通过活成像和固定细胞检测含PI（3）P的omegasome与ER和自噬体的关系。（A） 用mRFP-MAP-LC3（红色）和CFP-ER（蓝色）转染克隆201细胞并饥饿60分钟。以每10秒1帧的速度进行成像，并显示此序列中的选定间隔，从饥饿后33分钟开始。箭头表示首次出现可识别的ω体（绿色）和自噬体（红色）。放大的面板来自两个方框区域，按顺序表示（1）ER、（2）DFCP1、（3）MAP-LC3、（4）ER-MAPLC3、（5）DFCP1-MAPLC3和（6）MAPLC3-ER的视图。另请参阅视频3（可从http://www.jcb.org/cgi/content/full/jcb.200803137/DC1). （B） 利用TIRFM成像研究ω和ER的动态关系。注意，ω在含有ER的区域形成并在那里崩塌。另请参阅视频4。（C） 饥饿45分钟后解冻克隆201细胞冰冻切片，并双重标记抗GFP-DFCPI（箭头，10纳米金）和抗PDI（箭头、5纳米金）。请注意，在PDI标记的内质网膜附近，标记有DFCPI-GFP的自噬样空泡（星号）。这是多面板补充图的一个面板（图S4）。（D） 从GFP-DFCP1和mRFP-MAP-LC3在饥饿期间的实时成像中选择的帧，由此形成中间产物，其中MAP-LC3似乎从omegasome发芽，同时仍被DFCP1染色膜勾勒出来。每块面板的底部都是这些结构的线条图，使用了相关框架的放大照片。另请参阅视频6。（E） 利用外源性应用的PI（3）P-结合蛋白对ω体进行结肠化。克隆201细胞饥饿60分钟，用硝化纤维素穿孔，并用纯化的p40的GST-PX结构域染色荧光粉大多数GSP-PX结构域对早期内体进行染色（未描述），但大量蛋白质也与DFCP1 omegasomes（F和G）结合。（F和G）ω体与自噬蛋白和ER的关系。如图所示，克隆201细胞用内源性ER和内源性MAP-LC3或Atg5抗体反染。放大面板1-5中显示了从这些细胞中选择的示例（除了显示的示例外），其中ER位于单层中，并且从胞浆中很好地分离出来，以便评估共定位。棒材：（A、B和D）1μm；（E–G）20μm。
