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分子细胞生物学。1996年8月；16(8): 4337–4348.
数字对象标识：10.1128立方米16.8.4337
预防性维修识别码：PMC231432型
PMID：8754834

通过选择CpG-岛富集DNA的基因组片段分离新的维甲酸反应基因。

M沙戈和V Giguére公司
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摘要

转录因子研究的主要目标之一是阐明由因子或密切相关因子家族成员控制的遗传网络。维甲酸（PA）在发育中和成年动物中的多效性效应由属于核受体超家族的配体诱导转录因子（RA受体[RARs]和维甲酸X受体[RXRs]）介导。PA效应器基因的调控区域包含RAR和RXR结合位点（RAR元件[RAREs]和RXR-元件[RXREs]），通常由核心半位点基序（A/G）G（G/T）TCA的直接或反向重复组成。为了识别RA调控的新基因，我们设计了一种选择策略，其前提是CpG岛DNA中包含大量管家和组织特异性基因的调控区域。在这种被称为CpG选择和扩增结合的方法中，通过使用体外转录和翻译的RXR-RR的凝胶迁移率转移测定来选择源自小鼠基因组的CpG岛部分的片段。多轮选择加上PCR扩增片段，使我们能够克隆出一批CG丰富的片段，其中大约五分之一包含一致的RARE或RXRE。描述了12个含有新反应元件的基因组片段，并对其中一个反应元件NN-84AG的转录单元进行了详细表征。小鼠NN-84AG转录物在F9胚胎癌细胞中被RA上调，与表达的序列标签同源(EST41159标准)源自人类婴儿大脑cDNA文库。小鼠NN8-4AG基因组序列的克隆将RXRE置于基因转录起始位点附近。虽然序列分析表明EST41159标准基因产物是一种新颖的氨基酸区域，与功能未知的酵母多肽序列一致，果蝇三胸蛋白表明存在进化和功能保守的结构域。我们的研究表明，通过选择来自基因组CpG岛部分的片段，可以识别转录因子结合位点和相应的调控基因。

全文

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