跳到主要内容
访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
致癌物。作者手稿；PMC 2008年3月17日提供。
以最终编辑形式发布为：
致癌物。2008年1月31日；27(6): 831–838.
2007年7月16日在线发布。 数字对象标识：10.1038/sj.onc.110681
预防性维修识别码：PMC2268644型
NIHMSID公司：美国国家卫生研究院37214
PMID：17637738

线粒体DNA增加诱导头颈癌细胞获得性多西紫杉醇耐药

T水町,1 S铃木,1,2 奈托,1 J陶瓷制品,1 TT埃文斯,1 PM弹簧,三 N原始数据,2 Y Furuta公司,2 S福田,2和M Higuchi先生1
作者信息 版权和许可信息 PMC免责声明

关联数据

补充资料

摘要

多西紫杉醇是最有效的癌症化疗药物之一；然而，一些患者产生了耐药性。不幸的是，其原因和机制仍然未知。我们从人喉癌HEp2中创建了耐多西他赛的DRHEp2，并研究了线粒体DNA（mtDNA）和活性氧在多西他塞耐药中的作用。DRHEp2显著增加了线粒体DNA含量。通过溴化乙锭处理降低DRHEp2中mtDNA含量降低了抗性。这些结果表明线粒体呼吸链（MRC）中线粒体DNA编码酶在耐药机制中可能发挥的作用。寡霉素A是Fo-ATP酶抑制剂，可消除DRHEp2中的多西紫杉醇耐药性。相反，其他MRC抑制剂则没有。靶向Fo-ATPase d亚单位的RNA干扰恢复了多西他赛诱导的对DRHEp2的细胞毒性。这些结果表明Fo-ATPase在抗性机制中的作用。多西他赛诱导HEp2而非DRHEp2产生ROS，抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯消除了多西他塞诱导的细胞毒性，表明ROS在多西他素诱导的细胞死亡中的作用。此外，寡霉素A对Fo-ATP酶的抑制诱导了多西他赛介导的DRHEp2中ROS的产生。总之，DRHEp2通过增加Fo-ATPase获得多西他赛耐药，这导致多西他素诱导的ROS生成减少，随后抑制细胞死亡。总之，mtDNA通过调节Fo-ATPase减少ROS生成，在多西紫杉醇耐药性的形成中起着重要作用。

关键词：多西紫杉醇、耐药性、头颈癌、线粒体DNA、Fo-ATP酶

引言

多西他赛广泛用于治疗乳腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌和头颈癌，是临床上最有效的化疗药物之一(Crown和O'leary，2000年;Schrijvers和Vermorken，2005年). 细胞毒性源于其促进微管蛋白聚合和形成稳定微管的能力。稳定的微管对生理刺激的分解具有抵抗力，因此细胞会积累杂乱排列的微管。这导致阻止G细胞周期2-M期，干扰有丝分裂，最终导致细胞凋亡。

尽管多西紫杉醇很有用，但多西紫杉醇获得性耐药性的发展经常发生，这是一个显著的临床问题。已经提出了获得性耐药性的几种可能机制，包括mRNAβ-微管蛋白等型表达的改变(沙利等。, 2005)β-微管蛋白水平的调节(沙利等., 2005)，P-糖蛋白高表达(比斯里等。1995年;线路接口单元等。, 2001)，p27的减少表达(棕色等., 2004)和硫氧还蛋白的高表达(基姆等., 2005). 然而，该机制尚未完全理解。了解多西紫杉醇耐药性对设计克服耐药性的策略至关重要。

线粒体在细胞能量代谢、活性氧（ROS）的产生和细胞凋亡中发挥着重要作用。除了细胞核，线粒体是哺乳动物细胞中唯一携带基因组的其他细胞器。人类线粒体DNA（mtDNA）是一种16.6-kb的环状双链DNA分子，每个细胞中存在大量拷贝；数量因细胞类型而异。线粒体DNA编码13种参与呼吸和氧化磷酸化的多肽、2个rRNA和一组线粒体内蛋白质合成所必需的22个tRNA。

各种类型的癌症中都有线粒体DNA的改变(Carew和Huang，2002年)和多个报告(樋口等., 1997;樋口等., 2006;列夫尔等., 2005;钱等., 2005)表明mtDNA在细胞对癌症治疗药物的敏感性中起重要作用。线粒体呼吸链（MRC）是ROS的主要来源。最近的研究(卡波罗西等., 2003;沙夫等., 2002)揭示了多种抗癌药物通过改变涉及ROS的信号通路诱导细胞死亡。当细胞暴露于化疗药物时，线粒体及其周围ROS生成速率增加(沙夫等., 2002;铃木等., 1999). 为了研究多西他赛耐药的机制，我们使用人类喉癌（HEp2）细胞创建多西他素耐药细胞（DRHEp2。

结果

多西紫杉醇治疗建立多西紫杉醇耐药DRHEp2

按照材料和方法中的描述，通过剂量递增的多西紫杉醇暴露选择多西紫杉醇耐药细胞。我们研究了多西他赛对HEp2和DRHEp2的细胞毒性作用。多西紫杉醇的剂量-反应曲线表明，DRHEp2细胞对多西紫杉醇的耐药性是HEp2的75倍以上(图1).

保存图片、插图等的外部文件。对象名为nihms37214f1.jpg

多西他赛对HEp2和DRHEp2的影响。HEp2（●）和DRHEp2。按照材料和方法中的描述评估细胞存活率。对于每个细胞系，100%的细胞存活率设置为OD550无多西紫杉醇培养的细胞。结果显示为六个重复井的平均±标准误差。*，P（P）<.001，使用双尾非配对学生的t吨将经处理的细胞与未经处理的细胞进行比较。

DRHEp2增加了线粒体DNA的数量

为了评估线粒体DNA在获得性多西他赛耐药机制中的作用，我们使用线粒体全长基因组的PCR扩增来检测HEp2和DRHEp2单细胞的线粒体DNA。我们从1个细胞和50个HEp2和DRHEp2细胞池中提取mtDNA，并检测mtDNA的数量。来自一个细胞的野生型mtDNA（16-kb带）(图2a)在DRHEp2中检测到，但在HEp2未检测到。我们可以在两种细胞系中检测到少量的线粒体DNA缺失形式，但缺失形式与野生型线粒体DNA的比率没有改变。这些结果表明，与HEp2相比，DRHEp2增加了线粒体DNA的数量。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为nihms37214f2.jpg

DRHEp2中mtDNA含量增加。(一)提取单个细胞的DNA并进行长距离巢式PCR。野生型mtDNA可见16kb的条带。(b条)对HEp2和DRHEp2的总DNA（1μg）进行Southern blot分析并探测mtDNA。(c（c）)HEp2和DRHEp2的耗氧量按照材料和方法中的描述进行检测。结果显示为平均值±标准偏差。

然后，我们使用1μg来源于HEp2和DRHEp2的DNA进行Southern印迹分析。与HEp2相比，DRHEp2样本中对应于野生型mtDNA的条带显著增加(图2b). 我们可以在两种细胞系中检测到mtDNA的缺失形式，但缺失形式与野生型mtDNA的比率没有改变，这证实了PCR的结果。

然后，通过测量耗氧量检测线粒体呼吸功能。DRHEp2的耗氧量大约是HEp2耗氧量的2.3倍(图2c)可能是通过增加线粒体DNA含量来增强MRC酶活性。

此外，我们检测了减少DRHEp2中增强的mtDNA含量是否可以消除对多西他赛的耐药性。我们用溴化乙锭（EtBr）处理DRHEp2，众所周知，它可以降低mtDNA含量(金和阿塔迪，1989年). 对HEp2、DRHEp2和EtBr处理的DRHEp250个细胞的PCR产物进行检测，并比较野生型mtDNA的带强度。DRHEp2中野生型mtDNA带的强度是HEp2的6.4倍，而HEp2和EtBr处理的DRHEp2中的mtDNA带强度几乎相同(图3a). 如所示图3b，EtBr治疗增加了DRHEp2对多西紫杉醇的敏感性。这些结果表明，DRHEp2中mtDNA的增加与多西他赛耐药表型有关。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为nihms37214f3.jpg

DRHEp2中mtDNA含量和多西紫杉醇耐药性的降低。(一)在相同的琼脂糖凝胶中分离HEp2、DRHEp2和EtBr处理的DRHEp250个细胞的长距离巢式PCR产物，并用溴化乙锭染色。使用Image J软件进行密度分析。条形图表示为三个样本的平均值±标准偏差。(b条)用指定浓度的多西紫杉醇处理EtBr处理的DRHEp2 72小时。对于每个样品，OD550未经多西紫杉醇处理的细胞的死亡率为0%。结果显示为六个重复井的平均±标准误差。*，P（P）<.01，使用双尾未配对学生的t吨将EtBr处理的DRHEp2与DRHEp2进行比较。(c（c）)RT-PCR分析HEp2、DRHEp2和EtBr处理的DRHEp2中MDR1 mRNA。分析甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）作为各自的对照。

接下来，我们分析了来自HEp2、DRHEp2和EtBr治疗的DRHEp2的多药耐药（MDR）1转录物，因为多西他赛被证明是人类P-糖蛋白（P-gp）的底物(威尔斯等。, 1994)多西他赛耐药的机制之一是癌细胞中P-gp的过度表达(比斯里等。1995年). mRNA转录物的密度分析显示MDR1 mRNA的表达为2.0倍（在正常化为甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）后）(图3c). 相比之下，DRHEp2和EtBr处理的DRHEp2在MDR1 mRNA表达水平上没有差异(图3c).

Fo-ATP酶抑制剂寡霉素A可克服DRHEp2对多西紫杉醇的耐药性，但其他线粒体呼吸链（MRC）抑制剂不能克服多西紫杉醇耐药性

我们假设DRHEp2中mtDNA含量的增加导致mtDNA编码的MRC蛋白的表达增加，MRC酶活性的增加是DRHEp2耐docetaxel表型的原因。

我们通过研究特定MRC的抑制是否会消除DRHEp2中的多西紫杉醇耐药性来验证这一假设。DRHEp2在多西他赛存在或不存在的情况下用MRC抑制剂或解偶联剂处理3天，并测量其细胞毒性作用。所用抑制剂的浓度对耗氧量有抑制作用，表明每种抑制剂都抑制其在MRC中的特定位置(补充表1). 解偶联剂羰基氰化物对三氟甲氧基苯腙（FCCP）增加了耗氧量，表明FCCP诱导解偶联(补充表1). 寡霉素A，Fo-ATPase（MRC V）抑制剂(亚当等., 1996)，DRHEp2对多西紫杉醇的敏感性呈剂量依赖性增加(图4a). 相反，其他MRC抑制剂和解偶联剂并不能消除DRHEp2对多西紫杉醇的耐药性(图4a). 接下来，我们分析了ATP酶6和ATP酶8的表达水平，它们是Fo-ATP酶的组成部分，由线粒体DNA编码(安德森等。, 1981)在HEp2、DRHEp2和EtBr处理的DRHEp2。如所示图4b与HEp2相比，DRHEp2的ATP酶6和ATP酶8 mRNA水平分别增加了2.8倍和1.5倍（正常化为GAPDH后）。相反，在EtBr处理的DRHEp2中，我们无法检测到ATPase6和ATPase8的转录物(图4b). 这些结果表明，Fo-ATPase（质子特异性通道）在DRHEp2多西紫杉醇耐药机制中起着重要作用。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为nihms37214f4.jpg

Fo-ATPase在DRHEp2多西他赛耐药中的作用。(一)用不同浓度的多西紫杉醇（0–160 nM）和80 nM鱼藤酮（■）、500μM三氟丙酮（TTFA）（▲）、50 ng/ml抗霉素A（◆）、800μM叠氮化钠（○）、2μg/ml寡霉素A72小时；对照细胞（●）单独用多西紫杉醇治疗。外径550未经处理的对照细胞的存活率为100%。结果显示为六个重复井的平均±标准误差。*，P（P）<.001，使用双尾非配对学生的t吨将用多西他赛和线粒体呼吸链（MRC）抑制剂或解偶联剂处理的细胞与单独用MRC抑制剂或解偶联剂处理的细胞进行比较。(b条)RT-PCR分析HEp2、DRHEp2和EtBr处理的DRHEp2中的ATP酶6和ATP酶8 mRNA。分析甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）作为各自的对照。

抑制Fo-ATPase d亚单位表达增加了多西他赛诱导的DRHEp2细胞毒性

为了确定Fo-ATPase是否在多西他赛耐药中起到致病作用，用Fo-ATPse蛋白复合物d亚单位特异性siRNA转染DRHEp2。转染Fo-ATPase d亚单位小干扰RNA（siRNA）后24-96小时，Fo-ATPlase d亚单位表达显著降低(图5a). 然后我们研究了这种表达减少是否影响多西他赛诱导的DRHEp2细胞毒性。转染Fo-ATPase d亚单位siRNA的细胞对多西紫杉醇的敏感性高于转染阴性对照RNAi的细胞(图5b). 这些结果表明Fo-ATPase在DRHEp2多西紫杉醇耐药机制中发挥作用。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为nihms37214f5.jpg

siRNA转染对DRHEp2中Fo-ATPase d亚单位表达和多西紫杉醇耐药性的影响。(一)DRHEp2用对Fo-ATPase d亚基特异性的Stealth RNAi或非沉默阴性对照转染。在24、48、72和96小时后收集细胞，并使用所示抗体对细胞裂解物进行Western blot分析（右）。(b条)24小时后，用多西他赛治疗转染Fo-ATPase d亚单位（▲）特异性隐形RNAi或非沉默阴性对照（■）的DRHEp2（●）和DRHEp272小时。对于每个样本，100%细胞存活率设为OD550多西他赛未经处理的细胞。结果表示为三次试验的平均值±标准误差。*，P（P）<.001，使用双尾非配对学生的t吨当细胞转染Fo-ATPase d亚单位特异性隐形RNAi，然后用多西紫杉醇处理时，与单独用多西他赛处理的细胞进行比较。

活性氧在多西他赛诱导细胞毒性耐药机制中的作用

一些报告表明，线粒体活性氧在抗癌药物的细胞毒性中起着关键作用；因此，我们首先测试了多西他赛是否增加HEp2和DRHEp2中ROS的生成。用50 nM多西紫杉醇治疗HEp2导致ROS生成增加1.9倍(图6a). 相反，多西他赛略微增加DRHEp2中ROS的生成(图6b). DRHEp2中ROS生成的背景水平比HEp2低26%(图6c).

保存图片、插图等的外部文件。对象名为nihms37214f6.jpg

多西他赛对HEp2和DRHEp2中超氧化物生成的影响。高等教育2(一)和DRHEp2(b条)使用或不使用10或50 nM多西紫杉醇治疗24小时。(c（c）)未经处理的HEp2和DRHEp2中活性氧（ROS）的生成。(d日)用50 nM多西紫杉醇、2μg/ml寡霉素A或两者联合治疗DRHEp2。

为了研究多西他赛介导的细胞死亡是否是由HEp2中多西他塞诱导的活性氧生成引起的，而不是由DRHEp2引起的，HEp2在存在或不存在抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）的情况下用多西他素治疗24小时，并评估细胞存活率。通过结晶紫染色的光谱分析，我们发现多西紫杉醇对HEp2具有剂量依赖性细胞毒性，PDTC几乎完全消除了细胞毒性作用(图7a). 为了在视觉上证实这一点，用多西他赛和PDTC处理的细胞被固定并用结晶紫溶液染色，并用倒置显微镜观察(图7b). PDTC大大消除了多西他赛诱导的HEp2细胞死亡。这些结果表明，多西他赛诱导的细胞死亡是由于HEp2中ROS生成增加所致，而DRHEp2 ROS生成减少可能是多西他塞耐药的原因。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为nihms37214f7.jpg

吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）抑制多西他赛诱导的HEp2细胞死亡。(一)HEp2单独使用指定浓度的多西紫杉醇（●）或200μM PDTC（■）治疗24小时。对于每个样品，OD550未经多西紫杉醇治疗的细胞存活率为100%。结果显示为六个重复井的平均±标准误差。*，P（P）<.001，使用双尾非配对学生的t吨将用多西他赛和PDTC处理的细胞与单独用多西他赛处理的细胞进行比较。

(b条)用多西紫杉醇或多西紫杉醇和PDTC处理的HEp2被固定并用结晶紫溶液染色，然后在倒置显微镜下拍照。比例尺=50μm。

多西紫杉醇和寡霉素A在DRHEp2中协同产生活性氧

我们的结果表明，多西他赛诱导的ROS导致HEp2中的细胞死亡，并且DRHEp2中线粒体DNA中编码的Fo-ATP酶的增加抑制了ROS的产生。因此，我们研究了寡霉素A对Fo-ATPase的抑制是否会诱导高质子电位，并在DRHEp2中存在多西紫杉醇的情况下增强ROS生成。

为了验证这一假设，我们研究了在寡霉素A存在的情况下，多西紫杉醇治疗是否会诱导DRHEp2中的ROS生成。单独使用多西紫杉醇或寡霉素A治疗DRHEp2，会导致ROS生成略微增加。相比之下，多西他赛和寡霉素A联合治疗DRHEp2可使ROS生成增加2.3倍(图6d). 这些结果表明，mtDNA增强可能会增加Fo-ATPase活性，从而通过调节质子电位减少多西他赛诱导的ROS生成，最终导致多西他塞获得性耐药。

讨论

这项研究提供了第一个证据，即提高癌细胞中mtDNA的水平可以诱导对化疗药物的细胞毒性产生耐药性的机制。我们证明DRHEp2通过增加Fo-ATPase活性获得多西他赛耐药，这导致多西他素诱导的ROS生成减少。数据表明，寡霉素a治疗或Fo-ATPase d亚单位表达抑制导致DRHEp2中mtDNA水平增加，以及DRHEp2中多西紫杉醇的细胞毒性增加，从而支持Fo-ATP酶在DRHEp2-多西紫杉醇耐药机制中的作用。

在这里，我们报告了增加线粒体DNA数量而不是耗尽线粒体DNA对耐药机制的影响。通过对单个细胞进行长距离巢式PCR和Southern blot分析，我们发现DRHEp2比HEp2含有更多的mtDNA。此外，我们证实DRHEp2中mtDNA的减少增加了对多西紫杉醇的敏感性。对于PCR研究，我们从单个细胞中扩增了全长线粒体基因组。我们用来测量单个细胞中线粒体DNA数量的方法被建立来检测人类心肌细胞线粒体DNA中所有可能的缺失(卡拉普科等., 1999). 与心肌细胞研究不同，我们没有在单个HEp2和DRHEp2中检测到mtDNA的缺失形式。

我们发现DRHEp2中mtDNA含量增加。我们还发现，用EtBr处理DRHEp2 5天，mtDNA含量降低，导致对多西紫杉醇的敏感性增加。5天的EtBr治疗不太可能导致核DNA突变，导致大多数细胞的表型改变为多西他赛敏感，因为突变率有限，选择多西他赛敏感表型的速度也很快。我们还发现，在DRHEp2和EtBr处理的DRHEp2中，MDR1转录物的表达没有差异。这些结果与Cavalli等人的报告一致，表明耐药基因MDR1、多药耐药蛋白或O6-烷基转移酶不受mtDNA含量降低的影响(卡瓦利等。, 1997). 这些结果表明，mtDNA在多西他赛耐药机制中发挥着重要作用，而不依赖于P-gp机制，尽管DRHEp2中MDR1表达的增加可能会导致耐药性。需要进行进一步的研究，以了解线粒体DNA含量与其他抗性机制的关系。

为了研究DRHEp2中mtDNA含量的增加如何导致DRHEp2的多西他赛耐药表型，我们测试了添加特定MRC抑制剂是否会影响多西他塞耐药。我们的结果表明，用寡霉素A（Fo-ATP酶抑制剂）治疗DRHEp2可降低多西紫杉醇耐药性，而靶向其他MRC和MRC解偶联剂的抑制剂不能逆转多西紫杉醇耐药性。一些证据表明，寡霉素A是细胞凋亡的促进剂(锂等., 2004;沃尔夫坦等., 1994); 然而，其他报告表明寡霉素A对细胞凋亡有抑制作用(松山等., 1998;圣玛丽亚等., 2006). 我们的结果表明，寡霉素A促进多西他赛诱导的DRHEp2细胞死亡，多西他赛耐药性与Fo-ATP酶活性水平有关。

此外，用靶向Fo-ATPase d亚单位的siRNA转染DRHEp2可有效抑制蛋白表达并消除耐药性。这些发现为Fo-ATPase在docetaxel耐药机制中发挥作用提供了证据。另一方面，Shin等人报道，结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶（5-FU）的耐药性与MRC V的下调有关。他们表明，寡霉素A拮抗5-FU诱导的细胞增殖抑制，并抑制Fo-ATPase d亚单位的表达，这是siRNA转染所致，5-FU存在下细胞活力增加(小腿等., 2005). 这种差异可能来自5-FU和多西紫杉醇诱导的细胞死亡机制的差异，但需要进一步分析。

我们发现，多西紫杉醇和寡霉素A联合使用可增加DRHEp2中ROS的线粒体生成。这些结果表明，增加线粒体DNA的数量可能会增加Fo-ATPase的活性，从而抑制多西他赛诱导的ROS生成，导致获得性耐药性。寡霉素A增加活性氧生成的机制可以解释如下(Kirkland和Franklin，2007年); 寡霉素A阻断质子通过线粒体Fo-F1 ATP酶。这种阻滞通过增加穿过内膜的质子梯度使线粒体膜电位超极化。线粒体膜电位的超极化可以增加线粒体电子传输链中的电子泄漏，然后这些电子将分子氧还原为超氧化物。我们的结果得到了以下发现的支持：乳腺癌对多西紫杉醇的耐药性可以通过激活控制细胞氧化还原环境的几个基因来介导(岩手小泉等., 2005). 此外，Alexandre等人表明ROS参与紫杉醇的细胞毒性(亚历山大等., 2006).

DRHEp2中mtDNA数量增加的机制尚不清楚。Lee等人报告称，用紫杉醇或低剂量过氧化氢处理人类骨肉瘤细胞后，mtDNA的数量增加(李等., 2005). 他们还表明线粒体在细胞中异常增殖。总的来说，数据表明HEp2的多西他赛治疗可诱导ROS，并且这种氧化应激会在获得多西他塞耐药的过程中增加mtDNA复制。

总之，我们的研究表明，mtDNA通过减少MRC产生的ROS在多西紫杉醇耐药性的发展中起着关键作用，Fo-ATPase可能是克服多西紫杉醇耐药性策略的新靶点。

材料和方法

材料

材料详情见补充信息.

细胞培养

HEp2细胞由日本Kayaku公司（日本东京）提供。将细胞维持在Dulbecco改良的Eagle培养基（DMEM，Gibco，Grand Island，NY）中，该培养基补充有5%热灭活的胎牛血清（Hyclone，Logan，UT），温度为37°C，含5%CO2多西他赛耐药DRHEp2是通过剂量递增的多西他塞暴露选择的。HEp2最初连续接触10 nM多西紫杉醇。最初，细胞生长受到抑制并逐渐恢复。随后，将细胞暴露于20 nM多西紫杉醇，增加至160 nM。DRHEp2维持在添加160 nM多西紫杉醇的培养基中。

细胞存活分析

细胞存活分析的详细信息见补充信息.

单个细胞线粒体DNA的分离与扩增

有关从单个细胞中分离和扩增mtDNA的详细信息，请参阅补充信息.

Southern印迹分析

Southern印迹分析的详细信息见补充信息.

耗氧量测量

耗氧量详情见补充信息.

DRHEp2中的EtBr治疗

DRHEp2在补充有5%FBS、50μg/ml尿苷和100μg/ml丙酮酸钠的Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM）中，在25.6μg/ml EtBr存在下孵育5天，以降低mtDNA含量。

半定量逆转录PCR（RT-PCR）分析

RT-PCR的详细信息见补充信息.

RNA干扰

RNA干扰的详细信息见补充信息.

蛋白质印迹分析

蛋白质印迹分析的详细信息见补充信息.

ROS生成的测量

ROS生成测量的详细信息见补充信息.

统计分析

双尾未配对学生的t吨检验用于评估统计学意义。P（P）<0.01被认为具有统计学意义。

补充材料

材料-Metho

补充信息可在Oncogene的网站上获得。

单击此处查看。（49K，文档）

补充表1

单击此处查看。（38K，文档）

致谢

作者感谢Sanae Yamaguchi（北海道大学医学研究生院耳鼻咽喉头颈外科）提供的技术援助。这项工作得到了太和制药有限公司、阿肯色州烟草定居点和NIH向MH拨款RO1 CA100846的支持。

工具书类

  • Adam D、Wiegmann K、Adam-Klages S、Ruff A、Kronke M。p55肿瘤坏死因子受体的一个新的细胞质域启动中性鞘磷脂酶途径。生物化学杂志。1996;271:14617–14622.[公共医学][谷歌学者]
  • Alexandre J、Batteux F、Nicco C、Chereau C、Laurent A、Guillevin L等。过氧化氢的积累是体内外紫杉醇诱导癌细胞死亡的早期关键步骤。国际癌症杂志。2006;119:41–48.[公共医学][谷歌学者]
  • Anderson S、Bankier AT、Barrell BG、de Bruijn MH、Coulson AR、Drouin J等。人类线粒体基因组的序列和组织。自然。1981;290：457–465。[公共医学][谷歌学者]
  • Bissery MC、Nohynek G、Sanderink GJ、Lavelle F.Docetaxel（Taxotere）：临床前和临床经验综述。第一部分：临床前经验。抗癌药物。1995;6:339–355.[公共医学][谷歌学者]
  • Brown I、Shalli K、McDonald SL、Moir SE、Hutcheon AW、Heys SD等。p27表达减少是乳腺癌细胞对多西他赛耐药的一种新机制。乳腺癌研究。2004年；6：R601–607。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Caporossi D、Ciafre SA、Pittaluga M、Savini I、Farace MG。细胞对H的反应2O（运行）2以及博莱霉素诱导的L6C5大鼠成肌细胞氧化应激。自由基生物学与医学。2003;35:1355–1364.[公共医学][谷歌学者]
  • Carew JS，Huang P.癌症中的线粒体缺陷。分子癌。2002;1:9. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Cavalli LR、Varella Garcia M、Liang BC。线粒体DNA缺失后致瘤表型降低。细胞生长与分化。1997;8:1189–1198.[公共医学][谷歌学者]
  • Crown J，O’Leary M.《紫杉烷类：更新》。柳叶刀。2000;355:1176–1178.[公共医学][谷歌学者]
  • Higuchi M，Aggarwal BB，Yeh ET。CPP32样蛋白酶在肿瘤坏死因子诱导的凋亡中的激活依赖于线粒体功能。临床研究杂志。1997;99:1751–1758. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Higuchi M、Kudo T、Suzuki S、Evans TT、Sasaki R、Wada Y等。线粒体DNA决定前列腺癌细胞系中的雄激素依赖性。致癌物。2006;25:1437–1445. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Iwao-Koizumi K、Matoba R、Ueno N、Kim SJ、Ando A、Miyoshi Y等。通过基因表达谱预测人类乳腺癌中的多西紫杉醇反应。临床肿瘤学杂志。2005;23:422–431.[公共医学][谷歌学者]
  • Khrapko K、Bodyak N、Thilly WG、van Orsouw NJ、Zhang X、Coller HA等。对老年人心脏线粒体全基因组的逐细胞扫描显示，存在大量克隆性扩增缺失的心肌细胞。核酸研究。1999;27:2434–2441. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Kim SJ、Miyoshi Y、Taguchi T、Tamaki Y、Nakamura H、Yodoi J等。硫氧还蛋白的高表达与原发性乳腺癌对多西紫杉醇的耐药性相关。临床癌症研究。2005;11:8425–8430.[公共医学][谷歌学者]
  • King MP，Attardi G.缺乏线粒体DNA的人类细胞：通过互补与外源线粒体重新繁殖。科学。1989年；246:500–503.[公共医学][谷歌学者]
  • Kirkland RA，Franklin JL。Bax影响非凋亡神经元线粒体产生活性氧。实验神经。2007;204:458–461. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Lee CF、Liu CY、Hsieh RH、Wei YH。氧化应激诱导的人类细胞微管解聚和线粒体质量的改变。Ann N Y科学院。2005;1042:246–254.[公共医学][谷歌学者]
  • Li YC，Fung KP，Kwok TT，Lee CY，Suen YK，Kong SK。线粒体靶向药物寡霉素阻断P-糖蛋白活性并触发阿霉素耐药HepG2细胞的凋亡。化疗。2004年；50:55–62.[公共医学][谷歌学者]
  • Lievre A、Chapusot C、Bouvier A-M、Zinzindohoue F、Piard F、Roignot P等。大肠癌线粒体突变的临床价值。临床肿瘤学杂志。2005;23:3517–3525.[公共医学][谷歌学者]
  • Liu B，Staren ED，Iwamura T，Appert HE，Howard JM。胰腺癌中与紫杉醇相关的耐药机制。外科研究杂志。2001;99:179–186.[公共医学][谷歌学者]
  • Matsuyama S、Xu Q、Velours J、Reed JC。线粒体F0F1-ATP酶质子泵是酵母和哺乳动物细胞中促凋亡蛋白Bax功能所必需的。分子细胞。1998年；1:327–336.[公共医学][谷歌学者]
  • Qian W、Nishikawa M、Haque AM、Hirose M、Mashimo M、Sato E等。线粒体密度决定了细胞对顺铂诱导的细胞死亡的敏感性。美国生理学杂志-细胞生理学。2005;289：C1466–1475。[公共医学][谷歌学者]
  • Santamaria G、Martinez-Diez M、Fabrega I、Cuezva JM。在非糖酵解细胞中有效地执行细胞死亡需要产生由线粒体H+-ATP合成酶活性控制的活性氧。致癌。2006;27:925–935.[公共医学][谷歌学者]
  • Schaaf GJ，Maas RFM，de Groene EM，Fink-Gremmels J.血红素氧化酶-1在顺铂诱导的肾小管细胞毒性中对氧化应激的管理。自由基研究。2002;36:835–843.[公共医学][谷歌学者]
  • Schrijvers D，弗吉尼亚州。紫杉醇治疗头颈癌。当前肿瘤学观点。2005;17:218–224.[公共医学][谷歌学者]
  • Shalli K，Brown I，Heys SD，Schofield AC。多西紫杉醇耐药乳腺癌细胞中β-微管蛋白异构体的改变。FASEB杂志。2005;19:1299–1301.[公共医学][谷歌学者]
  • Shin Y-K，Yoo BC，Chang HJ，Jeon E，Hong S-H，Jung M-S，等。诱导5-氟尿嘧啶耐药的人结肠癌细胞线粒体F1F0-ATP合成酶的下调。癌症研究。2005;65:3162–3170.[公共医学][谷歌学者]
  • Suzuki S，Higuchi M，Proske RJ，Oridate N，Hong WK，Lotan R.线粒体衍生活性氧物种、细胞色素C和caspase-3在N-（4-羟基苯基）维生素A诱导宫颈癌细胞凋亡中的意义。致癌物。1999;18:6380–6387.[公共医学][谷歌学者]
  • Wils P、Phung-Ba V、Warnery A、Lechardeur D、Raeissi S、Hidalgo IJ等。人类肠上皮细胞单层中P-糖蛋白介导的多西紫杉醇和长春花碱的极化转运。生物化学药理学。1994;48:1528–1530.[公共医学][谷歌学者]
  • Wolvetang EJ、Johnson KL、Krauer K、Ralph SJ、Linnane AW.线粒体呼吸链抑制剂诱导细胞凋亡。FEBS信函。1994;339:40–44.[公共医学][谷歌学者]