA水平的方差分析显示，IL-1β的年龄×LPS相互作用显著（F（3,27）=13.10，P（P）<0.002），IL-6（F（3，27）=7.21，P（P）<0.02）和TNFαF（3，27）=4.52，P（P）< 0.05). 海马IL-1β、IL-6和TNFαmRNA的稳态水平分别为5.4倍(P（P）<0.001），2.8倍(P（P）<0.001）和2.4倍(P（P）与服用LPS的成年鼠相比，老龄鼠体内的LPS含量更高。值得注意的是，在静脉注射后2和8小时，也对皮层mRNA进行了分析。与LPS后海马的促炎性特征相似，皮质在2小时时没有Age×LPS相互作用，但在8小时时有（数据未显示）。总之，这些数据表明，中枢炎症信号在老年小鼠大脑中的传播加剧，并表明老年人长期的神经炎症细胞因子反应和长期的疾病行为之间存在关系。
3.3中央注射LPS后老龄小鼠血浆IL-6水平升高和延长
为了确定中央LPS注射是否会导致老龄小鼠周围炎症反应升高，在静脉注射LPS后2和8小时测定血浆中促炎细胞因子水平(). 血浆IL-6细胞因子的方差分析显示，2 h时年龄×LPS的相互作用显著（F（3,31）=8.1，P（P）<0.01）和8小时时（F（3，27）=14.33，P（P）< 0.001). 静脉注射LPS后2小时和8小时，老年小鼠的血浆IL-6水平分别是成年小鼠的2倍和6.6倍(P（P）每次<0.01）。血浆中检测了所有三种促炎细胞因子（IL-1β、TNFα和IL-6），但静脉注射LPS后仅持续检测到IL-6。这与我们之前的工作一致，即大鼠静脉注射LPS可诱导循环IL-6增加[18]. 综上所述，这些发现表明，老年人大脑对LPS过度的促炎细胞因子反应与血浆中IL-6的增加平行。
老年小鼠血浆中IL-6水平因中枢LPS注射而增加并延长成年和老年小鼠经静脉注射生理盐水或LPS，并在8 h后（A）2和（B）收集血浆中测定IL-6。条形代表平均值±SEM（n=7）。带*的平均值有显著差异(P（P）<0.05）与生理盐水对照组的差异显著，而含†的平均值与成人LPS.
3.2反应性小胶质细胞标记物在老年小鼠的大脑中表达，并通过中枢LPS注射增强
为了了解为什么老年小鼠中枢LPS激发后的细胞因子表达谱存在脑区依赖性差异，在成年和老年小鼠的大脑中检测了一些胶质标记物，MHCⅡ类，Toll样受体（TLR）-2和-4。在本实验中，小鼠通过静脉注射生理盐水或LPS，并在8小时后采集的离散脑区测量MHC II类、Toll样受体（TLR）-2和-4 mRNA水平().
中枢LPS注射后老龄小鼠小脑TLR2和TLR4 mRNA表达增加成年和老年小鼠经静脉注射生理盐水或LPS，并测定MHC II类、TLR2和TLR4的mRNA水平。该表表示折叠增加平均值±SEM（n=7）。带*的平均值有显著差异(P（P）<0.05），与盐水对照组和平均值相比有显著差异成人LPS.
大脑MHC II类mRNA水平分析显示年龄（小脑，F（1,27）=9.17，P（P）<0.01和海马（F（1,27）=8.45，P（P）< 0.01). 在两个大脑区域，MHC II类mRNA的表达随着年龄增长而增加约2倍(P（P）<0.01）。MHC II类mRNA表达升高是相关的，因为MHC II级主要在转录水平上调节[19]. 此外，MHC II类表达增加与之前的报告一致，该报告显示健康老年啮齿动物大脑中的反应性小胶质细胞增加[20,25]. 尽管MHC II类中存在年龄差异，但中央注射LPS在8小时时并没有显著改变MHC II级mRNA水平。
因为TLR2是脑部炎症的标志物[50]TLR4可介导LPS诱导的小胶质细胞/巨噬细胞炎症信号转导[34,53]测定TLR2和TLR4 mRNA水平。对小脑的分析显示年龄的主要影响显著（TLR2，F（1，27）=10.98，P（P）<0.01和TLR4，F（1,27）=26.8，P（P）<0.001），LPS（TLR2，F（1,23）=40.97，P（P）<0.001且TLR4，F（1,27）=40.43，P（P）<0.001）和年龄×LPS相互作用(趋势对于TLR2，F（1,27）=3.14，P（P）=0.09，TLR4，F（3，27）=4.84，P（P）< 0.001). 与成年小鼠相比，老龄小鼠小脑中TLR2和TLR4 mRNA的水平分别增加了3倍和2倍。这些数据还表明，LPS注射诱导了老龄小鼠小脑中TLR2和TLR4稳态转录的最高总体增加。这些发现与中心LPS注射存在年龄相关的细胞因子加重反应的概念一致。
海马中TLR2和TLR4的稳态mRNA水平没有随着年龄的增长而增加。由于LPS（TLR2，F（1,27）=21.74，P（P）<0.001且TLR4，F（1,27）=18.18，P（P）<0.001），但这些增加与年龄无关。这些数据表明，大脑区域TLR4表达的差异可以解释为什么中枢LPS激发在2小时时在小脑而不是海马中引起了高度的年龄依赖性促炎细胞因子反应(). 总之，这些TLR发现表明，中心LPS攻击在老年小鼠的小脑中诱导高水平的TLR反应性。
4.讨论
我们最近报道了LPS对天然免疫系统的外周刺激在老年BALB/c小鼠中引起了过度的神经炎症反应和延长的疾病行为[25]. 本研究的目的是确定LPS对中枢神经系统的直接刺激是否也会导致老年小鼠过度的脑细胞因子和疾病反应。这些实验对于排除年龄依赖性细胞因子在外周扩增的任何潜在混淆非常重要。我们在这里观察到，与成年小鼠相比，静脉注射LPS后2小时，老年小鼠小脑中的促炎细胞因子反应增强，但海马中的促炎症细胞因子反应没有增强。这种炎症细胞因子反应的增强与TLR4的脑区依赖性增加相一致。此外，中央注射LPS诱导的炎症反应导致老年小鼠出现长期的疾病行为症状，与小脑和海马中持续的脑炎症细胞因子mRNA表达平行。最后，我们的结果表明，对中枢挑战的放大神经炎症反应被传递到外周，可能作为IL-6介导的信号。综上所述，这些数据可以解释为，老年小鼠的神经炎症加剧和疾病行为延长是大脑内细胞因子反应增强的结果。
已有证据表明，脑胶质细胞随着年龄增长而变得更加活跃，因此，外周免疫激活会导致大脑细胞因子反应过度[25]. 这些结果已被解释为表明，细胞因子信号在大脑中的放大有几个原因。首先，从老年大鼠脑中建立的原代混合胶质细胞培养物显示MHC II类表达增加，表明这些细胞更活跃[62]. 事实上，相关研究表明，与成人大脑培养物相比，来自老年大脑的胶质细胞培养物或脑片对LPS刺激具有高反应性，并产生更多炎性细胞因子7（IL-1β和IL-6）[72,73]. 其次，外周IL-1β水平并不能反映外周先天免疫攻击后过度的神经炎症细胞因子反应[2,25]. 这可能反映了老年动物和人类外围固有免疫细胞反应性降低的一般趋势[11]. 第三，注射LPS后4小时，外周血LPS可显著提高老年小鼠几个心室周围器官（CVO）和孤束脑干核的神经元活性[21]. 因为外周免疫信号可以通过CVO器官和脑干迷走神经刺激传递到CNS[26,27,39]，这些区域较高的神经元活性表明来自外围的免疫信号在老年大脑中被放大。然而，这些发现并没有消除外周固有免疫系统导致老年人神经炎症加剧的可能性。一种可能性是外周免疫挑战会破坏血脑屏障，使外周免疫细胞渗入大脑[4]. 然而，BBB的损害并不是免疫大脑细胞因子信号的先决条件[59,60]. 当前的研究结果意义重大，因为它们表明直接的中枢免疫激活会导致老年小鼠脑内细胞因子反应过度，并支持这样一个前提，即老年小鼠脑中的失调反应至少是系统诱导的细胞因子扩增和延长的部分原因免疫激活。
自衰老以来，BALB/c小鼠的神经炎症特征增加[25,61]，我们预计对中央LPS注射的最初促炎细胞因子反应会被夸大。虽然所有受检脑区的MHC II类水平均随年龄增加而增加，但这些增加并不是静脉注射LPS反应增强的可靠预测因素。静脉注射后2 h，老年小鼠小脑中LPS诱导的炎症细胞因子（IL-1β、IL-6和TNFα）mRNA水平与成年小鼠相比仅存在显著差异(). 因为TLR2和TLR4都可以在小胶质细胞中介导LPS信号[34,53]衰老小鼠小脑中细胞因子对脂多糖反应增强的特异性，可以用该区域TLR2和TLR4稳态mRNA水平的增龄性增加来解释(). 事实上，与成年人相比，LPS导致老年小鼠小脑中TLR2和TLR4的稳态转录显著增加。综上所述，这些数据可以解释为，在老年小鼠的小脑中，TLR对中枢LPS攻击具有显著的反应性。
虽然老年大脑的胶质细胞可能不一定对TLR4直接刺激的敏感性增加，但它们可能对炎性细胞因子暴露的反应增加[14,48]. LPS诱导的炎症细胞因子信号在老年小鼠小脑和海马中的传播均延长。与成年组相比，静脉注射LPS后8 h，老龄小鼠小脑和海马中IL-1β、IL-6和TNFαmRNA水平显著升高(). 同样重要的是要注意，LPS等先天性免疫激活物通常不会进入大脑，因此与年龄相关的大脑TLR表达增加对周围感染的反应几乎没有影响。然而，重要的一点是，独立于刺激（即外周或中枢）的炎性细胞因子在老年大脑中持续存在。一种解释是，与成年小鼠的神经胶质细胞相比，老年大脑中的反应性神经胶质细胞在细胞因子暴露后更大程度地被激活，并通过产生更多的这些炎症介质来做出反应。这一观点得到了一项研究的支持，在该研究中，静脉注射TNFα和IFNγ可使老年大脑中的小胶质细胞产生更大的反应性[14]. 抗炎介质或生长因子（如IL-10）的减少可能与年龄有关[38,73]或胰岛素样生长因子-1（IGF-1）[8,13]这将削弱解决大脑炎症反应的能力。无论其机制如何，很明显，在中枢免疫激活后，老年小鼠会经历较长时间的未解决的脑炎症().
这项研究的关键发现是，老年人大脑中长期接触细胞因子与长期疾病行为综合征有关。由于IL-1β、IL-6和TNFα参与诱导或维持疾病行为[32]毫不奇怪，注射LPS静脉注射8小时后，大脑细胞因子水平升高反映了老年小鼠长期LPS诱导的疾病(). 虽然成年小鼠在8小时后从脂多糖诱导的疾病中恢复的情况有显著改善，但老龄小鼠没有(). 值得注意的是，LPS后2小时，各年龄组的疾病行为相似。这可能反映出两个年龄组的累积脑细胞因子反应（即皮层和海马体）相似。长期患病并不是死亡率增加的函数，因为老年小鼠在中心LPS注射后24小时恢复到基线社会调查和细胞因子mRNA表达（数据未显示）。这是一个相关的观点，因为之前的一项研究表明，静脉注射高剂量LPS（10µg）会导致老龄小鼠的死亡率增加，这与较高的全脑和循环TNFα水平有关[31]. 过多或脓毒的LPS可能会损害血脑屏障的完整性[4]并允许外周免疫细胞渗入大脑[74]. 然而，在目前的研究中，我们使用低剂量的LPS（10 ng）诱导轻度短暂的疾病反应，该反应与死亡率或循环TNFα或IL-1β的可检测水平无关。长期的细胞因子介导的疾病反应与我们之前使用外周LPS注射的老年小鼠的研究结果一致[25]和中心HIV gp-120注射[1].
另一个有趣的发现是，静脉注射LPS后，老龄小鼠血浆中IL-6扩增（2 h）并延长（8 h）(). 这些结果表明，大脑对中枢免疫挑战的反应增强可以传递到外围。尚不清楚为什么在静脉注射LPS后，两个年龄组的血浆中均未检测到明显水平的IL-1β或TNFα（数据未显示）。中心LPS注射后血浆中缺乏可检测水平的IL-1β，这与之前的啮齿动物研究一致[59]. 我们的结果可能表明存在特定的IL-6反应，因为从大脑中间接泄漏细胞因子会导致所有三种细胞因子的水平升高。事实上，在我们之前对大鼠的研究中，我们发现静脉注射IL-1β或LPS均可诱导血浆IL-6水平升高[17,18]. IL-6升高的特异性可能表明下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴升高[45]或交感神经系统介导[18]老年大脑对中枢先天免疫挑战的反应。这一点尤其令人感兴趣，因为较高水平的循环IL-6与老年人的认知和抑郁并发症相关[55,70]. 综上所述，这些发现表明，对中枢刺激的神经炎症反应增强，可以通过IL-6介导的信号传递给外周。
了解老年大脑中长期的神经炎症反应很重要，因为它可能导致严重的认知和行为并发症[22]. 例如，外周感染和炎症条件允许老年人出现急性认知障碍、痴呆和情绪障碍[44,55,67]. 脑区特异性很重要，因为海马等区域表达IL-1β和IL-6细胞因子受体[54,63]似乎对过度或长时间接触细胞因子更敏感。例如，老年大鼠的外周大肠杆菌感染促进了海马区IL-1β的产生，并与记忆巩固受损有关[2]. 此外，与成年人相比，外周注射LPS导致老年小鼠海马的炎症反应升高，这与空间记忆受损和抑郁样行为有关（未发表的研究结果）。其他研究发现，过度暴露于炎性细胞因子会损害海马区的神经元可塑性，损害神经发生[15,40]，长期增强[28,69]和神经突起分支[49].
总之，本研究表明，老年小鼠中枢天然免疫系统的直接激活导致神经炎症加剧和疾病行为延长。此外，这些发现支持炎症细胞因子系统随着年龄增长在大脑中发生敏化的观点。这些发现很重要，因为老年人的神经炎症反应加剧也可能导致其他神经行为损伤。因此，旨在专门降低与感染相关的恶化的胶质细胞反应性的药理学策略可能对改善老年人的疾病恢复和减少神经行为缺陷非常重要。
致谢
本研究得到了美国老龄研究联合会（AFAR）向J.P.G提供的60007465资助，以及国家卫生研究院向R.D.提供的（MH071349&MH079829）和向R.W.J.提供的（AG16710&MH069148）资助。
脚注
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1Abraham J，Jang S，Godbut JP，Chen J，Kelley KW，Dantzer R，Johnson RW。衰老使小鼠对中枢HIV-1 gp120诱导的行为缺陷敏感。神经生物老化。2006 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 2Barrientos RM、Higgins EA、Biedenkapp JC、Sprunger DB、Wright-Hardsty KJ、Watkins LR、Rudy JW、Maier SF。外周感染和衰老相互作用，损害海马记忆巩固。神经生物老化。2005[公共医学][谷歌学者] 三。Barrientos RM、Higgins EA、Biedenkapp JC、Sprunger DB、Wright-Hardsty KJ、Watkins LR、Rudy JW、Maier SF。外周感染和衰老相互作用，损害海马记忆巩固。神经生物老化。2006;27(5):723–732.[公共医学][谷歌学者] 4Bechmann I、Galea I、Perry VH。血脑屏障是什么（不是）？趋势免疫。2007;28(1):5–11.[公共医学][谷歌学者] 5.Blalock EM、Chen KC、Sharrow K、Herman JP、Porter NM、Foster TC、Landfield PW。海马老化中的基因微阵列：统计分析识别与认知损伤相关的新过程。神经科学杂志。2003;23(9):3807–3819. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 6Blasko I、Stampfer Kountchev M、Robatscher P、Veerhuis R、Eikelenboom P、Grubeck Loebenstein B。慢性炎症如何影响大脑并支持老年阿尔茨海默病的发展：小胶质细胞和星形胶质细胞的作用。老化细胞。2004;三(4):169–176.[公共医学][谷歌学者] 7Bluthe RM、Dantzer R、Kelley KW。白细胞介素-1在小鼠中调节肿瘤坏死因子α的行为效应，但不调节其代谢效应。欧洲药理学杂志。1991;209(3):281–283.[公共医学][谷歌学者] 8Bluthe RM，Kelley KW，Dantzer R.胰岛素样生长因子-I对小鼠细胞因子诱导疾病行为的影响。大脑行为免疫。2006;20(1):57–63. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 9.Campbell IL、Abraham CR、Masliah E、Kemper P、Inglis JD、Oldstone MB、Mucke L.通过白细胞介素6的大脑过度表达在转基因小鼠中诱导的神经疾病。美国国家科学院院刊。1993;90(21):10061–10065. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 10Capuron L、Neurauter G、Musselman DL、Lawson DH、Nemeroff CB、Fuchs D、Miller H.干扰素α诱导的色氨酸代谢变化。与抑郁症和帕罗西汀治疗的关系。生物精神病学。2003;54(9):906–914.[公共医学][谷歌学者] 11Castle SC.与年龄相关的免疫功能障碍的临床相关性。临床传染病。2000;31(2):578–585.[公共医学][谷歌学者] 12Cunningham C、Wilcockson DC、Campion S、Lunnon K、Perry VH。慢性神经退行性变期间，中枢和全身内毒素挑战会加剧局部炎症反应并增加神经元死亡。神经科学杂志。2005;25(40):9275–9284. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 13Dantzer R，Gheusi G，Johnson RW，Kelley KW。胰岛素样生长因子-1的中央给药抑制小鼠脂多糖诱导的疾病行为。神经报告。1999;10(2):289–292.[公共医学][谷歌学者] 14Deng XH，Bertini G，Xu YZ，Yan Z，Bentivoglio M。细胞因子诱导的小鼠脑胶质细胞活化在老年时增强。神经科学。2006;141(2):645–661.[公共医学][谷歌学者] 15Ekdahl CT、Claasen JH、Bond S、Kokaia Z、Lindvall O。炎症对成人大脑的神经发生有害。美国国家科学院院刊。2003;100(23):13632–13637. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 16Fattori E、Lazzaro D、Musiani P、Modesti A、Alonzi T、Ciliberto G。转基因小鼠神经元中IL-6的表达导致反应性星形细胞增多，分支小胶质细胞增多，但没有神经元损伤。欧洲神经病学杂志。1995;7(12):2441–2449.[公共医学][谷歌学者] 17Finck BN，Johnson RW。大鼠慢性脑室内输注白介素-1β导致的厌食、体重减轻和血浆白介素-6升高。大脑研究。1997;761(2):333–337.[公共医学][谷歌学者] 18Finck BN、Dantzer R、Kelley KW、Woods JA、Johnson RW。中枢脂多糖通过α肾上腺素受体介导机制提高血浆IL-6浓度。美国生理学杂志。1997;272（6第2部分）：R1880–R1887。[公共医学][谷歌学者] 19Fontes JD、Kanazawa S、Nekrep N、Peterlin BM。II类反式激活子CIITA是一种转录整合子。微生物感染。1999;1(11):863–869.[公共医学][谷歌学者] 20Frank MG、Barrientos RM、Biedenkapp JC、Rudy JW、Watkins LR、Maier SF。正常脑老化中MHC II和关键促炎基因的mRNA上调。神经生物老化。2006;27(5):717–722.[公共医学][谷歌学者] 21Gaykema RP、Balachandran MK、Godbout JP、Johnson RW、Goehler LE。急性外周免疫激发后，老年小鼠中枢自主神经网络核团的神经元激活增强。自主神经科学。2006[公共医学][谷歌学者] 22戈德布特JP，约翰逊RW。年龄与神经炎症：一辈子的心理神经免疫后果。神经病学临床。2006;24(3):521–538.[公共医学][谷歌学者] 23Godbout JP，Berg BM，Kelley KW，Johnson RW。α-糖醇可减少小鼠原代小胶质细胞和大脑中脂多糖诱导的过氧化物自由基形成和白细胞介素-6分泌。神经免疫杂志。2004;149(1–2):101–109.[公共医学][谷歌学者] 24Godbut JP、Berg BM、Krzyszton C、Johnson RWα-生育酚可减弱脑中NF-κB的激活和促炎细胞因子的产生，并改善脂多糖诱导的疾病行为的恢复。神经免疫杂志。2005[公共医学][谷歌学者] 25Godbout JP、Chen J、Abraham J、Richwine AF、Berg BM、Kelley KW、Johnson RW。外周固有免疫系统激活后，老年小鼠的过度神经炎症和疾病行为。法赛布·J。2005;19(10):1329–1331.[公共医学][谷歌学者] 26Goehler LE、Erisir A、Gaykema RP。大鼠末梢区的神经-免疫界面。神经科学。2006;140(4):1415–1434.[公共医学][谷歌学者] 27Goehler LE、Gaykema RP、Hammack SE、Maier SF、Watkins LR。白细胞介素-1在迷走神经初级传入神经元中诱导c-Fos免疫反应。大脑研究。1998;804(2):306–310.[公共医学][谷歌学者] 28.Griffin R、Nally R、Nolan Y、McCartney Y、Linden J、Lynch MA。长期增强中的年龄相关衰减与小胶质细胞激活有关。神经化学杂志。2006;99(4):1263–1272.[公共医学][谷歌学者] 29Heyser CJ、Masliah E、Samimi A.IL Campbell和LH Gold，在大脑中表达白细胞介素6的转基因小鼠中，回避学习的进行性下降与炎症性神经变性平行。美国国家科学院院刊。1997;94(4):1500–1505. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 30Johnson RW、Gheusi G、Segreti S、Dantzer R、Kelley KW。C3H/HeJ小鼠对大脑中的脂多糖难以耐受。大脑研究。1997;752(1–2):219–226.[公共医学][谷歌学者] 31Kalehua AN、Taub DD、Baskar PV、Hengemihle J、Munoz J、Trambadia M、Speer DL、De Simoni MG、Ingram DK。脑室注射脂多糖后，大脑和血浆TNF-α水平升高，老年小鼠死亡率更高。老年学。2000;46(3):115–128.[公共医学][谷歌学者] 32Kelley KW、Bluthe RM、Dantzer R、Zhou JH、Shen WH、Johnson RW、Broussard SR.细胞因子诱导的疾病行为。大脑行为免疫。2003;17（1补充）：112–118。[公共医学][谷歌学者] 33Konsman JP、Parnet P、Dantzer R.细胞因子诱导的疾病行为：机制和影响。《神经科学趋势》。2002;25(3):154–159.[公共医学][谷歌学者] 34Laflamen N，Rivest S.Toll-like受体4：由循环革兰氏阴性细菌细胞壁成分触发的大脑先天免疫反应的缺失环节。法赛布·J。2001;15(1):155–163.[公共医学][谷歌学者] 35Lee CK、Weindruch R、Prolla TA。小鼠衰老大脑的基因表达谱。自然遗传学。2000;25(3):294–297.[公共医学][谷歌学者] 36Livak KJ，Schmittgen TD.使用实时定量PCR和2（-Delta Delta C（T））方法分析相关基因表达数据。方法。2001;25(4):402–408.[公共医学][谷歌学者] 37Long JM、Kalehua AN、Muth NJ、Calhoun ME、Jucker M、Hengemihle JM、Ingram DK、Mouton PR。衰老小鼠海马中星形胶质细胞和小胶质细胞的体视学分析。神经生物老化。1998;19(5):497–503.[公共医学][谷歌学者] 38Lynch AM、Walsh C、Delaney A、Nolan Y、Campbell VA、Lynch MA。IL-10（IL-1β的一种作用）消除了脂多糖诱导的海马信号增加？神经化学杂志。2004;88(3):635–646.[公共医学][谷歌学者] 39Marvel FA、Chen CC、Badr N、Gaykema RP、Goehler LE。迷走神经背侧复合体的可逆失活阻断了脂多糖诱导的社交退缩和中枢自主核内c-Fos的表达。大脑行为免疫。2004;18(2):123–134.[公共医学][谷歌学者] 40Monje ML，Toda H，Palmer TD。炎症阻滞恢复成年海马神经发生。科学。2003;302(5651):1760–1765.[公共医学][谷歌学者] 41Morgan TE、Xie Z、Goldsmith S、Yoshida T、Lanzrein AS、Stone D、Rozovsky I、Perry G、Smith MA、Finch CE。正常衰老期间大脑胶质细胞过度活跃的镶嵌现象及其因饮食限制而减弱。神经科学。1999;89(3):687–699.[公共医学][谷歌学者] 42Morley AA，Trainor KJ。缺乏维生素E对小鼠寿命的影响。生物老年学。2001;2(2):109–112.[公共医学][谷歌学者] 43Mouton PR、Long JM、Lei DL、Howard V、Jucker M、Calhoun ME、Ingram DK。年龄和性别对小鼠脑内小胶质细胞和星形胶质细胞数量的影响。大脑研究。2002;956(1):30–35.[公共医学][谷歌学者] 44Mulsant BH，Ganguli M.晚年抑郁症的流行病学和诊断。临床精神病学杂志。1999;60补充20:9–15。[公共医学][谷歌学者] 45.Muramami N、Fukata J、Tsukada T、Kobayashi H、Ebisui O、Segawa H、Muro S、Imura H、Nakao K。细菌脂多糖诱导大鼠下丘脑、垂体、肾上腺和脾脏中白细胞介素-6信使核糖核酸的表达。内分泌学。1993;133(6):2574–2578.[公共医学][谷歌学者] 46Murray CA，Clements MP，Lynch MA。白细胞介素-1诱导大鼠海马脂质过氧化和膜变化：一项与年龄相关的研究。老年学。1999;45(3):136–142.[公共医学][谷歌学者] 47Musselman DL、Lawson DH、Gumnick JF、Manatunga AK、Penna S、Goodkin RS、Greiner K、Nemeroff CB、Miller AH。帕罗西汀预防大剂量干扰素α诱发的抑郁症。N英格兰医学杂志。2001;344(13):961–966.[公共医学][谷歌学者] 48Nelson KP，Marks NL，Heyen JR，Johnson RW。中央注射白细胞介素-1β前后成年和老年小鼠的行为。生理行为。1999;66(4):673–679.[公共医学][谷歌学者] 49Neumann H、Schweigrieter R、Yamashita T、Rosenkranz K、Wekerle H、Barde YA。肿瘤坏死因子通过rho依赖机制抑制海马神经元的突起生长和分支。神经科学杂志。2002;22(3):854–862. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 50Nguyen MD、Julien JP、Rivest S.先天免疫：神经保护和神经变性中缺失的环节？国家神经科学评论。2002;三(3):216–227.[公共医学][谷歌学者] 51Nicolle MM，Gonzalez J，Sugaya K，Baskerville KA，Bryan D，Lund K，Gallagher M，McKinney M.老年空间学习障碍啮齿动物海马氧化应激的特征。神经科学。2001;107(3):415–431.[公共医学][谷歌学者] 52Ogura K，Ogawa M，Yoshida M。衰老对正常大鼠脑内小胶质细胞的影响：免疫组织化学观察。神经报告。1994;5(10):1224–1226.[公共医学][谷歌学者] 53Olson JK，Miller SD。小胶质细胞通过多个TLR启动中枢神经系统固有和适应性免疫反应。免疫学杂志。2004;173(6):3916–3924.[公共医学][谷歌学者] 54Parnet P、Amindari S、Wu C、Brunke-Reese D、Goujon E、Weyhenmeyer JA、Dantzer R、Kelley KW。小鼠大脑中I型和II型白细胞介素-1受体的表达。大脑研究摩尔大脑研究。1994;27(1):63–70.[公共医学][谷歌学者] 55Penninx BW、Kritchevsky SB、Yaffe K、Newman AB、Simonsick EM、Rubin S、Ferrucci L、Harris T、Pahor M。老年人的炎症标记物和抑郁情绪：来自健康、衰老和身体成分研究的结果。生物精神病学。2003;54(5):566–572.[公共医学][谷歌学者] 56Perry VH、Matyszak MK、Fearn S.老年啮齿动物中枢神经系统小胶质细胞抗原表达的改变。格利亚。1993;7(1):60–67.[公共医学][谷歌学者] 57Perry VH、Newman TA、Cunningham C.全身感染对神经退行性疾病进展的影响。Nat Rev神经科学。2003;4(2):103–112.[公共医学][谷歌学者] 58.Pollmacher T、Haack M、Schuld A、Reichenberg A、Yirmiya R。低水平循环炎性细胞因子——它们会影响人脑功能吗？大脑行为免疫。2002;16(5):525–532.[公共医学][谷歌学者] 59Quan N，Sundar SK，Weiss JM。周围和中央注射脂多糖后不同脑区白细胞介素-1的诱导。神经免疫杂志。1994;49(1–2):125–134.[公共医学][谷歌学者] 60.Quan N，Whiteside M，Herkenham M.外周注射脂多糖后大脑和垂体中白细胞介素-1β信使RNA表达的时间进程和定位模式。神经科学。1998;83(1):281–293.[公共医学][谷歌学者] 61Richwine AF，Godbut JP，Berg BM，Chen J，Escobar J，Millard DK，Johnson RW。喂食高抗氧化剂饮食的老年小鼠的心理运动表现改善与体内外脑白细胞介素-6产生减少有关。大脑行为免疫。2005;19(6):512–520.[公共医学][谷歌学者] 62Rozovsky I，Finch CE，Morgan TE。小胶质细胞和星形胶质细胞的年龄相关激活：体外研究表明，老化、增殖增加和抵抗下调的持续表型。神经生物老化。1998;19(1):97–103.[公共医学][谷歌学者] 63Schobitz B，de Kloet ER，Sutanto W，Holsboer F.大鼠脑内白介素6 mRNA和白介素-6受体mRNA的细胞定位。欧洲神经病学杂志。1993;5(11):1426–1435.[公共医学][谷歌学者] 64Sheffield LG，Berman NE。非人类灵长类动物正常衰老过程中MHC II类小胶质细胞表达增加。神经生物老化。1998;19(1):47–55.[公共医学][谷歌学者] 65.Sloane JA、Hollander W、Moss MB、Rosene DL、Abraham CR。衰老猴白质中的小胶质细胞活化和蛋白质硝化增加。神经生物老化。1999;20(4):395–405.[公共医学][谷歌学者] 66Streit WJ、Sparks DL。心脏病患者和高胆固醇血症兔大脑中小胶质细胞的激活。分子医学杂志。1997;75(2):130–138.[公共医学][谷歌学者] 67Thomas AJ、Davis S、Morris C、Jackson E、Harrison R、O'Brien JT。晚年抑郁症患者白细胞介素-1β升高。美国精神病学杂志。2005;162(1):175–177.[公共医学][谷歌学者] 68Vallieres L、Campbell IL、Gage FH、Sawchenko PE。慢性星形细胞产生白细胞介素-6的成年转基因小鼠海马神经发生减少。神经科学杂志。2002;22(2):486–492. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 69Vereker E，O'Donnell E，Lynch MA。白细胞介素-1β对长期增强的抑制作用与应激激活蛋白激酶活性的增加有关。神经科学杂志。2000;20(18):6811–6819. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 70Weaver JD、Huang MH、Albert M、Harris T、Rowe JW、Seeman TE。白细胞介素-6与认知能力下降的风险：麦克阿瑟成功老龄化研究。神经病学。2002;59(3):371–378.[公共医学][谷歌学者] 71Wong AM、Patel NV、Patel N K、Wei M、Morgan TE、de Beer MC、de Villiers WJ、Finch CE。在正常的脑老化过程中，巨唾液酸的增加会因热量限制而减弱。神经科学快报。2005;390(2):76–80.[公共医学][谷歌学者] 72.谢Z、摩根TE、罗佐夫斯基I、芬奇CE。体外衰老和胶质细胞对脂多糖的反应：IL-1和IL-6的诱导作用更强，但神经毒性的诱导作用更小。实验神经。2003;182(1):135–141.[公共医学][谷歌学者] 73.Ye SM，Johnson RW。白细胞介素-10的年龄相关性下降可能有助于老龄小鼠脑内白细胞介素-6的表达增加。神经免疫调节。2001;9(4):183–192.[公共医学][谷歌学者] 74Zhou H，Lapointe BM，Clark SR，Zbytnuik L，Kubes P.脂多糖诱导白细胞向脑内募集时小胶质细胞TLR4的要求。免疫学杂志。2006;177(11):8103–8110.[公共医学][谷歌学者] 
