Cdc20在检查点对应的细胞中降解
A）HeLa细胞在S期进行预同步化，随后用诺卡唑阻止细胞有丝分裂6小时。细胞未经处理（对照）或用MG132或放线菌酮（CHX）处理2小时，通过定量免疫印迹法测定BubR1、Cdh1、Cdc20和Mad2的水平。蛋白质水平根据肌动蛋白进行标准化，条形图显示未经处理的样品设置为1时所示蛋白质的水平。B）将环己酰亚胺添加到诺可唑或紫杉醇阻滞的细胞（与A同步）后0、20、40、60和120分钟，通过ECL western blot分析BubR1、Cdc20、Cyclin B1和Mad2的水平（整个blot显示在图S7).C）将环己酰亚胺或雷帕霉素添加到诺卡唑滞留细胞后0、20、40、60和120分钟，Cdc20和Mad2的水平图S7).D）将雷帕霉素添加到异步HeLa细胞后，在0、30、60和120分钟时，p70S6K在Thr389上磷酸化。E和F）YFP-Cdc20在单细胞中的降解。将编码YFP-Cdc20的质粒微注射到G2期HeLa细胞中，通过有丝分裂检测荧光水平。注意，YFP-Cdc20由帽依赖性mRNA编码，其翻译在有丝分裂中受到抑制，因此，我们可以在不使用环己酰亚胺的情况下测定降解。在指定的时间添加诺卡唑或MG132。在E）的前中期和F）的G2期添加诺卡唑。在3个独立实验中，细胞代表10个细胞。
