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神经生物学疾病。作者手稿；PMC 2009年6月1日提供。
以最终编辑形式发布为：
神经生物学疾病。2008年6月；30(3): 293–302.
2008年3月10日在线发布。 数字对象标识：2016年10月10日/j.nbd.2008.01.4
预防性维修识别码：项目经理2468217
NIHMSID公司：尼姆斯53193
PMID：18395459

Tiagabine对亨廷顿病N171-82Q和R6/2小鼠模型具有神经保护作用

直纪Masuda,a、，# 齐鹏,a、，# 李青（音）,一 马里·江,一 梁一登,一 王晓芳,一 Ming Zhao（赵铭）,b条 王文飞,一 克里斯托弗·罗斯,a、，c、，d日和段文珍a、，*
作者信息 版权和许可信息 PMC免责声明

关联数据

补充资料

摘要

亨廷顿病（HD）是一种常染色体显性神经退行性疾病，以舞蹈病、不协调、寿命缩短、亨廷顿蛋白内含物和神经变性为特征。我们之前从NINDS化合物库中筛选了1040种美国食品药品监督管理局批准的化合物，发现在HD的诱导细胞模型中，一种名为nipeotic acid的化合物显著减少了突变亨廷顿蛋白的聚集并阻断了细胞毒性。由于尼泊金酸不跨越血脑屏障（BBB），我们在N171-82Q和R6/2转基因HD小鼠模型中研究了其类似物噻加宾，它能够跨越BBB。在HD小鼠中，每天以2 mg/kg和5 mg/kg的剂量腹腔注射噻加宾。我们发现，噻加宾延长了N171-82Q HD小鼠的生存期，改善了运动能力，并减轻了脑萎缩和神经变性。这些有益作用在R6/2 HD小鼠中得到了进一步证实。小鼠血清中有效剂量的噻加宾水平与使用噻加平治疗的人类患者的水平相当。这些结果表明，噻加宾可能在HD治疗中具有有益的作用。因为噻加宾是FDA批准的药物，它可能是治疗HD的未来临床试验的一个有希望的候选药物。

关键词：亨廷顿病，蒂加宾，神经保护，转基因小鼠模型，临床前试验

介绍

HD是一种常染色体显性神经退行性疾病，亨廷顿蛋白中多聚谷氨酰胺重复序列增多，亨廷廷蛋白折叠异常(Wanker 2000公司;兰德斯和贝茨2004;Ross和Poirier，2004年)这导致纹状体和皮层中神经元核内内含物的形成(DiFiglia等人，1997年). HD患者纹状体明显萎缩，纹状体、皮层、杏仁核和丘脑细胞丢失(Petersen等人，1999年). 目前没有任何治疗方法可以延缓HD患者的发病或预防疾病进展。

2001年，美国国家神经疾病和中风研究所（NINDS）编译了一个包含1040种化合物的药物库，这些化合物是与MicroSource Discovery Systems（康涅狄格州盖勒德斯维尔）联合挑选的，主要由FDA批准的药物组成(Aiken等人，2004年;Wang等人，2005年)这可能是治疗神经退行性疾病的候选药物。我们将该化合物库应用于HD的诱导型PC12细胞模型，发现尼泊金酸是保护细胞免受突变htt毒性的最有效化合物之一(Wang等人，2005年). 然而，尼克酸不能有效地跨越血脑屏障。因此，我们测试了它的衍生物噻加宾，它具有一个附加的亲脂基团，能够使药物越过血脑屏障(Andersen等人，2001年;Krogsgaard-Larsen等人，2000年)在HD鼠标模型中。

噻加宾被用作抗癫痫药物(鲁尔和罗尼1998;斯特凡和费尔斯坦2007). 噻加宾在癫痫中的确切作用机制尚不完全清楚，但据信它可以增强中枢神经系统中γ-氨基丁酸（GABA）的活性(Soudijn和van Wijngaarden 2000年). GABA能中棘神经元是最脆弱的神经元，在亨廷顿病中经常退化(Vonsatel等人，1998年;Albin等人，1995年,Reiner等人，1988年). 可以通过增强GABA能活性或其他未知机制来预防神经退行性过程。我们在此报告，噻加宾提高了两种HD小鼠模型的存活率，改善了运动能力，并减轻了脑萎缩。当前研究中获得的数据可能提供临床前见解，从而促进替加宾在HD患者中的临床试验。

材料和方法

小鼠和药物给药

N171-82Q转基因HD小鼠与杂交小鼠（C3H/HEJ×C57BL/6J F1，Taconic，NY）交配。所有小鼠均在标准条件下饲养，24小时和12小时光/暗循环可自由获取食物和水。我们在所有研究中使用雄性N171-82Q HD小鼠，因为我们发现雄性和雌性N171-82 Q小鼠之间的所有表型都存在显著差异(Duan等人2003). N171-82Q雄性小鼠通常在19周龄后出现运动能力缺陷；这些小鼠的平均寿命约为22周。具有CBA/C57Bl6背景的R6/2小鼠购自Jackson实验室（缅因州巴尔港）。对小鼠进行基因分型，并用PCR测定CAG重复序列大小。R6/2小鼠的CAG重复长度约为110–118。这些小鼠早在4周龄时就出现运动表型。R6/2小鼠的平均寿命约为12-14周。这些动物以12小时的光/暗周期饲养，食物和水持续供应。根据我们的经验和其他报告，R6/2小鼠没有性别依赖性差异(赫施和费兰特2004). 因此，我们的研究中使用了雄性和雌性R6/2小鼠。实验通过最小化疼痛和不适的程序进行。所有动物实验均按照动物护理和使用委员会批准的程序进行。

盐酸噻加宾（纯度99%）购自R&S Pharmchem Co.Ltd（中国杭州）。通过腹膜内注射，每天用2或5mg/kg在盐水中新鲜制备的替加宾治疗小鼠。

HD细胞模型与药物治疗

表达tTA（Clontech）的Tet-off PC12细胞被稳定转染htt-N63-148Q（亨廷顿蛋白（htt）的第一个63 N-末端氨基酸，含有148个聚谷氨酰胺重复序列）。当从培养基中去除强力霉素（Dox；一种四环素衍生物）时，Htt基因表达启动(Wang等人，2005年). 在NGF（50 ng/ml）存在下分化细胞。同时诱导Htt表达和细胞分化，以确定神经细胞中的Htt毒性。细胞在电镀后约4小时附着在平板上后，将噻加宾添加到培养基中。将细胞进行胰蛋白酶化并用PBS清洗，100µl细胞密度为1×105细胞/ml接种在I型胶原涂层板（BD Biosciences）和分化培养基中。

将多西环素（200 ng/ml）添加到分化培养基中，以抑制对照组中突变htt的表达。在htt诱导后4天，用LDH释放量测定细胞毒性。将噻加宾以10 mM储备溶液的形式溶解在无菌盐水中，并以指示的浓度添加到培养基中。泛酶抑制剂z-VAD购自R&D systems，Inc.，并用作阳性对照化合物，因为我们在培养体系中对该化合物具有一致的保护作用(Wang等人，2005年).

行为测试和生存研究

将所有小鼠随机分为每组。非转基因对照小鼠是野生型同窝小鼠。在生存研究和运动行为分析开始时，每组包含15只小鼠。我们使用同一组动物进行生存分析和运动性能测试。

两名经验丰富的调查人员（NM和QP）每天监测两次生存率，分别在清晨和下午晚些时候。当HD小鼠被放在背上后无法直立，被轻轻戳30秒后开始活动时，这些小鼠被安乐死。

使用旋转装置（哥伦布仪器，俄亥俄州）评估运动行为性能，在该装置中测量小鼠以4至40 rpm的加速速度停留在杆上的时间。每只老鼠训练5分钟，训练后在家中笼中休息1小时。然后将小鼠放回旋转床上进行三次试验，以加速速度（4–40 rpm）进行最多5分钟的试验，间隔30分钟的休息时间。对小鼠进行连续3天的测试，到那时达到了稳定的基线水平。

组织学

在1×PBS经心灌注后，用4%冰镇多聚甲醛灌流小鼠，将大脑在4%多聚甲醛中固定过夜，然后转移到20%蔗糖中，直到大脑沉入试管底部。用滑动切片机对30µm的冠状切片进行组织学染色。根据制造商的说明，使用市售FD神经银试剂盒1（FD Neuro Technologies，Ellicott City，MD）在自由漂浮切片上进行神经变性银染色。退化神经元通过使用计算机通过CCD数码相机（日本滨滨光电株式会社）通过暗银阳性染色进行鉴定。使用EM48（Chemicon，1:200）对突变的亨廷顿蛋白进行免疫染色，EM48是一种针对标记突变亨廷顿聚集体的突变人类亨廷顿蛋白质的多克隆抗体(Li等人，2001年). 根据制造商指南，在ABC（亲和素-生物素复合物）/DAB（3,3-二氨基苯扎定-4HCl）试剂盒（加利福尼亚州伯灵盖姆Vector Labs）和DAB中使用生物素化山羊抗兔IgG（1:200稀释）对EM48免疫活性产物进行可视化。

纹状体体积和侧脑室大小的测量

根据Cavalieri原理，通过组织学分析评估纹状体和侧脑室的体积(Cyr等人，2005年)（体积=s1d日1+秒2d日2…sn个d日n个，其中s=表面积，d=两个截面之间的距离）。我们使用不同组小鼠进行体积测量研究。每组包含四只小鼠。Cavalieri方法要求对感兴趣的参考空间进行初始随机切割，随后以一致的间隔进行切割。假设通过参考空间的截面是系统随机的，并且通过参考空间所有截面的采样概率相等，则Cavalieri方法根据截面上的参考面积给出无偏总体积估计。利用卡瓦列里原理，可以估计任意形状参考空间的平均总体积，而不必考虑系统均匀随机截面上的面积。由于选择的切片数量有限，卡瓦列里原理被应用于组织学数据。我们在首次检测纹状体时选择第一个切片，并选择每四个系列切片进行容量分析。我们通过随机选择第一个截面，考虑了大约11个纹状体解剖水平，以估算每个大脑的体积。使用光学显微镜和彩色数码相机（Retina 2000R，QImaging）进行图像采集。通过使用Aperio Imagescope软件（Aperio Technologies）绘制每个大脑半球的纹状体和侧脑室轮廓，计算11个Nissl染色切片的表面积。数据表示为平均卡瓦列里体积（mm三)±每组四只小鼠的扫描电镜。

Htt骨料的量化

用40倍放大率在8个显微镜下对EM48阳性细胞核进行评估，这些显微镜下的视野来自大脑的每个指定区域，包括皮层、海马体和纹状体，并测定每个区域的平均聚集数(DiFiglia等人，2007年).

噻加宾的HPLC/MS/MS测定

混合脑匀浆并在4°C下以2500×rpm离心10分钟。将100µl体积的顶部有机层转移到一次性硼硅酸盐玻璃培养管（13×100 mm）中，向该管中添加100µl去离子水，剧烈混合10 s，并以13000×rpm离心5 min。将20µl的体积注入HPLC仪器中进行定量分析。血清样本的制备如前所述(Zhao等人，2005年). 使用Waters X-Terra™MS（C183.5µm，内径50×2.1 mm）。使用Waters X-Terra™MS，填充有3.5µM ODS固定相，并由Waters Xterra TM（RP18，3µM）填充的保护柱进行保护，从而在环境温度下实现分析与潜在干扰物质的分离。用于色谱分离的流动相由70%甲酸（0.1%）在CH中组成三CN，30%醋酸铵（10 mM），在0.2 ml/min的流速下呈等容性。连续3天进行血清和脑组织校准标准和质量控制的方法验证运行，包括一式两份处理的校准曲线和一式三份四种不同浓度的质量控制样品。分析的准确性和精密度分别通过与标称浓度的平均相对百分比偏差和批内和批间偏差进行评估。

统计

数据表示为平均值±SEM。使用Student’st吨测试或费希尔精确测试。生存数据通过对数秩检验进行评估。

结果

Tiagabine保护细胞免受突变Htt诱导的毒性

为了确定噻加宾对HD细胞的保护程度是否与尼泊金酸相同，我们使用了我们的诱导HD细胞模型(Wang等人，2005年). 细胞诱导表达突变型htt并通过NGF分化。噻加宾以浓度依赖的方式抑制突变htt诱导的PC12细胞LDH释放，表明噻加宾可保护细胞免受突变htt引起的毒性(图1).

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替加宾（TGB）保护神经元免受突变亨廷顿蛋白（htt）诱导的培养细胞毒性

通过在Tet-off系统中提取强力霉素，在PC12细胞中诱导表达了含有148个多聚谷氨酰胺重复序列的突变htt的N末端序列（N63-148Q-myc）。通过在培养基中添加NGF（50 ng/ml）来分化细胞。通过死亡细胞释放LDH来评估细胞毒性*对与Dox（+）组相比<0.05**对与Dox（−）组的值相比，<0.05。三个单独的实验，每个实验三次。标准学生t吨-检验用于统计分析。

Tiagabine延长N171-82Q小鼠的生存期，改善运动功能，但不影响体重

进一步确定噻加宾是否具有神经保护作用体内，我们使用N171-82Q HD转基因小鼠。HD-N171-82Q小鼠（81号系）表达含82种谷氨酰胺的亨廷顿蛋白N末端片段(Schillings等人，1999年). N171-82Q小鼠的神经病理学特征与人类HD更为相似，因为亨廷顿蛋白聚集体在皮质中比纹状体中更为突出，并且这些小鼠的神经变性比其他HD小鼠模型更为突出(Yu等人，2003年). 通常在N171-82Q小鼠10周龄后检测到旋转体缺陷。从8周大开始，给HD小鼠服用替加宾，直到它们的生命结束。噻加宾治疗的HD小鼠的生存期显著延长。HD对照组的平均生存率为122.3±5.0（平均值±SE），HD-vehicle组为126.6±2.7，HD-噻加宾2mg/kg组为134.0±5.9，HD-tiagabine 5mg/kg组则为160.0±5.8。(图2a). HD小鼠在8周龄后体重逐渐减轻。服用噻加宾不会影响野生型同窝对照小鼠的体重，也不会影响HD小鼠的体重减轻(图2b).

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Tiagabine延长N171-82Q HD小鼠的生存期并改善运动能力

以2 mg/kg/d和5 mg/kg/d的剂量给小鼠注射噻加宾。每天监测存活率。（a） 5 mg/kg的噻加宾（红线）显著延长了N171-82Q小鼠的生存期。对通过对数秩和检验，噻加宾5mg/kg组与溶媒组的比较=0.028。（b） 噻加宾对N171-82Q小鼠的体重没有影响。通过加速旋转装置评估16周龄（c）和18周龄（d）小鼠的运动行为性能。n=10-15。值为平均值和SE*对与WT-vehicle组相比<0.05；#对与标准学生HD-vehicle组的值相比，<0.05t吨-测试。

我们进一步评估了指定年龄段小鼠的运动功能。在这些年龄段的N171-82Q HD小鼠中，运动功能明显受损，这表明在旋转台上的运行时间显著缩短(图2c和d)与野生型同窝对照小鼠相比。替加宾治疗的小鼠在旋转棒上表现出优异的剂量依赖性运动性能(图2c和d).

Tiagabine减轻N171-82Q HD小鼠脑萎缩和神经变性

为了确定用噻加宾治疗的HD小鼠运动功能的改善和生存率的增加是否是由于大脑中神经退行性过程进展缓慢所致，我们对用噻加宾或载体治疗的HD-小鼠的大脑进行了组织学分析。与非转基因小鼠相比，随着疾病的进展，HD小鼠的侧脑室增大，纹状体体积减小，这表明HD小鼠出现了脑萎缩(图3a-c). 与用载体治疗的HD小鼠相比，用噻加宾治疗的HD小鼠的心室较小，纹状体体积较大，表明噻加滨治疗可以减轻脑萎缩(图3a-c). 神经银染色用于鉴定退行性神经元。18周龄后，HD小鼠的皮层和纹状体均发现银阳性神经元(图3d). 噻加宾治疗的HD小鼠梨状皮质和纹状体区域的银阳性神经元较少(图3d–f).

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Tiagabine减轻N171-82Q HD小鼠脑萎缩和神经变性

从8周龄开始给HD小鼠注射噻加宾，18周龄灌流小鼠，处理脑切片进行尼塞尔染色（a）和神经银染色以检测变性神经元（b）。（a） 来自指定组的尼斯氏染色脑切片的代表性照片。比例尺=120µm。注意，N171-82Q小鼠的大脑出现心室扩大和纹状体萎缩。噻加宾治疗逆转了HD小鼠的脑萎缩。（b–c）脑萎缩的量化数据。噻加宾治疗显著减轻了N171-82Q小鼠的脑萎缩。n=4只小鼠*对<0.05，与非转基因载体组（Nontg-veh）相比**对与标准学生用溶媒（HD-veh）治疗的N171-82Q小鼠的值相比，<0.05t吨-测试。（d） 代表性的银染结果是，深染神经元代表正在进行神经变性的细胞。注意，与噻加宾处理的大脑相比，在大脑皮层和纹状体区域，车辆处理的大脑中发现了更多的深染神经元。比例尺=20µm。（e–f）梨状皮质和纹状体中银阳性神经元的量化。噻加宾处理过的样本中，梨状皮层和纹状体中的银阳性神经元较少。n=4只小鼠*对<0.05，与标准学生的车辆组值相比t吨-测试。

Tiagabine确实影响N171-82Q HD小鼠的亨廷顿蛋白聚集体

亨廷顿蛋白中延长的聚谷氨酰胺重复序列导致神经元聚集物的异常折叠和积累(DiFiglia等人，1997年;Ross和Poirier，2004年). EM48抗体用于测定HD小鼠脑中聚集体的相对量。有趣的是，在N171-82Q HD小鼠中，EM48阳性神经元最多见于梨状皮质和海马，纹状体较少。噻加宾治疗对这些脑区的htt聚集没有影响(图4a–c).

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Tiagabine对N171-82Q小鼠的亨廷顿蛋白聚集体没有影响

从8周龄开始，用溶媒（生理盐水）或噻加宾（5 mg/kg）治疗HD小鼠。小鼠在18周龄时进行EM48免疫染色，以检测突变的亨廷顿蛋白聚集体。（a） 指定组的EM48抗体染色脑切片的代表性照片。比例尺=20µm。（b–c）N171-82Q小鼠经赋形剂和噻加宾处理后，梨状皮层和海马中htt聚集细胞的密度没有差异。n=4只小鼠。

Tiagabine可降低R6/2小鼠的死亡率和运动障碍，但不能防止体重减轻

为了进一步证实噻加宾对HD的有益作用，我们检查了R6/2小鼠，这些小鼠广泛用于临床前试验(Hersch&Ferrante 2004年). 我们发现R6/2小鼠早在4周大时就出现了运动行为缺陷。因此，从6周龄开始对有症状的R6/2小鼠施用噻加宾。与用载体治疗的R6/2小鼠相比，用5 mg/kg噻加宾治疗的R6/2小鼠的死亡率显著降低(图5a). 用溶媒治疗的HD小鼠的平均存活率为84.2±3.5（平均值±SE），而用噻加宾5 mg/kg治疗的HDs小鼠的平均生存率为102.0±2.9。我们接下来在10周龄和12周龄时通过加速旋转试验评估运动功能，因为R6/2小鼠在这些年龄段表现出严重的运动功能缺陷；然而，接受替加宾治疗的R6/2小鼠在10周龄时表现出明显的运动能力改善(图5c)和12周大(图5d). R6/2小鼠的体重随着疾病的进展而减轻，噻加宾给药并不能阻止R6/2鼠的体重减轻(图5b).

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Tiagabine提高R6/2小鼠的存活率并改善运动能力

（a） 6周龄R6/2小鼠每天注射溶媒（生理盐水）或噻加宾（5 mg/kg），并每天监测存活率。噻加宾5 mg/kg（红线）显著提高存活率。通过对数秩检验，R6/2–载体（黑线）和R6/2噻加宾治疗组（红线）之间的比较P<0.05。（b） 噻加宾对R6/2小鼠的体重没有影响。（c） 使用加速旋转装置对指定年龄（n=8–15）的小鼠进行运动行为性能评估。数值为平均值和SE*对与WT-vehicle组相比<0.05；#对与标准学生HD-vehicle组的值相比，<0.05t吨-测试。

Tiagabine可减轻R6/2小鼠的脑萎缩，但不影响htt聚集

R6/2小鼠在10周龄时出现严重的脑萎缩，表现为脑室增大、纹状体变小、皮层变薄和全脑缩小(图6a). 噻加宾治疗减轻脑萎缩(图6a–c). EM48抗体检测到R6/2小鼠脑内广泛分布的htt内含物。Tiagabine处理对htt聚集物没有影响(图6d–f).

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Tiagabine可减轻脑萎缩，但不影响R6/2小鼠的htt聚集

（a） 指定组的Nissl染色脑切片的代表性照片。比例尺=120µm。注意，R6/2小鼠的大脑显示心室增大，纹状体缩小。Tiagabine治疗逆转了R6/2小鼠的脑萎缩。（b–c）脑萎缩量化。噻加宾治疗显著减轻R6/2小鼠的脑萎缩。n＝4只小鼠*对<0.05，与非转基因载体组（Nontg-veh）相比**对<0.05，与标准学生用运载工具（R6/2-veh）治疗的R6/2小鼠的值相比t吨-测试。（d） 指定组的EM48抗体染色脑切片的代表性照片。比例尺=20µm。（e–f）经赋形剂和噻加宾处理的R6/2小鼠额叶皮层和纹状体中htt聚集细胞的密度没有差异。n=4只小鼠。

GABA通路的增强似乎与噻加宾的保护机制无关

为了进一步确定噻加宾对HD小鼠的保护作用是否是由于其加强GABA通路，我们进行了western blot分析。与用载体治疗的HD小鼠相比，用噻加宾治疗HD小鼠的GAD65/67蛋白水平没有差异（参见补充图)提示噻加宾的保护作用不是由于GABA信号的增强。

小鼠体内噻加宾的有效水平与人类可达到的水平相当

为了研究小鼠的有效剂量是否与人类可达到的剂量相当，我们使用LC/MS/MS测量血液和脑组织中噻加宾的水平。每天向小鼠注射噻加宾，持续1周，并采集血样和脑组织以测量药物浓度。5 mg/kg组的血液浓度为17.2±4.8 ng/ml（平均值±SD，n=10）。该水平与连续5天每天服用2毫克的患者的有效水平相当（替加宾的血浆浓度为20–50 ng/ml，古斯塔夫森和门格尔，1995年). 脑组织中的药物浓度为177.0±14.2 ng/g湿重。

讨论

目前还没有有效的治疗方法来预防HD的发病或减缓HD的进展。目前的治疗是有症状的，包括使用抗精神病药物和精神药物来减少舞蹈病，以解决精神症状，包括抑郁症、强迫症状和精神病。我们目前的研究证明了替加宾对HD小鼠的有益作用。我们发现，在这两种HD转基因模型中，噻加宾延长了生存期，改善了运动能力，并减轻了脑萎缩和神经变性。我们最初的研究是在N171-82Q小鼠中进行的，这些小鼠表现出逐渐发病；然后我们证实了替加宾对R6/2小鼠的神经保护作用。在N171-82Q和R6/2模型中测试噻加宾的作用很重要，因为这两种模型已广泛用于评估HD的临床前神经保护治疗(Hersch&Ferrante，2004年)我们可以很容易地将噻加宾的效力与已报道的化合物进行比较。在N171-82Q小鼠症状前阶段和R6/2小鼠症状期开始服用噻加宾；在这两种情况下，噻加宾都提供了保护，这表明噻加平可以同时用于有症状的患者和基因阳性的症状前个体。

在HD中，纹状体中最脆弱的神经元是中等大小的棘状GABA投射神经元；早期发现HD患者尾壳核内GABA水平显著降低，这与投射神经元丢失的发现相一致(Perez-De La Cruz&Santamaria，2006年). 投射神经元本身分为两类。这两种类型都含有GABA作为主要神经递质，但在纹状体投射神经元的两个种群中，间接途径（即脑啡肽/含GABA的神经元）的神经元首先受到影响，从而为HD的标志性运动增加提供了解剖学基础(雷纳等., 1988;阿尔宾等., 1992). 在成人HD的后期，纹状体投射神经元的两个群体都受到影响，伴随着直接通路标记物（即P物质/强啡肽/GABA相关神经元）的丢失，包括多巴胺D1受体和P物质(雷纳等., 1988;里奇菲尔德等., 1991). 噻加宾是一种成功完成临床试验的尼哌酸类似物，因此被引入临床实践。虽然噻加宾抗癫痫作用的确切机制尚不完全清楚，但据信，该化合物通过阻止GAT-1摄取GABA而专门作用于GABA能突触，从而增强GABA介导的抑制性神经传递(Angehagen等人，2003年;Schachter 2001年). 因此，在HD中，GABA能功能的增强也可能参与噻加宾的神经保护作用。此外，由于噻加宾可以保护神经元免受突变的杭丁顿蛋白诱导的培养细胞毒性，因此噻加滨也可以在HD中提供直接的神经保护。

Tiagabine改善了R6/2和N171-82Q小鼠的旋转木马性能，但对非转基因对照小鼠的旋转木马性能没有影响。这些结果表明，噻加宾通过减轻由突变的亨廷顿蛋白引起的导致运动障碍的病理变化而改善运动功能，而不是通过改善小鼠的一般活动和性能。

噻加宾可减少HD小鼠的脑萎缩和神经变性，但不能减少亨廷顿蛋白聚集体。这些数据表明，噻加宾的神经保护作用似乎不是由于对亨廷顿蛋白聚集体的任何影响。有趣的是，亨廷顿蛋白聚集体最多的大脑区域并不是那些有大量神经退化的区域。我们发现，尽管N171-82Q小鼠海马内有大量聚集细胞，但该区域的神经变性并不明显。然而，纹状体中含有亨廷顿蛋白聚集体的细胞非常少，而纹状体是HD中神经退行性变最多的区域。这与发现一致，即形成聚集物的亨廷顿蛋白与神经元死亡没有正相关关系，而正是弥散的细胞内亨廷顿蛋白质的数量导致神经元丢失(Arrasate等人，2004年).

有证据表明HD患者和小鼠体重减轻，这可能是由于HD的代谢变化所致。噻加宾治疗不能阻止两种HD小鼠模型的体重减轻，表明噻加比的神经保护作用与代谢变化的纠正无关。

我们目前的研究表明，硫加宾通过GABA途径以外的机制保护HD小鼠的神经元。需要进一步研究以评估噻加宾在HD中的神经保护机制，因为噻加平是FDA批准的耐受性良好的药物，它可能是有效治疗HD和其他与年龄相关的神经退行性疾病的良好候选药物。

补充材料

01

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致谢

我们感谢Laragen Inc.为基因分型服务提供的技术支持，感谢Pamela Talalay博士为我们提供的专业编辑协助。该研究得到了NS NINDS 055942（至WD）、NS NINDS 16375和NS38144（至CAR）的支持。

脚注

出版商免责声明：这是一份未经编辑的手稿的PDF文件，已被接受出版。作为对客户的服务，我们正在提供这份早期版本的手稿。手稿在以最终可引用的形式出版之前，将经过编辑、排版和校对结果证明。请注意，在制作过程中可能会发现可能影响内容的错误，适用于该期刊的所有法律免责声明均适用。

工具书类

  • Aiken CT、Tobin AJ、Schweitzer ES。治疗亨廷顿病药物的细胞筛选。神经生物学疾病。2004;16(3):546–555.[公共医学][谷歌学者]
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