Expression analysis of G Protein-Coupled Receptors in mouse macrophages

Jane E Lattin; Kate Schroder; Andrew I Su; John R Walker; Jie Zhang; Tim Wiltshire; Kaoru Saijo; Christopher K Glass; David A Hume; Stuart Kellie; Matthew J Sweet

doi:10.1186/1745-7580-4-5

免疫学研究。2008; 4: 5.

2008年4月29日在线发布。数字对象标识：10.1186/1745-7580-4-5

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PMID：18442421

小鼠巨噬细胞G蛋白偶联受体的表达分析

简·E·拉廷,¹ 凯特·施罗德,¹ 安德鲁·苏一世,² 约翰·沃克,² 张杰（音译）,² 蒂姆·威尔特郡,² Kaoru Saijo公司,^三克里斯托弗·K·格拉斯,^三大卫·A·休谟,⁴ 斯图亚特·凯利,^1,⁵和马修·J·斯威特^1,⁵

简·E·拉廷

¹昆士兰大学分子生物科学研究所慢性炎症疾病合作研究中心和功能与应用基因组学特别研究中心，布里斯班，昆士兰，4072

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凯特·施罗德

¹慢性炎症疾病合作研究中心和功能和应用基因组学特别研究中心、分子生物科学研究所、昆士兰大学分子生物科学所、昆士兰州布里斯班4072，澳大利亚

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安德鲁·苏一世

²诺华研究基金会基因组研究所，美国加利福尼亚州圣地亚哥92121

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约翰·沃克

²诺华研究基金会基因组研究所，美国加利福尼亚州圣地亚哥，邮编92121

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张杰（音译）

²诺华研究基金会基因组研究所，美国加利福尼亚州圣地亚哥，邮编92121

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蒂姆·威尔特郡

²诺华研究基金会基因组研究所，美国加利福尼亚州圣地亚哥，邮编92121

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Kaoru Saijo公司

^三美国加州大学圣地亚哥分校细胞和分子医学系，邮编：92093-0651

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克里斯托弗·K·格拉斯

^三美国加州大学圣地亚哥分校细胞和分子医学系，邮编：92093-0651

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大卫·A·休谟

⁴英国苏格兰罗斯林EH25 9PS爱丁堡大学罗斯林学院

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斯图亚特·凯利

¹慢性炎症疾病合作研究中心和功能和应用基因组学特别研究中心、分子生物科学研究所、昆士兰大学分子生物科学所、昆士兰州布里斯班4072，澳大利亚

⁵澳大利亚昆士兰大学分子与微生物科学学院，昆士兰布里斯班，4072

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马修·J·斯威特

¹慢性炎症疾病合作研究中心和功能和应用基因组学特别研究中心、分子生物科学研究所、昆士兰大学分子生物科学所、昆士兰州布里斯班4072，澳大利亚

⁵澳大利亚昆士兰大学分子与微生物科学学院，昆士兰布里斯班，4072

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关联数据

补充资料: 小鼠巨噬细胞中的额外文件1 GPCR表达。该表列出了小鼠巨噬细胞中表达的所有GPCR。
1745-7580-4-5-S1.doc号文件（99K）
GUID:4C9C2EFD-5FC9-4C09-90B4-D1233ACCC2E7
附加文件2巨噬细胞限制的GPCR。所提供的数据表明巨噬细胞限制性表达第2页12,第5版和Gpr18号机组mRNA。微阵列分析第2页12（A），第5版（B）和Gpr18号机组（C） mRNA在91种小鼠细胞类型和组织中的表达。数据点显示标准化值，类似的单元格类型根据条形图颜色分组；蓝色表示初级巨噬细胞类型，紫色表示骨相关细胞类型，红色表示其他免疫细胞类型，绿色表示干细胞数量，橙色表示整个组织样本，黄色表示神经元和视网膜细胞类型，粉红色表示细胞系。其他文件三给出了91种细胞类型和组织轮廓的详细信息。
1745-7580-4-5-S2.eps公司（140万）
GUID:C5BA6C9D-8008-42AC-8384-CA021F54F2BD
附加文件3单元面板示例类型（图例键用于图形图11和和22和其他文件1). 该表提供了微阵列分析中所分析的细胞系和组织的完整列表。
1745-7580-4-5-S3.doc号文件（152K）
GUID:01C7415D-F4CC-4D20-B51A-40897783D5A4

摘要

背景

单核细胞和巨噬细胞表达广泛的G蛋白偶联受体（GPCR），调节炎症和免疫。在本研究中，我们对原代小鼠巨噬细胞中GPCR的表达进行了系统的微阵列分析，以确定与其他细胞类型相比，巨噬细胞中富含GPCR的家族成员，或受炎症刺激物细菌产物脂多糖（LPS）调节的家族成员。

结果

P2RY家族的几个成员在巨噬细胞中有显著的表达模式；第2页第6页mRNA基本上以巨噬细胞特异的方式表达，而第2页第1页和第2页第5页LPS强烈下调mRNA水平。其他几种GPCR的表达要么局限于巨噬细胞（例如。Gpr84型)或巨噬细胞和神经组织（例如。第2页12,Gpr85型). 骨髓源性巨噬细胞和巯基乙酸合法的腹腔巨噬细胞表达的GPCR序列有一些共同点，但也有一些GPCR优先由任一细胞群表达。

结论

本研究中确定的几个GPCR在巨噬细胞中的组成性或调节性表达以前没有描述过。未来对这类GPCR及其激动剂的研究可能会为巨噬细胞生物学以及新的炎症途径提供重要见解，这些途径可能是未来药物发现的目标。

背景

巨噬细胞是急慢性炎症的关键细胞介质。它们可以根据形态、功能（例如颗粒的非特异性吸收）和特定细胞表面标记物的表达（例如F4/80抗体检测到的EMR1）来定义。EMR1属于GPCR超级家族[1]很明显，巨噬细胞表达了其他GPCR的不同功能[2]. 大量的GPCR尚未被脱氧，因此，该家族在基因功能的发现和药物开发方面都有很大的潜力。在这项研究中，我们对原代小鼠巨噬细胞中GPCR的表达进行了系统的微阵列分析，并确定了与其他细胞类型相比在巨噬细胞中富集的家族成员，或受促炎刺激细菌LPS调节的家族成员。其中一些GPCR可能为炎症性疾病环境中的药物发现提供未来目标。

结果

小鼠巨噬细胞的组成性GPCR表达

通过对小鼠和人类组织的微阵列表达谱分析，可以对组织特异性基因表达进行详细分析[三]. 在本研究中，我们通过查询91种小鼠细胞类型和组织的更详细的微阵列数据集，分析了巨噬细胞中GPCR的组成和调节表达[三,4]. 该数据可通过NCBIs基因表达总览获取([5]登录号GSE10246），也可用于探测大量其他细胞类型的基因表达谱。

细胞和组织小组包括两种最常用的初级小鼠巨噬细胞模型；骨髓源性巨噬细胞（BMM）和巯基乙酸合法化腹腔巨噬细胞（TEPM），以及小胶质细胞（大脑中的常驻组织巨噬细胞群）和广泛使用的类巨噬细胞细胞系RAW264。我们分析了国际基础和临床药理学联合会定义的所有GPCR的表达模式[6,7]. 然后，我们将BMM和TEPM的GPCR表达谱与剩余的细胞类型进行了比较，并在此过程中，确定了67个GPCR，这些GPCR在这些主要巨噬细胞群中以组成性或LPS诱导的方式可检测到表达[见其他文件1].

为了确定BMM和/或TEPM高度表达的GPCR，我们设置了一个任意的截止值，其中BMM或TEPM中的正常表达至少是所有细胞类型中正常表达的中位数的10倍。使用这种非常严格的过滤方法，我们确定了33个在BMM和/或TEPM中富集的GPCR，与正常化表达的中位数相比（表（表11和和2）。2). 当然，这并不意味着这些基因只由巨噬细胞表达。例如，Gpr85型在几个巨噬细胞群中高度表达，并被LPS进一步上调，但也在大脑的几个区域表达（图（图1a）。1a个). 然而，这组中包括GPCR，如Emr1号机组(80层/四层),C3aR公司,C5aR型,Ccrl2号机组和抄送2已知是巨噬细胞特异性的或由巨噬细胞高度表达的[8-12]从而验证了我们的方法。该列表中还包括一些GPCR（例如。第5版,第2页和6)以前没有报道过具有巨噬细胞限制表达模式（表（表2）。2). 如图所示图1b，1亿,第2页第6页表达明显局限于巨噬细胞和与巨噬细胞密切相关的两种细胞类型（破骨细胞和树突状细胞），而许多其他P2Y家族受体也在该谱系中高度表达（表（表2）。2). 与此结论一致，我们最近观察到巨噬细胞限制性表达模式第2页第6页mRNA在七种不同细胞群中的分析更为有限[2].Gpr84型表达也主要局限于巨噬细胞和粒细胞（图（图1c1c个).

表1

巨噬细胞表达的GPCR综述。

高度表达
骨密度	TEPM公司

22 10只富含BMM	23 11只在TEPM中富集
BMM和TEPM中均规定了12个

LPS法规

诱导

BMM公司	TEPM公司
27 14只在BMM中规定	16 3仅在TEPM中规定
13在BMM和TEPM中都有规定

压制

BMM公司	TEPM公司
19 9只在BMM中进行调节	18 8只在TEPM中规定
BMM和TEPM中均规定10

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通过微阵列分析评估巨噬细胞中高表达或调节的GPCR摘要。

表2

富含巨噬细胞的GPCR。

			相对规范化表达式

受体类别	加入号码	基因名称	BMM公司	TEPM公司	原始264.7
富含BMM和TEPM

A类
	NM_009779	C3ar1型	1361.1	683.6	58.3
	NM_007577	C5r1级	822.6	25.6	10.5
	NM_183168	第2页第6页	434	94	196.4
	NM_009917号	抄送5	214.2	20.5	0.6
	NM_021476	气缸1	208.9	12.5	40.6
	NM_004230号	第5版	30.2	69.3	6.6
	NM_008967号	Ptgir公司	24.7	72.1	1.7
	NM_009924号	序号2	14.2	27.2	6.7
	NM_009912号	抄送1	14.1	235.1	16.3
	NM_145700	Ccrl1号机组	11.1	26.6	12.7
	NM_008964号	Ptger2型	10.7	34.4	0.8
B类
	NM_010130号	Emr1号机组	190	22.2	28.3

富含BMM

A类
	NM_183031号	Ebi2型	113.5	6.1	245.2
	NM_009915号	抄送2	92.1	1.2	1.3
	NM_030720号	Gpr84型	77.5	0.6	2.7
	NM_008042号	第一季度	32	1	0.8
	NM_008152	Gpr65型	29.3	9	6.6
	NM_009910号	Cxcr3号机组	26.3	1.1	7.6
	NM_007420号	广告2	22.1	1.3	9.3
	NM_145066号	Gpr85型	13.7	1.7	7.6
	NM_009987	Cx3cr1型	11.3	0.7	61.4
B类
	NM_018782号	计算	45.6	1.1	6.1

富含TEPM

A类	NM_009911	Cxcr4号机组	4.3	178.9	0.6
	NM_017466号	Ccrl2号机组	3.1	154.9	1.1
	NM_021381	Prokr1项目	1	36.6	0.7
	NM_022320号	Gpr35型	2.5	22	0.4
	NM_008311	Htr2b型	1.1	19.9	0.5
	NM_008773号	第2页	8.5	19.2	1.5
	NM_133200	第2页14	4	18.4	0.4
	NM_175493号	Gpr68型	0.9	17.9	9.3
	NM_008772	第2页第1页	4.4	10.6	0.6
B类
	NM_011925	镉97	0.4	22.9	0.2
C类
	NM_022420	Gprc5b公司	0.6	60.6	0.6

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微阵列分析用于鉴定在原代小鼠巨噬细胞（BMM和TEPM）中高度富集的GPCR。被鉴定为BMM或TEPM中高度富集的GPCR被定义为GPCR，其归一化值至少是所有细胞类型中位数表达的10倍，且存在显著差异（p值<0.05，Student双尾t检验）。如前所述，GPCR根据其类别类型根据序列相似性进行分组[65-67]。

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图1

巨噬细胞限制性GPCR.微阵列分析Gpr85型（A），第2页第6页（B）和Gpr84型（C） mRNA在91种小鼠细胞类型和组织中的表达。数据点显示标准化值，类似的单元格类型根据条形图颜色分组；蓝色表示初级巨噬细胞类型，紫色表示骨相关细胞类型，红色表示其他免疫细胞类型，绿色表示干细胞数量，橙色表示整个组织样本，黄色表示神经元和视网膜细胞类型，粉红色表示细胞系。其他文件三给出了91种细胞类型和组织轮廓的详细信息。

不同巨噬细胞群中GPCR的差异表达

我们还搜索了在非炎性巨噬细胞（BMM）和炎性巨噬细胞中具有不同表达模式的GPCR。BMM高表达但TEPM不表达的GPCR包括埃比2,计算,抄送2和5,Cxcr3号机组,Cx3cr1型和Gpr84型虽然TEPM表达了更高水平的Cxcr4号机组,Gpr35型,第2页第1页,抄送1,镉97,Ccrl2号机组和Gprc5b公司（表（表2）。2). 例如，图图2a2a个和和2b2亿演示选择性表达计算和Gprc5b公司分别在BMM和TEPM中。当然，不同的表达模式可以反映细胞的不同生长状态；BMM是循环细胞，而TEPM是增殖后细胞。事实上，其中许多基因在BMM和RAW264细胞中显示出类似的表达谱，这两种细胞都是在增殖巨噬细胞群。尽管如此，BMM与TEPM以及BMM与RAW264中也有GPCR具有不同的表达水平。因此，BMM和TEPM中这些基因的差异表达不太可能反映细胞的增殖状态。这些示例包括抄送2,Gpr84型和第一季度与TEPM和RAW264相比，它们选择性地富集在BMM中，而Gpr68型在TEPM和RAW264中富集，但在BMM中不富集。这种GPCR可能在巨噬细胞分化、募集或激活中具有不同的功能。除了我们对富含巨噬细胞的GPCR进行分析外，我们还确定了几个GPCR（例如。Gpr65型,抄送1,Ccrl1号机组,Cnr2型和第2页14)在多个白细胞群体中高度表达。如图所示图2c2厘米显示了第2页14.

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图2

BMM和TEPM中不同调节的GPCR.微阵列分析计算（A），Gprc5b公司（B）和第2页14（C） mRNA在91种小鼠细胞类型和组织中的表达。数据点显示标准化值，类似的单元格类型根据条形图颜色分组；蓝色表示初级巨噬细胞类型，紫色表示骨相关细胞类型，红色表示其他免疫细胞类型，绿色表示干细胞数量，橙色表示整个组织样本，黄色表示神经元和视网膜细胞类型，粉红色表示细胞系。其他文件三给出了91种细胞类型和组织轮廓的详细信息。

LPS调节小鼠巨噬细胞GPCR表达

LPS是一种原型巨噬细胞激活刺激物，通过toll-like receptor（TLR）4发出信号，调节巨噬细胞中几个GPCR的表达（表（表3三和和4）。4). 虽然已知LPS可以调节其中许多基因的表达（例如。Gpr109b号/PUMA-G公司,第一季度,Ccrl2号机组和内皮素受体) ([12-16]，甜蜜等，未发表的数据），其他基因的调控表达尚未得到广泛研究。这些示例包括Fzd1型,Htr2b型,Gpr84型（由LPS诱导，表表3），三)、和第2页第1页和5（LPS抑制，表表4）。4). 我们最近验证了LPS介导的对第2页第5页实时PCR检测BMM中mRNA的表达[2]. 图图3三重点介绍了调节GPCR表达的两个例子：Gpr84型在BMM中LPS（6小时）诱导10倍，在TEPM中LPS诱导48倍（图（图3a），3a年)，同时第2页第1页在BMM中LPS（6小时）抑制了7倍，在TEPM中LPS抑制了18倍（图（图3b3亿).

表3

巨噬细胞中LPS诱导的GPCR。

			相对规范化表达式

受体类别	加入号码	基因名称	BMM公司			TEPM公司

			2小时	6小时	24小时	1小时	7小时
LPS对BMM和TEPM的诱导作用

A类
	NM_009630号	阿多拉2a	1.2	28.2	3.3	4.2	52.2
	NM_007413号	阿多拉2b	27.4	190.9	17.4	3	3.3
	NM_007719号	抄送7	1	5.1	1.9	0.4	2.9
	NM_017466号	Ccrl2号机组	39.2	65.7	46.7	13.8	9.2
	NM_010336号	第2版	7.3	5.7	0.3	1	10
	NM_007904号	内皮素受体	6.7	2	10.3	0.7	5.3
	纳米_013521	第一季度	5.9	120.9	23.3	1	21.4
	NM_008042号	第一季度	3.8	41.6	28.6	3.1	570.6
	NM_030701号	Gpr109b号	13.6	48.2	5.6	10.8	212
	NM_030720号	Gpr84型	8.7	10.3	0.2	7.8	47.5
	NM_145066号	Gpr85型	3.6	5.6	0.5	18.1	4.9
B类
	NM_018782号	计算	1	2.6	0.2	0.6	6.9
卷曲的
	NM_021457	Fzd1型	8	17	1	1	2.2

骨髓中脂多糖诱导

A类
	NM_009912号	抄送1	0.9	3.1	7.4	0.8	0.7
	NM_009911	Cxcr4号机组	0.3	0.1	7.2	0.7	0.1
	NM_004230号	第5版	0.2	0.5	2	0.4	0.6
	纳米128206	Gpr18号机组	17.8	52.2	10.8	1	1.6
	NM_175493号	Gpr68型	3.3	1.7	40.2	1.5	0.8
	NM_013533号	Gpr162型	1.1	0.5	6.7	0.8	0.8
	NM_008311	Htr2b型	0.6	0.5	15.8	0.6	0.3
	NM_008519	低4r1	0.8	0.8	7.5	0.9	0.7
	NM_008773号	第2页	3.7	7.5	3.7	1.9	1.1
	NM_021381	Prokr1项目	0.8	37.4	7.2	0.3	0.1
	NM_008964号	Ptger2型	2.4	1.3	11.7	0.3	0.1
	纳米_008967	Ptgir公司	1.1	2.3	7.4	0.7	0.6
B类
	39138纳米	电子邮件4	1.1	2	1	1	0.9
	NM_001081298	Lphn2号机组	2.2	1.4	1.2	0.3	0.3

TEPM中LPS诱导

A类
	NM_007577	C5r1级	1.1	0.7	0.1	3	1.1
	NM_007722号	抄送7	0.5	0.5	0.5	1	4
	NM_133200	第2页14	0.7	1.7	1.4	0.8	6.7

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采用微阵列分析评估LPS处理后原代小鼠巨噬细胞（BMM和TEPM）中GPCR的基因表达谱。LPS在原代小鼠巨噬细胞中调节的GPCR被定义为在BMM的2、6或24小时LPS和/或TEPM的1或7小时LPS时上调2倍或更多的GPCR（与对照组相比，p值<0.05，Student双尾t检验）。所示值描述了相对于未处理对照（0小时）的基因表达。如前所述，GPCR根据其类别类型根据序列相似性进行分组[65-67]。

表4

巨噬细胞中LPS抑制GPCR。

			相对规范化表达式

受体类别	加入号码	基因名称	BMM公司			TEPM公司

			2小时	6小时	24小时	1小时	7小时
BMM和TEPM中LPS抑制

A类
	纳米_009924	序号2	0.2	0.1	0.3	0.3	0.1
	NM_009911	Cxcr4号机组	0.3	0.1	7.1	0.7	0.1
	NM_183031号	埃比2	0.2	0.1	0.1	0.4	0.2
	NM_004230号	第5版	0.2	0.5	2	0.4	0.6
	NM_022320号	Gpr35型	0.2	0.4	1.6	0.6	0.1
	NM_030258号	Gpr146型	0.1	0.4	1	0.4	0.1
	NM_008772	第2页第1页	0.3	0.1	0.2	0.3	0.1
	NM_175116	第2页第5页	0.1	0.1	0.7	0.3	0.1
	NM_013641	第1页	0.7	0.5	0.3	0.7	0.3
	NM_008965号	第4页	3.1	0.5	1	1.9	0.3

BMM中LPS抑制

A类
	NM_007420号	广告2	0.3	0.1	0.1	1.9	0.8
	NM_009779	C3ar1型	0.7	0.5	0.3	0.8	0.6
	NM_007577	C5r1级	1.1	0.7	0.1	3	1.1
	NM_009915号	抄送2	0.5	0.4	0.2	0.8	0.9
	NM_009910号	Cxcr3号机组	0.7	0.1	0.1	1.6	0.9
	NM_009987	Cx3cr1型	0.5	0.1	0.1	1	0.7
	NM_030720号	Gpr84型	8.3	10	0.2	7.7	50
	NM_027571	第2页12	0.5	0.1	0.2	1	1
B类
	NM_018782号	计算	1	2.6	0.2	0.6	7.1

TEPM中LPS压制

A类
	NM_007719号	抄送7	1	5	1.9	0.4	2.9
	NM_021381	Prokr1项目	0.8	33.3	7.1	0.3	0.1
	NM_198168	第2r5b页	1	1.3	1.1	0.8	0.5
	NM_008964号	Ptger2型	2.4	1.3	11.1	0.3	0.1
B类
	NM_080437号	塞尔斯3	0.8	1.2	2.3	0.2	0.2
	NM_173036号	Gpr97型	0.8	1	0.8	0.5	0.2
	NM_016894号	坡道1	1	1	1	0.5	0.2
C类
	NM_022420	Gprc5b公司	1	1	1.3	0.8	0.1

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采用微阵列分析评估LPS处理后原代小鼠巨噬细胞（BMM和TEPM）中GPCR的基因表达谱。LPS在原代小鼠巨噬细胞中调节的GPCR被定义为在BMM的2、6或24小时LPS和/或TEPM的1或7小时LPS时下调2倍或更多的GPCR（与对照组相比，p值<0.05，Student双尾t检验）。所示的值描述了相对于未处理的对照（0小时）的基因表达。如前所述，GPCR根据其类别类型根据序列相似性进行分组[65-67]。

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图3

巨噬细胞中LPS调节的GPCR微阵列表达分析Gpr84型（A），第2页第1页（B）和Prokr1项目（C） BMM和TEPM中的mRNA分别在0、2、6和24小时以及0、1和7小时的时间过程中表达。数据点显示每个细胞群（0小时）相对于未经处理的对照组的基因表达。

在BMM（2、6和24小时）和TEPM（1和7小时）中研究的LPS时间进程不相同，因此很难就LPS在这两个细胞群中的非服务性调节做出明确结论。尽管如此，我们确实发现了在相似时间点BMM或TEPM中似乎受LPS差异调节的基因。Gpr18号机组,第2页,第2页12和广告2在BMM中都受到LPS的强烈调节，但TEPM没有（表（表3，三,,4),4)，同时LPS受到监管Gprc5b公司以TEPM表示，但不以BMM表示（表（表4）。4). LPS在这两种细胞群中的作用甚至可能相反；Prokr1项目LPS在BMM（6小时）中诱导37倍，但在TEPM（7小时）中抑制20倍（图（图3c）。3立方厘米). 这些差异中的一些也可以用细胞的增殖状态来解释；LPS触发BMM的生长停滞，因此BMM特有的一些LPS调节基因可能反映了这一现象。然而，并非所有基因都是如此（例如。第2页14和Prokr1项目)因此，认为BMM和TEPM中可能存在LPS信号通路的细微差异。

讨论

了解了GPCR（a）由单核吞噬细胞系统高度表达，（b）由某些巨噬细胞群体选择性表达，或（c）由促炎刺激LPS调节，可以对特定GPCR在巨噬细胞生物学中的作用作出一些推断。我们分析中最明显的发现之一是，许多检测嘌呤和嘧啶核苷酸的P2Y嘌呤能受体在巨噬细胞中以限制和/或调节的方式表达。机械应激、细胞损伤、炎症刺激（如LPS）、肥大细胞脱颗粒和缺氧均可增加细胞外ATP和UTP浓度[17-20]. 因此，这些受体很可能影响巨噬细胞介导的炎症反应。

在P2Y家族中，其表达模式最引人注目的可能是第2页第6页基本上仅限于髓系细胞。第2页第6页与所有其他类型的细胞相比，BMM、TEPM、RAW264细胞、小胶质细胞、破骨细胞和树突状细胞中的mRNA水平显著升高（图（图1b）。1亿).第2页第6页破骨细胞是与巨噬细胞密切相关的谱系，其表达已被其他人证实[21]. 虽然之前没有研究表明第2页第6页表达仅限于单核细胞/巨噬细胞谱系，有证据表明该受体确实调节巨噬细胞的功能。UDP，据报道是一种选择性P2RY6激动剂[22,23]，触发人类单核细胞样细胞系THP-1释放白细胞介素（IL）-8[24]. 相反，P2RY6受体拮抗剂蒽醌磺酸衍生物活性蓝2和苏拉明抑制LPS诱导的THP-1细胞产生IL-8[24]. 在小胶质细胞中，第2页第6页mRNA表达上调以应对神经元损伤，UDP促进小胶质细胞的吞噬作用，从而暗示P2RY6在清除受损或死亡神经元细胞中的作用[23]. 我们观察到该受体在单核吞噬细胞系统中广泛表达，这表明该受体可能在感知和吞噬全身受损细胞以及促进对LPS和/或UDP的促炎反应方面具有更广泛的功能。

该实验室此前报告称第2季度5LPS显著抑制人和小鼠巨噬细胞mRNA表达[2]，这一发现得到了这里提供的微阵列数据的支持。根据序列一致性及其结合核苷酸ATP和ADP的能力，该受体最初被归类为P2Y受体家族的成员[25]. 然而，核苷酸未能启动来自该受体的下游信号[26]因此，P2RY5可能作为其他P2Y受体的拮抗剂，限制巨噬细胞对胞外核苷酸的反应。P2RY5对LPS等巨噬细胞激活刺激物的下调可能会消除这种抑制作用，从而使活化的巨噬细胞对核苷酸产生反应。或者，P2RY5作为P2受体的初始分配可能不正确。跨基因系统发育分析表明，它与一组异质受体聚集在一起，包括蛋白酶激活受体、溶血磷脂酰胆碱（LPA）和鞘氨醇磷酰胆碱（S1P）受体，而不是与其他P2Y受体[27]. 在这种情况下，LPS介导的巨噬细胞激活可能会使细胞对该受体的真正配体无反应。

新的证据也表明巨噬细胞介导的炎症反应中存在其他P2Y受体。例如，P2RY2激动剂胞外ATP诱导人单核细胞源性巨噬细胞IL-6转录[28]人类中性粒细胞的趋化性[29]而P2RY1激动剂2-甲硫基ATP增加小鼠脾细胞分泌IL-6[30]. 为了支持P2Y ATP受体在巨噬细胞功能中的作用，并且与我们的数据一致，第2页第1页和第2页mRNA在巨噬细胞和LPS刺激的单核细胞中高水平表达[31]. 除了这些P2Y家族成员外，还报道了P2RY12在大鼠大脑的小胶质细胞中选择性表达[32]. 我们的分析还表明，该受体在小胶质细胞、骨髓基质细胞、浆细胞样树突状细胞、破骨细胞以及各种淋巴组织和神经组织中高度富集[参见附加文件2a个]. 最后，P2Y样受体P2ry14（Gpr105）是UDP结合糖的受体，它介导骨髓造血干细胞的趋化性[33]. 尽管新出现的文献表明P2Y受体在巨噬细胞介导的迁移和炎症反应中发挥作用，但对这些受体的选择性激动剂及其相互作用和非P2Y受体缺乏明确的了解。尽管如此，我们对巨噬细胞中该家族的限制和调节表达的证明表明，它们有希望进行进一步分析。

其他具有相对受限的表达模式并被巨噬细胞强烈表达的GPCR包括第5版,Gpr85型和Gpr84型（表（表2，2，图图1a1a个和和1c，1c个，其他文件2亿).第5版是GPCR中识别LPA和S1P的内皮分化基因（EDG）家族的八个成员之一[34]. 一些研究已经证明EDG5配体S1P对巨噬细胞的有效作用。大鼠肺泡巨噬细胞对S1P的反应是产生O₂^-与LPS或甲酰-甲酰-甲基-亮氨酸-苯丙氨酸诱导的水平相当[35]. 毫不奇怪，鉴于这一发现，S1P的抗菌作用已被报道。感染人单核细胞源性巨噬细胞或THP-1细胞M.污点或结核分枝杆菌，S1P以剂量依赖性方式降低细胞内细菌负荷。S1P对感染M.污点或结核分枝杆菌[36]. 除了激活抗微生物反应外，S1P还在随后暴露于凋亡诱导信号时向小鼠和人类巨噬细胞系提供生存信号[37]. EDG1与该反应有关，但鉴于编辑5据报道，该受体也可能参与巨噬细胞对S1P的反应。

SREB（脑内表达的超保守受体）家族成员的表达Gpr85型(Sreb2公司)仅限于巨噬细胞和神经元组织（图（图1a）。1a个). 在表达Gpr85型在中枢神经系统中[38-40]，尚未确定功能。受体的共同调控表达，如Gpr85型在神经组织和白细胞群中，可能为一些研究中观察到的神经-免疫相互作用提供了一种机制[41,42].

Gpr84型是一种孤立的GPCR，在非刺激状态下明显局限于BMM和小胶质细胞（表（表2，2，图图1c）1c个)并且在BMM和TEPM中都被LPS强烈上调（图（图3a，3a年，表表3）。三). 这种上调与升高Gpr84型内毒素休克模型中小胶质细胞和组织巨噬细胞的表达[43]. 小胶质细胞也表达高水平的Gpr84型多发性硬化的实验性自身免疫性脑脊髓炎模型[43]. 这些数据表明GPR84在神经炎症中起作用，但如果不了解配体，很难预测其确切功能。尽管如此，鉴于Gpr84型mRNA，针对该受体的抗体可能为追踪巨噬细胞数量提供有用的工具体内.

与相同Gpr84型，其他几种GPCR的mRNA，尤其是趋化因子受体，在不同的未刺激巨噬细胞群之间有差异表达。TEPM表达mRNA水平升高Cxcr4号机组,抄送1,Ccrl2号机组而BMM表达了较高水平的抄送2,Cx3cr1型和Cxcr3号机组fractalkine受体CX3CR1已被确定为巡视内皮表面的单核细胞的标记[44]它对已经转移到炎症部位的巨噬细胞的下调也就不足为奇了。相反，CXCR4在靶向远离循环的白细胞及其祖细胞方面具有特征性功能[45]与其在TEPM中的增强表达一致。除了趋化因子受体外，BMM和TEPM之间许多其他GPCR的表达也不同。例如，凝血酶相关受体，Ebi2型[46]在BMM中强烈表达，但在TEPM中不表达，而Gprc5b公司在TEPM中富集，但在BMM中不富集。这种差异可能导致组织巨噬细胞和炎性巨噬细胞群之间的功能差异。

巨噬细胞在非刺激状态（如上所述）下高度表达的许多GPCR也受到LPS的调节。其他几个GPCR在未刺激的巨噬细胞中弱表达，但受到LPS的强烈调节。一个这样的例子是焦头烂额的家庭成员，Fzd1型Frizzleds（Fzd）代表一个被称为无翼相关蛋白（WNTs）的分泌糖蛋白家族的细胞膜受体。Wnts在发育过程中发挥重要作用，包括细胞命运决定、粘附、极性、迁移和增殖[47-50]. WNT家族也参与了免疫调节。例如，WNT家族成员WNTD在果蝇属[51]. 在人类巨噬细胞中，TLR配体上调了WNT5A的表达，并与结核分枝杆菌和鸟型结核杆菌WNT5A/Frizzled-5（FZD5）途径促进外周血单个核细胞产生IL-12[52]. 惊人的上调Fzd1型BMM（6小时LPS时为17倍）表明FZD家族成员在调节巨噬细胞炎症反应方面具有相似的功能。

我们还发现了BMM和TEPM中LPS差异调节的几个GPCR。在BMM中，Prokr1项目短暂由LPS诱导（6小时时为37倍），但在TEPM中被抑制（7小时时为20倍）。PROKR1是促动素1（PK1）的受体，PK1是一种调节单核细胞分化以及巨噬细胞活化和迁移的肽。PK1触发小鼠和人类骨髓祖细胞向单核/巨噬细胞系分化[53]，并通过扩增IL-12和肿瘤坏死因子-α（TNF）的产生，但抑制IL-10的释放，重新编程人类单核细胞对LPS的反应[53]. 差动调节Prokr1项目BMM和TEPM中的LPS表明，该受体在组织激活和炎症巨噬细胞群激活期间具有不同的功能。

Gpr18号机组LPS暴露6h后，BMM中诱导52倍，而TEPM中保持不变。该受体也在其他免疫细胞群中高表达，包括B细胞、T细胞和DC细胞[参见附加文件2厘米]. N-花生四烯基甘氨酸（NAGly）是花生四烯酸和甘氨酸的共轭物，是GPR18的内源性配体[54]据报道可以抑制炎症疼痛并具有镇痛作用[55,56]. 鉴于Gpr18号机组LPS在BMM中的表达，NAGly也可能调节巨噬细胞功能。腺苷受体，阿多拉2b在BMM中也被LPS强烈诱导（6小时时为191倍），但在TEPM中仅受到适度调节（7小时时为3倍）。腺苷介导的该受体的激活增强了RAW264细胞对LPS的反应中IL-10的产生[57]. 相反，腺苷可减弱LPS诱导的促炎细胞因子TNF的生成[58-61]和IL-12[60,62]在小鼠和人类巨噬细胞中。可诱导的阿多拉2b因此，这种表达可能有助于巨噬细胞炎症反应的反馈调节。

结论

在本研究中，我们记录了几种GPCR，它们在小鼠原代巨噬细胞（BMM，TEPM）中可检测到表达，在BMM和TEPM中富集，或在活化的巨噬细胞（LPS刺激的BMM和/或TEPM）调节。对于其中一些基因，巨噬细胞中的组成性或调节性表达以前没有描述过。未来对此类GPCR及其激动剂的研究可能会为巨噬细胞生物学以及新的炎症途径提供重要的见解，这些途径可能是未来药物发现的目标。

方法

细胞培养和试剂

所有细胞系和组织均来源于8-10周龄雄性C57Bl/6小鼠，但雌性特异性器官除外，其来源于雌性小鼠。所有程序均按照当地动物研究指南进行。对于雌性组织，材料来自三只雌性，每只雌性平均获得四个胚胎，产生四条脐带和胎盘。对于其他组织，材料来自三只雄性的水池。生物复制被定义为来自独立小鼠池的独立RNA制剂。技术复制被定义为来自相同RNA样品的独立扩增。附加文件中提供了完整的细胞系和组织轮廓列表，以及生物复制与技术复制的详细信息三（数字键图1，1,,22和其他文件2).

将成年C57Bl/6小鼠股骨的骨髓细胞在完整培养基（含有10%FCS、20 U/ml青霉素、20μg/ml链霉素和2 mM L-谷氨酰胺（Invitrogen）的RPMI）中培养7天，在10 000 U/ml CSF-1（加利福尼亚州埃默里维尔Chiron的礼物）的存在下，制备小鼠BMM。第7天，BMM接受10 ng/mL的治疗明尼苏达沙门菌LPS（Re595突变体，Sigma）持续2、6或24小时，并提取RNA。为了产生TEPM，在腹腔注射3%巯基乙酸肉汤（Difco）3天后，从C57Bl/6小鼠的腹腔采集细胞。然后将细胞置于组织培养塑料上2 h，然后用PBS洗涤去除非粘附细胞。然后用LPS处理粘附的TEPM 1或7 h，或不处理，并提取RNA。小胶质细胞由混合皮质细胞培养产生。培养10天后，在12 mM利多卡因（Sigma）存在下，在眼眶摇床上摇晃（180 rpm，20 min，37°C），从星形胶质细胞中分离出小胶质细胞。

RNA和cDNA制备

使用RNeasy试剂盒（Qiagen）或标准Trizol方案从哺乳动物细胞或组织中提取RNA。如果解剖时每只小鼠的组织量超过50毫克，则在冷冻时将组织粉碎。为每只小鼠分别制备RNA，以鉴定具有潜在降解RNA的样品。用Qiagen RNeasy柱纯化三唑提取的RNA。对于BMM，在使用DNaseI（Qiagen）进行RNeasy清理的过程中，去除了污染基因组DNA的成骨细胞和破骨细胞。RNA的完整性和浓度通过生物分析仪（安捷伦科技公司）上的微流体分析或生物辐射实验（BioRad）上的分析确定。聚集发生在RNA水平。对于合并后总RNA含量超过2μg的样品，使用2μg总RNA进行标准Affymetrix单次扩增。对于总RNA含量低于2μg，在标准Affmetrix双扩增协议中使用100 ng总RNA（或50 ng胸腺细胞SP CD8+）。特定组织的RNA起始数量包含在附加文件中三.

微阵列分析

标准Affymetrix协议用于处理Affymmetrix MOE430_2微阵列。使用gcRMA将所有CEL文件图像作为单个组进行处理[63,64]之后，使用每基因归一化到中位数（用于组织特异性分析）或每基因归一化到未处理的对照样品（用于LPS对BMM和TEPM基因调节的分析）来重新缩放每个基因的数据。所述微阵列数据已保存在NCBIs基因表达总览中[5]并可通过GEO系列登录号GSE10246访问。被鉴定为BMM或TEPM中高度富集的GPCR被定义为BMM/TEPM中正常表达值比所有细胞类型的中位数表达至少高10倍的转录本，并且BMM/TEAM表达显著偏离该中位数（p值<0.05，学生双尾t检验）。LPS在原代小鼠巨噬细胞中调节的GPCR被定义为与非刺激状态（0 LPS）相比，其正常表达值在时间进程的任何点（BMM中的2、6或24小时LPS和/或TEPM中的1或7小时LPS）上调或下调两倍或更多。根据统计学意义（p值<0.05，学生双尾t检验）筛选LPS调节基因。所有统计测试均使用GeneSpring GX软件进行，并启用了跨基因错误模型功能。

缩写

BMM：骨髓源性巨噬细胞；EDG：内皮分化基因；Fzd：焦躁；GPCR:G蛋白偶联受体；IL：白细胞介素；LPA：溶血磷脂酰胆碱；LPS：脂多糖；NAGly：N-花生四烯酸甘氨酸；P2Y：嘌呤能受体家族Y；PK1：前激动素1；S1P：鞘氨醇磷酰胆碱；SREB：脑内表达的超保守受体；TEPM：巯基乙酸合法腹腔巨噬细胞；TLR：Toll样受体；TNF：肿瘤坏死因子α；Wnt：无翅相关蛋白。

竞争性利益

作者声明，他们没有相互竞争的利益。

作者的贡献

JL对GNF微阵列表达数据进行了筛选和分析，并起草了手稿。KS进行了微阵列表达数据的提取，并参与了研究设计和手稿审查。AS、JZ和JW生成了GNF微阵列表达数据。KS和CG纯化细胞群并生成RNA用于微阵列分析。DH和SK协助审查和编辑手稿。MS参与了研究设计和手稿起草。所有作者阅读并批准了最终手稿。

补充材料

附加文件1：

小鼠巨噬细胞中的GPCR表达。该表列出了小鼠巨噬细胞中表达的所有GPCR。

单击此处获取文件^{（99K，文档）}

附加文件2：

巨噬细胞限制性GPCR。所提供的数据表明巨噬细胞限制性表达第2页12,第5版和Gpr18号机组mRNA。微阵列分析第2页12（A），编辑5（B）和Gpr18号机组（C） mRNA在91种小鼠细胞类型和组织中的表达。数据点显示标准化值，类似的单元格类型根据条形图颜色分组；蓝色表示初级巨噬细胞类型，紫色表示骨相关细胞类型，红色表示其他免疫细胞类型，绿色表示干细胞数量，橙色表示整个组织样本，黄色表示神经元和视网膜细胞类型，粉红色表示细胞系。其他文件三给出了91种细胞类型和组织轮廓的详细信息。

单击此处获取文件^{（1.4M，每股）}

附加文件3：

单元格面板样本类型（图形图例键图11和和22和其他文件1). 该表提供了微阵列分析中所分析的细胞系和组织的完整列表。

单击此处获取文件^{（152K，文档）}

致谢

这项工作得到了NHMRC Dora Lush和昆士兰政府智能州奖学金对JL的支持。这项工作的一部分得到了诺华研究基金会的支持。

工具书类

McKnight AJ、Macfarlane AJ、Dri-P、Turley L、Willis AC、Gordon S.F4/80的分子克隆，F4/80是一种与G蛋白相关跨膜7激素受体家族同源的小鼠巨噬细胞限制性细胞表面糖蛋白。生物化学杂志。1996;271:486–489. doi:10.1074/jbc.271.1.486。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Lattin J、Zidar DA、Schroder K、Kellie S、Hume DA、Sweet MJ。巨噬细胞中G蛋白偶联受体的表达、功能和信号传导。白细胞生物学杂志。2007;82:16–32. doi:10.1189/jlb.0107051。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Su AI、Wiltshire T、Batalov S、Lapp H、Ching KA、Block D、Zhang J、Soden R、Hayakawa M、Kreiman G、Cooke MP、Walker JR、Hogenesch JB。小鼠和人类蛋白质编码转录组的基因图谱。美国国家科学院院刊。2004;101:6062–6067. doi:10.1073/pnas.0400782101。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
诺华研究基金会基因组研究所[网址：http://symatlas.gnf.org/symatlas]
NCBIs基因表达总表[网址：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/]
Foord SM、Bonner TI、Neubig RR、Rosser EM、Pin JP、Davenport AP、Spedding M、Harmar AJ。国际药理学联合会。四十六、。G蛋白偶联受体列表。药理学修订版。2005;57:279–288. doi:10.1124/pr.57.2.5。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
国际基础和临床药理学联合会。国际基础与临床药理学联合会[http://www.iuphar-db.org/GPCR/Receptor家族转发]
Austyn JM，Gordon S.F4/80，一种针对小鼠巨噬细胞的单克隆抗体。欧洲免疫学杂志。1981;11:805–815. doi:10.1002/eji.1830111013。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Hirsch S，Austyn JM，Gordon S.巨噬细胞特异性抗原F4/80在培养的小鼠骨髓细胞分化过程中的表达。《实验医学杂志》。1981;154:713–725. doi:10.1084/jem.154.3.713。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Chenoweth DE、Goodman MG、Weigle WO。小鼠巨噬细胞上人类C5a过敏毒素特异性受体的证明。《实验医学杂志》。1982;156:68–78. doi:10.1084/jem.156.1.68。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Gasque P、Singhrao SK、Neal JW、Wang P、Sayah S、Fontaine M、Morgan BP。补体过敏毒素C3a受体在发炎的人类中枢神经系统中由髓细胞和非髓细胞表达：多发性硬化和细菌性脑膜炎的分析。免疫学杂志。1998;160:3543–3554.[公共医学][谷歌学者]
Shimada T，Matsumoto M，Tatsumi Y，Kanamaru A，Akira S.小鼠巨噬细胞中一种新的脂多糖诱导的C-C趋化因子受体相关基因。FEBS信函。1998;425:490–494. doi:10.1016/S0014-5793（98）00299-3。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Katsuyama M，Ikegami R，Karahashi H，Amano F，Sugimoto Y，Ichikawa A.小鼠巨噬细胞样细胞系J774.1中LPS刺激EP2和EP4前列腺素E受体表达的特征。生物化学与生物物理研究委员会。1998;251:727–731. doi:10.1006/bbrc.1998.9540。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Mandal P、Novotny M、Hamilton TA。脂多糖通过转录和转录后机制诱导巨噬细胞和中性粒细胞中甲酰肽受体1基因的表达。免疫学杂志。2005;175:6085–6091.[公共医学][谷歌学者]
Schaub A，Futterer A，Pfeffer K.PUMA-G，巨噬细胞中一种IFN-γ诱导基因，是七个跨膜受体超家族的新成员。欧洲免疫学杂志。2001;31:3714–3725. doi:10.1002/1521-4141（200112）31:12<3714:：AID-IMMU3714>3.0.CO；2-1.[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Wahl JR、Goetsch NJ、Young HJ、Van Maanen RJ、Johnson JD、Pea AS、Brittingham A.小鼠巨噬细胞在微生物刺激后产生内皮素-1。Exp Biol Med（梅伍德）2005;230:652–658.[公共医学][谷歌学者]
Bergfeld GR，Forrester T.短暂缺氧和高碳酸血症时人体红细胞释放ATP。心血管研究。1992;26:40–47. doi:10.1093/cvr/261.40。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Bodin P，Burnstock G。急性缺氧对培养内皮细胞流动诱导释放ATP的协同作用。体验。1995;51:256–259. doi:10.1007/BF01931108。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Bodin P，Burnstock G。急性炎症期间内皮细胞ATP释放增加。炎症研究。1998;47:351–354. doi:10.1007/s000110050341。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Detwiler TC，Feinman RD。凝血酶诱导血小板释放三磷酸腺苷的动力学。与钙释放进行比较。生物化学。1973;12:2462–2468. doi:10.1021/bi00737a015。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Korcok J、Raimundo LN、Du X、Sims SM、Dixon SJ。P2Y6核苷酸受体激活NF-κB并增加破骨细胞的存活率。生物化学杂志。2005;280:16909–16915. doi:10.1074/jbc。M410764200美元。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Communi D，Parmentier M，Boeynaems JM。人类P2Y6受体的克隆、功能表达和组织分布。生物化学与生物物理研究委员会。1996;222:303–308. doi:10.1006/bbrc.1996.0739。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
小泉S、Shigemoto Mogami Y、Nasu-Tada K、Shinozaki Y、Ohsawa K、Tsuda M、Joshi BV、Jacobson KA、Kohsaka S、Inoue K。作用于P2Y6受体的UDP是小胶质细胞吞噬作用的介体。自然。2007;446:1091–1095. doi:10.1038/nature05704。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Warny M、Aboudola S、Robson SC、Sevigny J、Communi D、Soltoff SP、Kelly CP.P2Y（6）核苷酸受体调节单核细胞白细胞介素-8的产生，以响应UDP或脂多糖。生物化学杂志。2001;276:26051–26056. doi:10.1074/jbc。M102568200。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Webb TE、Kaplan MG、Barnard EA。6H1作为P2Y嘌呤受体的鉴定：P2Y5。生物化学与生物物理研究委员会。1996;219:105–110. doi:10.1006/bbrc.1996.0189。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Li Q、Schachter JB、Harden TK、Nicholas RA。声称是p2y5受体的6H1孤儿受体并不介导核苷酸促进的第二信使应答。生物化学与生物物理研究委员会。1997;236:455–460. doi:10.1006/bbrc.1997.6984。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Metpally RP，Sowdhamini R.人类和果蝇G蛋白偶联受体的跨基因组系统发育分析：应用于孤儿受体的功能注释。BMC基因组学。2005;6：106.网址：10.1186/1471-2164-6-106。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Hanley PJ、Musset B、Renigunta V、Limberg SH、Dalpke AH、Sus R、Heeg KM、Preisig-Muller R、Daut J.细胞外ATP诱导细胞内Ca2+和膜电位振荡，并促进巨噬细胞中IL-6的转录。美国国家科学院院刊。2004;101:9479–9484. doi:10.1073/pnas.0400733101。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Chen Y、Corriden R、Inoue Y、Yip L、Hashiguchi N、Zinkernagel A、Nizet V、Insel PA、Junger WG。ATP释放通过P2Y2和A3受体引导中性粒细胞趋化。科学。2006;314:1792–1795. doi:10.1126/science.1132559。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Straub RH、Pongratz G、Gunzler C、Michna A、Baier S、Kees F、Falk W、Scholmerich J。内源性和外源性腺苷以及外源性嘌呤能激动剂对脾组织切片中IL-6分泌的免疫调节。神经免疫杂志。2002;125:73–81. doi:10.1016/S0165-5728（02）00035-8。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Guerra AN、Fisette PL、Pfeiffer ZA、Quinchia-Rios BH、Prabhu U、Aga M、Denlinger LC、Guadarrama AG、Abozeid S、Sommer JA、Proctor RA、Bertics PJ。嘌呤能受体对脂多糖诱导的信号传导和病理生理的调节。内毒素研究杂志。2003;9:256–263.[公共医学][谷歌学者]
Sasaki Y、Hoshi M、Akazawa C、Nakamura Y、Tsuzuki H、Inoue K、Kohsaka S。大鼠脑小胶质细胞中Gi/o-coupled ATP受体P2Y12的选择性表达。格利亚。2003;44:242–250. doi:10.1002/glia.10293。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Lee BC、Cheng T、Adams GB、Attar EC、Miura N、Lee SB、Saito Y、Olszak I、Dombkowski D、Olson DP、Hancock J、Choi PS、Haber DA、Luster AD、Scadden DT。P2Y样受体GPR105（P2Y14）识别并介导骨髓造血干细胞的趋化性。基因发育。2003;17:1592–1604. doi:10.10101/gad.1071503。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Tokuwa Y，Takuwa N，Sugimoto N。溶血磷脂的Edg家族G蛋白偶联受体：其信号特性和生物活性。生物化学杂志（东京）2002;131:767–771.[公共医学][谷歌学者]
Hornuss C、Hammermann R、Fuhrmann M、Juergens UR、Racke K。人和大鼠肺泡巨噬细胞表达多种EDG受体。欧洲药理学杂志。2001;429:303–308. doi:10.1016/S0014-2999（01）01329-2。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Garg SK、Volpe E、Palmieri G、Mattei M、Galati D、Martino A、Piccioni MS、Valente E、Bonanno E、De Vito P、Baldini PM、Spagnoli LG、Colizzi V、Fraziano M.Sphingosine 1-磷酸盐在体内外均可诱导抗菌活性。传染病杂志。2004;189:2129–2138. doi:10.1086/386286。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Weigert A、Johann AM、von Knethen A、Schmidt H、Geisslinger G、Brune B。凋亡细胞通过释放抗凋亡介质1-磷酸鞘氨醇促进巨噬细胞存活。鲜血。2006;108:1635–1642. doi:10.1182/bloud-2006-04-014852。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Hellebrand S、Schaller HC、Wittenberger T。人类和小鼠中具有相同蛋白质序列的脑特异性G蛋白偶联受体GPR85映射到人类染色体7q31。Biochim生物物理学报。2000;1493:269–272.[公共医学][谷歌学者]
Hellebrand S、Wittenberger T、Schaller HC、Hermans-Borgmeyer I.Gpr85是G蛋白偶联受体家族的一个新成员，在发育中的小鼠大脑皮层中显著表达。脑Res基因表达模式。2001;1:13–16. doi:10.1016/S1567-133X（01）00002-3。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Matsumoto M、Beltaifa S、Weickert CS、Herman MM、Hyde TM、Saunders RC、Lipska BK、Weinberger DR、Kleinman JE。成人、猴子和大鼠前脑中SREB2（GPR85）的保守mRNA表达谱。大脑研究摩尔大脑研究。2005;138:58–69. doi:10.1016/j.molbraineres.2005.04.002。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Salzet M.无脊椎动物分子神经免疫过程。大脑研究大脑研究修订。2000;34:69–79. doi:10.1016/S0165-0173（00）00041-2。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Ransohoff RM，Liu L，Cardona AE。趋化因子和趋化因子受体：神经炎症中的多功能参与者。神经生物学国际评论。2007;82:187–204.[公共医学][谷歌学者]
Bouchard C，Page J，Bedard A，Tremblay P，Vallieres L.G蛋白偶联受体84，一种在神经炎症条件下表达的小胶质细胞相关蛋白。格利亚。2007;55:790–800. doi:10.1002/glia.20506。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Auffray C、Fogg D、Garfa M、Elain G、Join-Lambert O、Kayal S、Sarnaki S、Cumano A、Lauvau G、Geissmann F。通过具有巡逻行为的单核细胞群监测血管和组织。科学。2007;317:666–670. doi:10.1126/science.114283。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Kucia M、Jankowski K、Reca R、Wysoczynski M、Bandura L、Allendorf DJ、Zhang J、Ratajczak J、Ratajczak-MZ.CXCR4-SDF-1信号、运动、趋化和粘附。分子历史杂志。2004;35:233–245. doi:10.1023/B:HIJO.00000355.66152.b8。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Birkenbach M、Josefsen K、Yalamanchili R、Lenoir G、Kieff E.Epstein-Barr病毒诱导的基因：第一个淋巴细胞特异性G蛋白偶联肽受体。J维罗尔。1993;67:2209–2220. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
Clevers H.Wnt/β-catenin在发育和疾病中的信号传导。单元格。2006;127:469–480. doi:10.1016/j.cell.2006.10.018。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Cohen SM，Di Nardo S.无翼：从胚胎到成年。趋势Genet。1993;9:189–192. doi:10.1016/0168-9525（93）90112-U。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Dierick H，Bejsovec A.无翼/Wnt信号转导的细胞机制。当前最高开发生物。1999;43:153–190.[公共医学][谷歌学者]
Klingensmith J，Nusse R.《果蝇无翼信号》。开发生物。1994;166:396–414. doi:10.1006/dbio.1994.1325。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Gordon MD、Dionne MS、Schneider DS、Nusse R.WntD是果蝇发育和免疫中Dorsal/NF-kappaB的反馈抑制剂。自然。2005;437:746–749. doi:10.1038/nature04073。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Blumenthal A、Ehlers S、Lauber J、Buer J、Lange C、Goldmann T、Heine H、Brandt E、Reiling N。无翼同源物WNT5A及其受体Frizzled-5调节微生物刺激诱导的人类单核细胞的炎症反应。鲜血。2006;108:965–973. doi:10.1182/bloud-2005-12-5046。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Dorsch M，Qiu Y，Soler D，Frank N，Duong T，Gooderl A，O'Neil S，Lora J，Fraser CC。PK1/EG-VEGF诱导单核细胞分化和活化。白细胞生物学杂志。2005;78:426–434. doi:10.1189/jlb.0205061。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Kohno M，Hasegawa H，Inoue A，Muraoka M，Miyazaki T，Oka K，Yasukawa M。鉴定N-花生四烯酸甘氨酸作为孤儿G蛋白偶联受体GPR18的内源性配体。生物化学与生物物理研究委员会。2006;347:827–832. doi:10.1016/j.bbrc.2006.06.175。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Burstein SH、Rossetti RG、Yagen B、Zurier RB。anandamide的氧化代谢。前列腺素类其他脂质介质。2000;61:29–41. doi:10.1016/S0090-6980（00）00053-8。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Huang SM、Bisono T、Petros TJ、Chang SY、Zavitsanos PA、Zipkin RE、Sivakumar R、Coop A、Maeda DY、De Petrocellis L、Burstein S、Di Marzo V、Walker JM。一类新分子花生四烯酸的鉴定，以及抑制疼痛的一个成员的特征。生物化学杂志。2001;276:42639–42644. doi:10.1074/jbc。M107351200。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Nemeth ZH、Lutz CS、Csoka B、Deitch EA、Leibovich SJ、Gause WC、Tone M、Pacher P、Vizi ES、Hasko G.腺苷通过A2B受体介导的转录后机制增加巨噬细胞产生IL-10。免疫学杂志。2005;175:8260–8270. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
Bouma MG、Stad RK、van den Wildenberg FA、Buurman WA。腺苷对活化的人单核细胞释放细胞因子的差异调节作用。免疫学杂志。1994;153:4159–4168.[公共医学][谷歌学者]
Hasko G、Szabo C、Nemeth ZH、Kvetan V、Pastores SM、Vizi ES。腺苷受体激动剂对RAW 264.7巨噬细胞和内毒素血症小鼠的IL-10、TNF-α和一氧化氮的生成有不同的调节作用。免疫学杂志。1996;157:4634–4640.[公共医学][谷歌学者]
Link AA、Kino T、Worth JA、McGuire JL、Crane ML、Chrousos GP、Wilder RL、Elenkov IJ。腺苷A2a受体的配体活化抑制人单核细胞产生IL-12。免疫学杂志。2000;164:436–442.[公共医学][谷歌学者]
McWhinney CD、Dudley MW、Bowlin TL、Peet NP、Schook L、Bradshaw M、De M、Borcherding DR、Edwards CK.，巨噬细胞上腺苷A3受体的第三次激活抑制肿瘤坏死因子α。欧洲药理学杂志。1996;310:209–216. doi:10.1016/0014-2999（96）00272-5。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Hasko G、Kuhel DG、Chen JF、Schwarzschild MA、Deitch EA、Mabley JG、Marton A、Szabo C.腺苷通过腺苷A2a受体依赖性和独立机制抑制IL-12和TNF-α的生成。法赛布·J。2000;14:2065–2074. 网址：10.1096/fj.99-0508com。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Wu Z，爱尔兰共和国。受短寡核苷酸阵列杂交理论启发的随机模型。计算机生物学杂志。2005;12:882–893. doi:10.1089/cmb.2005.12.882。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Zhijin Wu RAI，Robert绅士，Francisco Martinez-Murillo FS。基于模型的背景调整寡核苷酸表达阵列。约翰霍普金斯大学生物统计系工作论文。2004
Flower DR。药物设计中G蛋白偶联受体的建模。Biochim生物物理学报。1999;1422:207–234.[公共医学][谷歌学者]
Gether U，Kobilka BK.G蛋白偶联受体。二、。激动剂激活的机制。生物化学杂志。1998;273:17979–17982. doi:10.1074/jbc.273.29.17979。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
Pierce KL、Premont RT、Lefkowitz RJ。七种跨膜受体。Nat Rev Mol细胞生物学。2002;三:639–650. doi:10.1038/nrm908。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]

文章来自免疫学研究由以下人员提供BMC公司