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钙网织蛋白的过度表达增加了快速交换Ca2+储存的Ca2+容量，并揭示了其管腔微环境和功能的各个方面
摘要
将一种分子标记的钙网蛋白（CR）暂时转染到HeLa细胞中，以特异性改变细胞内Ca2+储存的Ca2+缓冲能力。荧光和共聚焦显微镜免疫细胞化学显示，标记蛋白由40%以上的细胞表达，并在其分布中与内源性CR重叠，产生精细的细胞质网络，即ER的典型模式。相反，未观察到与质膜相关的信号（以ConA标记）在细胞核内。一个和二维Western blot显示，转染后的细胞内CR约为内源性CR的3.5倍，并保持其Ca2+结合能力，而其他ER蛋白的表达不变。通过三种平行方法研究转染细胞中的Ca2+稳态：（a）细胞群体的45Ca平衡负荷；（b） 用fura-2测量[Ca2+]c，然后对单个细胞进行定量免疫细胞化学，以及iii）用Ca（2+）敏感的光蛋白（aequorin）共转染后对细胞群进行[Ca2+/]c测量。这三种方法揭示了Ca2+稳态的不同方面，得出的结果在很大程度上是互补的。特别是，我们得出了以下结论：（a）内源性和转染CR均参与了IP3敏感、快速交换、Ca2+储存区内的Ca2+缓冲；相反，其他细胞池未受CR转染的影响；（b） 储存的Ca2+容量不是受体激动剂触发的单个IP3介导的Ca2+释放反应的主要限制因素；（c） 在对照细胞中，CR对IP3敏感存储区内Ca2+缓冲的贡献约占总数的45%，其余可能由其他管腔（以及膜）Ca2+结合蛋白贡献；（d） 通过Ca2+与转染的CR蛋白的结合程度显示，IP3敏感储存物管腔内的游离[Ca2+]等于（或接近）毫摩尔范围内的值；和（e）通过储存物耗尽激活的质膜的Ca2+内流直接依赖于管腔[Ca2+]。
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文章来自细胞生物学杂志由以下人员提供洛克菲勒大学出版社
